耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌毒力基因的表达与耐药性研究

目的探讨临床检测的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中Ⅲ型分泌系统(T3SS)4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)的表达情况及其对抗菌药物的耐药性。方法收集安徽医科大学附属安庆第一人民医院2022-2023年临床检测的各种来源的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌87株,采用Vitek2-Compact仪器对菌株进行鉴定,并且进行药敏试验,采用聚合酶链反应对T3SS的4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)进行检测,比较不同毒力基因型组合与抗菌药物耐药性之间的关系。结果87株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌表达exoT与exoY基因的阳性率均为100.00%(87/87),exoS基因阳性率为77.01%(67/87),exoU基因阳性率为27.59%(24/87)。共检出4种类型的T3SS毒力基因型组合,以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,阳性率为71.26%(62/87),其次是exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合,阳性率为21.84%(19/87)。药敏试验结果显示,exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合对大部分常见抗菌药物,如阿米卡星、妥布霉素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、哌拉西林的耐药率均明显高于exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论该院检出的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌携带表达的T3SS毒力基因主要以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,不同毒力基因型组合的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药性存在差异。

椰毒假单胞菌酵米面亚种产毒差异蛋白质组学分析

为了从蛋白质水平探索椰毒假单胞菌米酵菌酸毒素产生机制,采用数据依赖型采集(data dependent acquisition,DDA)非标记定量蛋白质组学技术对该菌产毒培养前后蛋白质变化进行了分析。结果显示:产毒培养后,产毒株中显著性上调表达蛋白25个,显著性下调表达蛋白31个,其中显著性上调表达的蛋白中有与细菌趋化性信号转导相关的ABC转运蛋白、反应调节受体蛋白、甲基受体趋化性蛋白Ⅱ,以及与细菌运动相关的鞭毛蛋白如鞭毛P环蛋白、鞭毛M环蛋白、鞭毛钩蛋白FlgE等,推测趋化性运动可能在椰毒假单胞菌米酵菌酸毒素产生过程中发挥重要作用。椰毒假单胞菌米酵菌酸毒素产生机制研究,可为人们更好地降低食源性疾病的发生提供理论支撑。

黏液型铜绿假单胞菌76株对常用抗菌药耐药性检测及毒力基因分布

目的探讨76株黏液型铜绿假单胞菌(PA)对常用抗菌药物耐药性检测及毒力基因分布。方法76株黏液型PA均分离于2017年1月至2021年12月浙江省宁海县中医医院住院的患者标本,全自动微生物分析仪鉴定菌株,采用纸片扩散法检测黏液型PA菌株对亚胺培南(IPM)、阿米卡星(AK)、妥布霉素(TOB)、庆大霉素(CN)、头孢吡肟(FEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、左氧氟沙星(LEV)、头孢他啶(CAZ)、环丙沙星(CIP)和美罗培南(MEM)的敏感度,聚合酶链反应(PCR)法检测菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应蛋白基因exoS、exoT、exoU、exoY的分布。分析76株黏液型PA的来源及对常用抗菌药物耐药性分析、T3SS毒力基因的分布特征;比较ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)及ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)基因型与常用抗菌药物的关系。结果76株黏液型PA来源以痰液最多(68%);黏液型PA对AK、TOB、CN、TZP、LEV、CAZ的耐药率较低,对IPM、MEM、FEP和CIP的耐药率较高;黏液型PA在48 h对常见抗菌药物的耐药率为7%~14%,与24 h药敏结果(0~9%)差异有统计学意义(P<0.05);PA分离株中ExoT毒力基因的阳性率最高(100%),其次为ExoY(92%)、ExoS(70%),ExoU(26%)最低;T3SS毒力基因分型中,ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)(67%)和ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)占比最高(22%);ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)基因型对LEV、IPM、CIP的耐药率分别为37%、22%和41%,低于ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)基因型的100%、76%和100%(P<0.05);ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)基因型对FEP、TZP的耐药率为84%、78%,高于ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)基因型的35%、41%(P<0.05)。结论黏液型PA对碳青霉烯类抗菌药物IPM、MEM耐药率较高,T3SS毒力基因ExoT、ExoY在黏液型PA中普遍存在,不同毒力基因型组合与黏液型PA对常见抗菌药物的耐药率有关。

基于全基因组序列的污染事件中椰毒假单胞菌酵米面亚种溯源分析

目的溯源分析湿米粉与淀粉制品(统称为"湿粉")及其原料米中分离的椰毒假单胞菌酵米面亚种。方法采用GB/T 4789.29—2003《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》在14份湿粉及其原料米中分离出34株唐菖蒲伯克霍尔德氏菌并进行菌株全基因组重测序,以BurkholderiagladioliCo14作为参比基因,基于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)数据构建进化树,分析不同菌株的同源关系。结果来源于相同产地标识的样品的菌株呈现较好聚类;来源于同一生产企业的湿粉和碎米样品的菌株具有高度同源关系。结论提示原料米中椰毒假单胞菌酵米面亚种的基因组序列与产地溯源具有较大相关性,在湿粉生产加工过程中存在椰毒假单胞菌酵米面亚种污染传递的风险。

椰毒假单胞菌酵米面亚种在自然环境中的污染调查

本文报告了山东省章丘县外环境中椰毒假单胞菌酶米面亚种的污染情况。共采集土壤、树皮杂草、谷物秸秆等698份样品。分离得到9株椰酵假单胞菌,阳性分离率为1.21%,菌株产毒率100%,最高产毒量达57.86μg/ml。经抗O因子血清分型试验表明,该地区自然环境中存有的主要为O—Ⅲ型椰酵假单胞菌。

椰毒假单胞菌食物中毒尸检3例

1案例 1.1案例1 某镇一家6人（夫妻及子女）于某年3月24日晚至3月26日晨先后5次进食发酵苕渣粑做成的稀饭,3月27日开始相继出现口干、呕吐、腹胀、厌食等症状,经中医治疗,未见好转。

环介导等温扩增技术快速检测椰毒假单胞菌的研究

建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测椰毒假单胞菌的方法。根据公布的椰毒假单胞菌16S～23SrRNA基因序列设计引物,建立了LAMP反应体系,在此基础上检测了蜡样芽孢杆菌菌液和人工污染蜡样芽孢杆菌的银耳样品,并将LAMP法与PCR法进行比较。结果表明,LAMP检测方法具有较高的特异性和敏感性,椰毒假单胞菌的检出限为5.4CFU/mL,是PCR方法检测灵敏度的1000倍,人工污染银耳样品中的椰毒假单胞菌的检出限为76CFU/g,样品中椰毒假单胞菌的检测过程(包括DNA提取、LAMP和电泳)可在2h内完成,因此LAMP可以简便快速有效地检测食品中的椰毒假单胞菌。

铜绿假单胞菌毒力基因检测及临床意义

目的检测淄博和青岛地区107例铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)临床分离株毒力基因存在情况。方法用ATB系统鉴定Pa;PCR法检测分离菌株exoU、exoS、pcrV、exoT以及exoY 5种毒力基因。结果 exoU和exoS 2种基因在分离菌株中相互排斥;黏液型与非黏液型Pa菌株5种毒力基因的阳性率无显著性差异(P>0.05);淄博地区Pa毒力基因exoU阳性率高于青岛地区(P<0.01),exoS阳性率低于青岛地区(P<0.05)。结论 exoU和exoS 2种基因可能占据相同的染色体位点,两者不能共存;Pa黏液型与非黏液型的毒力基因携带情况相似;Pa毒力基因携带存在一定的地域性差别。

椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒病原及预防的研究

本研究对象是椰毒假单胞菌酵米面亚种及其主要毒性代谢产物米酵菌酸(Bongkrekic acid,BA)。现已证明,椰毒假单胞菌酵米面亚种及其毒素是我国酵米面、变质银耳及多种自制淀粉类发酵食品食物中毒的病原。据不完全统计,截至1994年底。

泛耐药铜绿假单胞菌的毒力基因检测和同源性分析

目的了解毒力基因在泛耐药铜绿假单胞菌中的分布情况,并分析其同源性。方法采用PCR方法检测毒力基因exoU和exoS,用BOX-PCR指纹图谱分析技术进行同源性分析。结果 53株临床分离的泛耐药铜绿假单胞菌,其中40株毒力基因为exoS+/exoU-型,10株为exoU+/exoS-基因型,1株为exoS+/exoU+基因型,2株为exoS-/exo U-基因型。BOX-PCR结果显示,41株exoS+菌株分为24种基因型,11株exoU+菌株分为7种基因型。结论临床分离的泛耐药铜绿假单胞菌,毒力基因的携带率高,BOX-PCR指纹图谱分析技术适合铜绿假单胞菌的同源性分析,可为医院感染的控制与管理提供病原学基因分型资料。

云南省椰毒假单胞菌酵米面亚种污染分析及PFGE分型

目的 椰毒假单胞菌酵米面亚种的分布和传播情况。方法 对59份样品进行细菌分离与鉴定,用限制性内切酶SpeI酶切17株椰酵假单胞菌染色体DNA以进行脉冲电泳(PFGE)分析。结果 采集样品59份,分离鉴定出椰酵假单胞菌14株,检出率为23.73%,17株菌的PFGE图谱的相似性系数在53.6%~100%之间,经聚类分析得到14个PFGE型别。结论 云南省部分地区椰酵假单胞菌污染严重,存在食品安全隐患,应进一步从食品源头加强卫生监测;PFGE带型呈多样性,对今后云南省椰毒假单胞菌酵米面亚种引起食物中毒的诊断和溯源有重要意义。

黏液型铜绿假单胞菌的毒力基因、产金属酶检测与耐药性研究

目的比较两种表型铜绿假单胞菌(PAE)毒力基因、产金属酶(MBLs)及耐药性,为临床治疗和医院感染控制提供依据。方法采用ATB鉴定系统进行菌株鉴定,筛选出两种表型菌株;纸片扩散法检测耐药性;PCR方法检测毒力基因exoS、exoU和exoY;改良Hodge试验(PAE-MHT)法检测MBLs。结果非黏液型PAE对各种抗生素的耐药率均高于黏液型,其中对庆大霉素、氨曲南、左氧氟沙星、亚胺培南、美罗培南的耐药率明显高于黏液型;同时非黏液型MBLs阳性率明显高于黏液型;3种毒力基因阳性率黏液型均高于非黏液型,但两者比较无显著性差异;6种基因型中,除exoU+/exoS-/exoY-和exoU-/exoS-/exoY-两种基因型非黏液型明显高于黏液型外,其余四种基因型的比较无显著性差异。结论针对PAE感染,应尽早尽快选择敏感药物治疗,以免非黏液型转化成黏液型后,增加治疗难度。

椰毒假单胞菌酵米面亚种鸟嘌呤和胞嘧啶含量的测定及2种测定方法的比较

利用复性速率法 (Tm值法 )和高效液相色谱法 (HPL C法 )对生化性状比较相近的椰毒假单胞菌酵米面亚种、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌和椰毒伯克霍尔德氏菌共 7个菌株的鸟嘌呤 (G)和胞嘧啶 (C)摩尔百分含量 (G+ C) %进行了测定 ,并对这 2种方法做了对比研究。结果发现 ,3个种的 7个菌株的 (G+ C) %比较接近 ,不能否定这 3个种的细菌属于同一个种。另外 ,HPL C法比 Tm值法的准确性好 。

1株椰毒假单胞菌酵米面亚种在湿米粉基质中的产毒情况和酸度分析

湿米粉是大众喜爱的食品,但近年来出现了湿米粉的食物中毒事件,因此研究椰毒假单胞菌酵米面亚种在湿米粉基质中的产毒情况和酸度变化,为湿米粉的加工储藏提供参考。将一株椰毒假单胞菌酵米面亚种的发酵菌液按照不同的初始浓度接种到湿米粉中,模拟生活中湿米粉的储存条件,测定不同温度和时间下湿米粉中的米酵菌酸浓度和酸度,分析椰毒假单胞菌酵米面亚种在湿米粉基质中的产毒情况、湿米粉的酸度变化。结果表明,在4℃条件下,培养72 h湿米粉未检出米酵菌酸,在26、36℃培养条件下的米酵菌酸浓度随着培养时间延长持续升高,且36℃湿米粉中的米酵菌酸含量均高于26℃。培养后的湿米粉,酸度无明显变化。污染了椰毒假单胞菌酵米面亚种的湿米粉基质中,米酵菌酸的产毒量随着污染菌液浓度和培养温度升高而升高,呈正相关,但酸度无明显变化。

椰毒假单胞菌酵米面亚种及米酵菌酸的研究进展（综述）

椰毒假单胞菌酵米面亚种及米酵菌酸的研究进展（综述）王静刘秀梅中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所（１０００５０）椰毒假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｏｃｏｖｅｎｅｎａｎｓ）是１９６０年从印度尼西亚发酵食物Ｔｅｍｐｅｂｏｎｇｋｒｅｋ中毒样品中分离并...

部分椰酵假单胞菌的产毒力与核糖型分布间的关系

用ｒＤＮＡ指纹图对４２株椰酵假单胞菌进行核糖型分类，探讨该菌的产毒力与核糖型分布之间的关系。结果表明，７３．８％的菌株具有产毒力，它们分布在大多数核糖型中，来源于食物中毒样品及正常食物样品。而产毒力阴性菌株只占２６．２％，它们集中于少数核糖型中，而且都来源于正常食物样品。多个克隆产毒力阳性菌株的广泛存在，提示对该菌的潜在性危害应引起足够的重视。

椰毒假单胞菌食物中毒实验室检测

椰毒假单胞菌是我国新近发现的一种食物中毒菌。主要中毒食物为酵米面，近年来从糯玉米、小米、银耳等食品分离出此菌。

云南省一例唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)食物中毒事件调查分析

目的调查分析云南省一例唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)食物中毒事件。方法参照GB/T4789.29-2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》对样品进行唐菖蒲伯克霍尔德氏菌检测。按照GB 5009.189-2016《食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定》检测样品中的米酵菌酸,采用液相色谱法对样品进行检测。用VITEK 2COMPACT全自动微生物生化鉴定仪和飞行时间质谱进行微生物鉴定。结果2份样品鉴定结果为唐菖蒲伯克霍尔德菌。2份样品均检测出米酵菌酸,含量分别为18.0和24.2 mg/kg。结论本次食物中毒源于食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)污染。

椰毒假单胞菌酵米面亚种选择性培养基研究

根据椰毒假单胞菌酵米面亚种生理生化特性，在抑菌实验基础上，研制出以无机盐和无机氮源为基础，以有机碳源为限制因子的双抗生素合成培养基（ＰＣＦＡ）。该培养基抑杂菌性强，选择性高，最低检出菌量６．３～８９个／ｍｌ，检出灵敏度较传统培养基ＰＤＡ提高了１０００倍以上。适于从杂菌含量高的自然环境样品中检出椰毒假单胞菌酵米面亚种，是该菌中毒检验和进行自然分布调查与污染原追踪的一种较为理想的分离培养基。

中山地区铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒力基因表达差异的检测

目的分析中山地区铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统(TTSS)毒力基因表达及耐药情况,为临床抗感染治疗提供依据。方法对中山市人民医院2016年7-11月临床分离的铜绿假单胞菌随机选取76株,采用PCR法检测分离菌株exoU、exoS、exoT、exoY 4种毒力基因;采用Vitek2Compact全自动微生物鉴定仪测定细菌对抗菌药物的敏感性。结果 exoS、exoY检出率最高,分别为52.6%(40/76)、63.2%(48/76);主要为exoU(-)exoS(+)exoT(-)exoY(+)基因型,占59.26%;多重耐药及非多重耐药铜绿假单胞菌株4种毒力基因的阳性率无显著性差异;TTSS阳性组对13种药物的耐药率普遍低于TTSS阴性组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论铜绿假单胞菌毒力基因携带存在一定的地域性差别;多重耐药及非多重耐药铜绿假单胞菌株毒力基因携带情况相似。