经典方剂二至丸补肝益肾作用研究

目的二至丸由墨旱莲、女贞子2味药配伍而成,具有补腰膝、壮筋骨、强肝肾、乌髭发的功效,是补益肝肾的经典代表方。本研究以二至丸为研究对象,以雌雄激素样作用为切入点,阐明二至丸体内药效物质基础,揭示二至丸治疗肝肾阴虚证的化学活性物质和生物学基础,为临床精确使用二至丸提供科学依据,诠释中医“异病同治”科学内涵。方法采用LC-MS、LC-NMR-MS等技术对分离得到的二至丸中化合物进行鉴定,明确二至丸口服吸收入血的化学物质及药动学特征;基于高内涵筛选及报告基因技术确认二至丸及入血成分雌雄激素样活性;利用与肝肾阴虚症状表现类似的动物模型,围绕骨、脂肪及前列腺等组织研究二至丸中雌雄激素样活性成分的作用特点及靶点。结果①基于UHPLC/Q-Orbitrap-MS建立一种同时靶向与非靶向扫描技术,结合离线全二维色谱,从二至丸中在线分离监测7大类共270个化学成分。研究了墨旱莲中7种入血成分的体内代谢过程,结果发现其均符合一室开放药动学模型,大部分在1 h左右血药浓度达到峰值。同时其入血成分最终鉴定4大类共85个代谢产物。②对272个来源于包含二至丸的化合物进行筛选,发现33个化合物在10μmol·L^(-1)浓度下明显促进雌雄激素受体核转位,其中山奈酚、齐墩果酸具有选择性雄激素受体调节剂样作用。③二至丸具有抗骨质疏松作用,其作用的分子机制与降低破骨细胞及脂肪细胞分化;升高成骨细胞分化以及调控肠道菌群有关。④二至丸抑制雌激素不足导致的肥胖。通过AMPK信号通路调节细胞能量稳态平衡,并且作用于雌激素受体以间接调节过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α),从而干预线粒体结构与功能,调节适应性产热,参与脂代谢。⑤二至丸抑制良性前列腺增生(BPH)。二至丸显著减少BPH平滑肌细胞层厚度,下调PCNA表达,显著增加ERβ和MMP-1的表达,有效降低睾酮、E2、DHT、AR、前列腺特异抗原(PSA)、ERα、SRD5A1/2、芳香化酶、p-ERK、α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_(1)和p-Smad3的表达,缓解BP的生物学进程。结论补益肝肾经典方剂二至丸及其成分具有植物雌雄激素样作用;二至丸的植物雌雄激素样作用是其抗绝经期骨质疏松症、绝经期激素不足导致的肥胖症及抑制良性前列腺增生等作用的生物学基础。