椒苯酮胺对脑缺血再灌注大鼠认知障碍的影响

目的观察椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对脑缺血再灌注大鼠认知障碍的影响并探索其机制。方法随机将大鼠分为假手术组、模型组、PPTA组(2.5、5、10 mg/kg)和阳性对照依达拉奉组(6 mg/kg)。采用大鼠大脑中动脉闭塞2 h再灌注模型,缺血1 h后给药。脑缺血再灌注24 h后进行避暗实验。行为学测试后24 h,断头取脑,分离右侧缺血脑区,用RT-PCR方法检测IL-1β、TNF-α、Caspase-3及HSP-70的mRNA表达。结果避暗实验中,与假手术组相比,模型组动物认知能力显著性降低,而PPTA剂量依赖性地逆转了这一效应;伴随认知能力的下降,模型组动物炎症因子(IL-1β和TNF-α),凋亡因子Caspase-3及HSP-70 mRNA水平均显著性增高;与模型组比较,PPTA显著性降低了IL-1βmRNA,TNF-αmRNA,Caspase-3 mRNA及HSP-70 mRNA水平,而阳性对照药依达拉奉组未见对炎症因子产生显著影响。结论 PPTA可能通过改善脑缺血再灌注损伤后引起的炎症及凋亡反应,增加脑组织对缺血再灌注损伤应激的耐受性,从而发挥神经保护作用,可能是PPTA改善认知障碍的机制之一。

新型钙增敏剂左西孟旦和盐酸椒苯酮胺研究进展

新型钙增敏剂左西孟旦对长期服用β受体阻滞剂等药物的心力衰竭患者疗效较好;单用或与地高辛合用对心力衰竭都有一定疗效,口服没有静脉给药疗效明显;用于心脏手术患者可以缩短术后康复时间、降低术后心房颤动发生率,对缺血及再灌注损伤心肌也有保护作用。钙增敏剂盐酸椒苯酮胺也有心肌保护作用,已经完成127例Ⅰ期临床试验,结果显示有良好的耐受性,但疗效及安全性有待进一步确定。本文综述了近年来左西孟旦及盐酸椒苯酮胺的研究进展。

盐酸椒苯酮胺对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤的听力保护作用

目的探讨盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后听功能保护作用及其对耳蜗组织形态的影响。方法将32只成年豚鼠随机分为4组,每组8只,第1组为正常组(不做任何处理),第2组为空白对照组(手术切开颈前正中皮肤,分离出双侧椎动脉、双侧颈总动脉,但不做其它处理),第3组为缺血再灌注对照组(阻断双侧椎动脉及右侧颈总动脉建立豚鼠耳蜗缺血再灌注模型,再灌注同时股静脉给予与PPTA同等剂量生理盐水),第4组为缺血再灌注实验组(手术造模成功后,再灌注同时静脉给予PPTA 10mg/kg)。测量实验前后各组动物的听性脑干反应(ABR)波Ⅲ反应阈。动物造模成功后24小时迅速断头取听泡,每组取4只扫描电镜下观察耳蜗结构、另外4只用透射电镜观察耳蜗结构。结果实验前4组动物ABR波Ⅲ反应阈差异无统计学意义(P>0.05),缺血再灌注24h后第3组ABR波Ⅲ反应阈显著高于第1组和第2组(P<0.05),第4组ABR波Ⅲ反应阈比第3组明显降低(P<0.05);扫描及透射电镜下可见第3组耳蜗外毛细胞纤毛倒伏、脱落,内毛细胞纤毛散乱,血管纹内皮细胞核固缩、边集,神经元可见脱髓鞘改变,而第4组的耳蜗组织损伤明显减轻。结论 PPTA可以防止耳蜗缺血再灌注损伤后毛细胞损伤缺失,对豚鼠耳蜗缺血再灌注听力损伤有保护作用。

盐酸椒苯酮胺通过降低caspase-3表达减轻庆大霉素豚鼠耳蜗损伤

目的研究盐酸椒苯酮胺(PPTA)对庆大霉素耳蜗损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法听力正常豚鼠分3组:正常组、GM组和PPTA组。采用庆大霉素致豚鼠耳蜗损伤模型,PPTA腹腔注射,ABR分析听力变化,Western blot检测耳蜗组织中caspase-3蛋白表达,TUNEL染色、扫描电镜和透射电镜观察形态学改变。结果 ABR反应阈:GM组、PPTA组显著高于正常对照组(P<0.05),PPTA组显著低于GM组;Western blot测caspase-3的表达:结果表明用药后GM组豚鼠caspase-3表达显著增加(P<0.001),PPTA组显著高于正常组但显著低于GM组(P<0.001);TUNEL、扫描和透射电镜观察见:GM组毛细胞损伤严重,耳蜗螺旋器、血管纹和螺旋神经节存在大量凋亡细胞形态;而PPTA组耳蜗组织损伤较GM组明显减轻。结论 PPTA可以通过降低caspase-3蛋白表达抑制凋亡,对庆大霉素豚鼠耳蜗损伤起到保护作用。

盐酸椒苯酮胺致畸敏感期毒性试验

目的评价盐酸椒苯酮胺的安全性,了解其有否致畸变作用。方法用成年Wistar大鼠,从受孕第7天起隔日1次尾静脉注射盐酸椒苯酮胺1、5、20 mg/kg,共4次,覆盖胚胎的器官形成期。于受孕第20天处死动物,解剖观察母鼠及胎鼠内脏与骨骼。结果未见畸变和胚胎毒性。结论盐酸椒苯酮胺的致畸试验为阴性。

冻干工艺及助溶剂聚乙二醇对盐酸椒苯酮胺冻干制剂的影响

目的建立适合盐酸椒苯酮胺的冻干工艺,并考察助溶剂聚乙二醇对盐酸椒苯酮胺制剂性状的影响。方法采用真空冷冻干燥速冻法-30℃预冻3 h和慢冻法-30℃预冻5 h制备盐酸椒苯酮胺冻干制剂,考察其性状,并观察加入不同相对分子质量的聚乙二醇后,冻干样品及其复溶后溶液的外观性状、颜色、澄清度和pH值。结果 2种冻干工艺获得的样品,其外观、溶解性及澄清度无明显差别,水分均<5%。加聚乙二醇冻干后的样品性状好,加水后易溶、澄清、无附着现象,但放置一段时间后颜色变黄,复溶后的溶液稍放一段时间后也变黄。结论 2种冻干工艺均可用于生产盐酸椒苯酮胺冻干制剂,优选慢冻法,聚乙二醇不适宜作为盐酸椒苯酮胺的助溶剂。

盐酸椒苯酮胺对耳蜗缺血再灌注后白介素-1β、肿瘤坏死因子-α mRNA 及Fas蛋白表达的影响

目的探讨豚鼠耳蜗白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、Fas蛋白表达与耳蜗缺血再灌注损伤关系及盐酸椒苯酮胺(PPTA)对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤保护机制。方法豚鼠64只随机分为4组,每组16只,分别为正常组、空白对照组、缺血再灌注对照组和缺血再灌注PPTA组,每组随机选6只用于RT-PCR检测,剩余10只用于免疫组化。微血管夹夹闭双侧椎动脉及右侧颈总动脉1 h松开动脉夹以制造耳蜗缺血模型,缺血再灌注PPTA组于缺血1 h再灌注后立即经股静脉注射PPTA(10 mg/kg),缺血再灌注对照组注射等量生理盐水,24 h后取标本。用RT-PCR法检测IL-1β和TNF-α的mRNA的表达。结果缺血再灌注对照组耳蜗组织IL-1β、TNF-αmRNA表达量显著高于正常组和空白对照组(P<0.001);缺血再灌注PPTA组耳蜗组织IL-1βmRNA、TNF-αmRNA表达量显著低于缺血再灌注对照组(P<0.001);缺血再灌注组Corti器、螺旋神经节和血管纹Fas表达阳性,积分光密度值(IOD)值较其它三组明显增高(P<0.05),缺血再灌注PPTA干预组IOD值与正常组及空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PPTA可抑制缺血再灌注耳蜗各部位IL-1β、TNF-αmRNA、Fas蛋白表达;PPTA可能通过抑制炎性反应及抑制细胞凋亡实现对耳蜗缺血再灌注损伤的拮抗作用。

椒苯酮胺在比格犬体内的药代动力学研究

目的研究椒苯酮胺(peperphentonamine,PPTA)在比格犬体内的药代动力学过程。方法比格犬iv PPTA 2.63,5和10mg.kg-1,用反相HPLC-UV法测定在不同时间血液中的药物浓度。结果比格犬iv PPTA其体内过程符合二室模型,三个剂量的血浆清除半衰期t1/2分别为0.76±0.10、1.26±0.46、1.32±0.35min,各剂量组间无显著性差异(P>0.05);药时曲线下面积AUC分别为4905±1421、10253±3616、24256±5471 ng.min.mL-1(比例为1:2.1:4.9),与给药剂量成正比例增加,具有良好的线性关系(r=0.9988)。结论PPTA在2.63￣10mg.kg-1范围内给比格犬给药,其药时曲线符合二室模型,A U C增加与剂量增加成比例,显示出线性动力学特征。

盐酸椒苯酮胺冻干制剂辅料筛选

目的考察适合盐酸椒苯酮胺冻干制剂的辅料。方法配制含不同质量分数辅料的盐酸椒苯酮胺溶液(2 mg/mL,5 mL/支),包括甘露醇、蔗糖、乳糖、甘氨酸、右旋糖酐,经冻干后观察制剂的外观、含量、澄清度、颜色、pH等特性,以筛选盐酸椒苯酮胺冻干制剂的辅料。结果冻干制剂复溶后,甘露醇组出现乳浊;3%～5%蔗糖组色偏深;甘氨酸组乳浊并色偏深;乳糖和右旋糖酐组的外观、含量、澄清度、颜色均较佳。结论优选乳糖作为盐酸椒苯酮胺冻干制剂的辅料。

盐酸椒苯酮胺对新西兰兔心电图QT间期的影响

旨在观察不同剂量盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对新西兰兔心电图QT间期(从QRS波开始到T波结束时的时限)的影响。将40只新西兰兔随机分为5组,每组8只,分别为溶剂对照组(5%葡萄糖)、PPTA低(2.5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(25mg/kg)剂量组以及阳性对照组(9mg/kg索他洛尔),采用体表心电图技术,通过Pclab-530C生物医学信号采集处理系统记录各组新西兰兔注射相应药物后PPTA标准肢体Ⅱ导联心电图变化。结果表明,2.5mg/kg、10mg/kg PPTA在缓慢给药后不引发QT间期延长,25mg/kg PPTA在缓慢给药后15min内引起QT间期轻度延长(P<0.05);PPTA对QT间期的影响主要发生在给药后0~15min,45min后基本恢复正常。因此,低、中剂量盐酸椒苯酮胺(PPTA)不引发新西兰兔心电图QT间期延长,安全性较高,高剂量可能有引发QT间期延长风险,提示在临床用药时需要注意药物使用剂量,以防QT间期延长和心律失常的发生。

注射用盐酸椒苯酮胺稳定性考察

目的:考察注射用盐酸椒苯酮胺稳定性。方法:依据《中国药典》要求,进行了注射用盐酸椒苯酮胺稳定性试验,包括:影响因素试验;加速试验;长期试验。结果:考察2年结果显示,三批样品的外观性状、熔点、溶液的颜色和澄清度、pH、干燥失重、含量均无显著变化,单个及总有关物质有所增加。结论:本品以棕色玻璃瓶包装,在常温阴凉处保存,有效期暂定2年。

盐酸椒苯酮胺对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨盐酸椒苯酮胺（piperphentonamine hydrochloride，PPTA）对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury，I/RI）后凋亡细胞的保护。方法将24只豚鼠随机分为正常组、假手术组、I/RI组、PPTA组4组，每组6只。采用TUNEL法观察耳蜗细胞凋亡情况，计算凋亡指数（apoptotic index，AI），组间比较检测结果。结果正常组、假手术组和PPTA组耳蜗没有或仅个别部位有凋亡细胞，I/RI组凋亡细胞明显多于其它3组。结论细胞凋亡是耳蜗I/RI的一种损伤形式，PPTA可能通过减少细胞凋亡对I/RI耳蜗起保护作用。

HPLC法和非水碱量法测定盐酸椒苯酮胺含量比较

目的:比较两种盐酸椒苯酮胺含量测定的方法。方法:采用HPLC法和非水碱量法,在线性、精密度、稳定性以及专属性方面进行方法学确证,并比较二者测定3批盐酸椒苯酮胺含量的差异。结果:两种方法在线性、精密度、稳定性以及专属性方面均符合要求,定量限为0.02μg·ml^(-1)。结论:HPLC法与非水碱量法的测定结果一致,均可用于盐酸椒苯酮胺的含量测定。

注射用盐酸椒苯酮胺配伍稳定性研究

目的考察注射用盐酸椒苯酮胺在不同制剂中的配伍稳定性。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定注射用盐酸椒苯酮胺在10%葡萄糖注射液(pH=4.4)、5%葡萄糖注射液(pH=4.8)、5%葡萄糖氯化钠注射液(pH=3.9)和0.9%氯化钠注射液(pH=5.1)中的溶液澄清度、颜色、澄明度,并测定2,6,12,24 h时含量变化。结果本品在酸性液体中稳定,加入10%葡萄糖、5%葡萄糖或5%葡萄糖氯化钠注射液中,24 h内稳定性良好。结论本品可加入葡萄糖注射液或5%葡萄糖氯化钠注射液中使用,不宜加入0.9%氯化钠注射液中使用。

盐酸椒苯酮胺对Beagle犬的长期毒性研究

目的:观察连续静脉滴注盐酸椒苯酮胺对Beagle犬产生的长期毒性作用,评价其安全性。方法:取Beagle犬30只,♀♂各半,分成5组,分别为盐酸椒苯酮胺6、12、24、48 mg/kg 4个剂量组和阴性对照组(5%葡萄糖,24 ml/kg),静脉滴注给药,每天1次,连续30 d。检测各组犬的一般生理指标、17项血液生化指标,观察多个部位组织切片的病理变化。结果:24、48 mg/kg盐酸椒苯酮胺组有部分犬在输液完毕后出现一过性平衡或运动失调、四肢无力,一段时间后逐渐恢复;48 mg/kg盐酸椒苯酮胺组犬给药后第15、30天,血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)与给药前比较水平升高(P<0.05或P<0.01)。各剂量组犬其他生理指标及其余16项血浆生化指标均未观察到能表明被试药物可致毒性反应的异常改变。病理组织学检查中,24、48 mg/kg盐酸椒苯酮胺组部分犬可见注射部位肿胀,显微镜检查可见注射部位水肿和慢性炎细胞浸润。结论:盐酸椒苯酮胺对Beagle犬的无毒性反应剂量为12 mg/kg,安全剂量范围较大,该结论可作为其临床用药依据。

鼓阶微孔注入盐酸椒苯酮胺对豚鼠庆大霉素耳蜗损伤的保护作用

目的观察盐酸椒苯酮胺(peperphentonamine hydrochloride,PPTA)对豚鼠庆大霉素(gentamicin,GM)耳蜗损伤的保护作用及机制。方法将听力正常的45只健康豚鼠随机分为空白对照组、GM组和PPTA组,每组15只。空白对照组行鼓阶开窗微孔注入人工外淋巴液10μl/d,连用3天;GM组给GM 160mg·kg-1·d-1肌肉注射,连用3天;PPTA组行鼓阶开窗微孔技术注入PPTA 10μl/d和肌肉注射GM 160mg·kg-1·d-1注,连用3天。分别于用药前和用药3天后对三组动物行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试;第二次ABR测试后处死豚鼠,取出耳蜗,检测各组豚鼠耳蜗组织中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,并以扫描电镜和透射电镜观察耳蜗细胞形态学改变。结果空白对照组、GM组、PPTA组ABR反应阈实验前比较差异无统计学意义,用药三天后分别为12.75±3.80、47.75±11.08、23.47±9.21dB SPL,各组间比较差异有统计学意义(P<0.001);空白对照组、GM组、PPTA组SOD值比值分别为50.24±9.08、28.23±4.95、43.09±4.59U/mgprot,PPTA组SOD值显著高于GM组(P<0.001);空白对照组、GM组、PPTA组GSH值分别为3.03±0.33、1.51±0.13、2.50±0.16Ggsh/L,PPTA组GSH值显著高于GM组(P<0.001);扫描电镜观察PTTA组耳蜗各回外毛细胞肿胀、倒伏、缺失等较GM组轻,内毛细胞正常,而GM组内毛细胞亦有轻微损伤;透射电镜观察PPTA组耳蜗毛细胞肿胀、线粒体体聚集等改变明显轻于GM组。结论经鼓阶开窗微孔技术注入PPTA可通过清除GM产生的过量氧自由基从而发挥耳蜗保护作用。

盐酸椒苯酮胺稳定性考察

目的考察盐酸椒苯酮胺的稳定性。方法依据2010年版《中国药典(二部)》附录"药物稳定性试验指导原则"的有关技术要求,进行盐酸椒苯酮胺稳定性试验,包括影响因素试验、加速试验、长期试验。结果2年考察结果显示,3批样品的外观性状、熔点、溶液颜色和澄清度、pH、干燥失重、含量均无显著变化,单个及总有关物质含量有所增加。结论盐酸椒苯酮以塑料瓶包装,在常温阴凉处保存,有效期暂定2年。

盐酸椒苯酮胺对庆大霉素致豚鼠耳蜗传入神经损伤的保护作用

目的:研究盐酸椒苯酮胺(PPTA)对庆大霉素(GM)致耳蜗传入神经损伤的保护作用。方法:36只豚鼠随机分3组。正常组:等量生理盐水肌肉注射;GM组:肌肉注射GM 100 mg/(kg·d),14 d;PPTA组:GM致聋并腹腔注射PPTA,10 mg/(kg·d),14 d。听性脑干反应分析听力变化,Western blot检测耳蜗Caspase-3蛋白表达,TUNEL染色后计算细胞凋亡指数,透射电镜观察形态学改变。结果:实验结束后正常组、GM组和PPTA组阈值分别为14.58±1.16、65.95±1.17、36.13±1.17;凋亡指数:1.09±0.14、23.17±0.88、8.84±0.49;Caspase-3蛋白:1.09±0.11、2.55±0.20、1.67±0.07,以上指标各组间差异均有显著性(P<0.05)。形态学观察:GM组耳蜗存在大量凋亡细胞,突触结构破坏严重;PPTA组损伤较轻。结论:PPTA对GM致豚鼠耳蜗传入神经损伤有保护作用。

盐酸椒苯酮胺致突变实验

目的探讨盐酸椒苯酮胺的致突变性。方法用Ames试验、昆明种小鼠骨髓微核试验及中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验研究盐酸椒苯酮胺的致突变性。结果盐酸椒苯酮胺Ames试验,小鼠微核试验及中国仓鼠肺细胞染色体畸变三项试验结果均为阴性。结论盐酸椒苯酮胺无致突变作用。

盐酸椒苯酮胺对庆大霉素所致豚鼠听力损伤的保护作用

目的观察豚鼠耳蜗自噬相关蛋白beclin1和LC3、Na^(+-)K^(+-)2Cl^-联合转运体(NKCC1)m RNA、内皮素(ET)表达与耳蜗庆大霉素(GM)损伤关系及盐酸椒苯酮胺(PPTA)对损伤的保护作用及其机制。方法将60只豚鼠随机分成对照组、模型组、同期治疗组、造模后对照组、后期治疗组。对照组给NS+人工外淋巴液、模型组给GM+人工外淋巴液、治疗组给GM+PPTA(均连续给药7 d),造模后对照组及后期治疗组均连续注射GM 7 d后,再分别行人工外淋巴液及PPTA连续注入7 d。所有豚鼠给药前均手术行听泡置管,NS及GM(160 mg·kg^(-1)·d^(-1))采用腹腔注射,人工外淋巴液及PPTA采用听泡注入。各组豚鼠完成给药后ABR测试分析听力,检测beclin1和LC3、NKCC1 m RNA及ET-1的表达。结果模型组、造模后对照组的ABR结果差异无统计学意义(P>0.05),但两者均明显高于其余3组(P<0.05),同期治疗组豚鼠ABR阈值明显低于后期治疗组(P<0.05);模型组LC3Ⅱ及Beclin1的表达量较其余4组明显升高,后期治疗组LC3Ⅱ及Beclin1的表达量较造模后对照组降低;模型组NKCC1 m RNA表达较其余4组明显升高(P<0.05),后期治疗组NKCC1 m RNA表达明显低于造模后对照组(P<0.05)。模型组各部位ET-1表达较其余4组明显增高,对照组各部位ET-1表达低于其余4组,后期治疗组各部位ET-1表达较造模后对照组降低。结论 PPTA可抑制耳蜗细胞自噬、NKCC1、ET-1的表达,从而对耳蜗庆大霉素损伤起到保护作用;PPTA早期对抗庆大霉素耳蜗损伤效果更优,提示GM可能对听觉细胞产生不可逆损伤。