辽东楤木叶有效部位中楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ及总皂苷质量控制

目的建立HPLC-ELSD法测定辽东楤木叶中楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ量及可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量的方法。方法采用HPLC-ELSD法测定楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ,Diamonsil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,体积流量0.7 mL/min,柱温35℃,漂移管温度115℃,载气体积流量3.2 L/min。采用可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量,检测波长550 nm。结果楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ、辽东楤木叶总皂苷分别在1.253～8.768μg(r=0.999 7),1.251～8.767μg(r=0.999 7),0.1549～1.549 mg(r=0.999 8)呈良好的线性关系;加样回收率分别为99.67%(RSD为1.30%),99.17%(RSD为0.97%),99.57%(RSD为0.53%)。结论本实验采用的方法简便快速、准确、重复性好,可用于辽东楤木叶有效部位中皂苷类成分的质量控制。

3个辽东楤木三萜皂苷同分异构体的电喷雾质谱区分

该研究采用超高效液相色谱串联三重飞行时间质谱（UPLC-Triple-TOF-MS）对3个辽东楤木三萜皂苷同分异构体（Ⅵ,Ⅶ和B）进行质谱区分。通过分析楤木皂苷Ⅵ（1）和楤木皂苷Ⅶ（2）的[M＋Na]＋的二级质谱（CE=90 e V）,二者在m/z981.502 5[Y0α＋Na]＋,819.443 3[Y0α-Glc＋Na]＋,527.157 2[C3β＋Na]＋,509.150 4[B3β＋Na]＋和365.106 5[C3β-Glc＋Na]＋处产生了相同的碎片离子峰,而楤木皂苷B（3）的[M＋Na]＋二级质谱在m/z 671.198 2和689.208 7处产生了2个明显不同的碎裂离子峰,其分别归属于[B4β＋Na]＋和[C4β＋Na]＋。因此,[B4β＋Na]＋和[C4β＋Na]＋可作为化合物3区分其他两个异构体（1和2）的特征性的诊断离子。进一步分析楤木皂苷Ⅵ（1）和楤木皂苷Ⅶ（2）的[M＋NH4]＋或[M＋H]＋的二级谱图（CE=40 e V）,二者在m/z 455.350 7和437.341 2处产生相同的苷元脱水碎片离子峰,其分别归属于[苷元-H2O＋H]＋和[苷元-2H2O＋H]＋。楤木皂苷Ⅵ（1）的苷元类型是刺囊酸,其[苷元-2H2O＋H]＋和[苷元-H2O＋H]＋的离子强度比值〈1,而楤木皂苷Ⅶ（2）的苷元类型是常春藤,其[苷元-2H2O＋H]＋和[苷元-H2O＋H]＋的离子强度比值〉1,基于此可以有效区分楤木皂苷Ⅵ（1）和楤木皂苷Ⅶ（2）。以上研究表明,利用电喷雾二级质谱法可以快速、简便、准确地区分3种楤木皂苷（Ⅵ,Ⅶ和B）异构体。

基于谱-效关系的辽东楤木叶质量评价研究

目的建立辽东楤木Aralia elata叶指纹图谱,并寻找能够反映辽东楤木叶抗肿瘤活性能力的质量评价方法。方法采用70%乙醇和水饱和的正丁醇提取各批次辽东楤木叶总皂苷,运用HPLC-ELSD测试分析皂苷并建立指纹图谱,MTT法测试楤木叶总皂苷和单体皂苷对人肺腺癌A549细胞、人肝癌SMMC-7221细胞、人结肠癌HT-29细胞的抑制作用,用灰色关联法分析指纹图谱峰与抗肿瘤作用之间的关系。结果建立了含有28个共有峰的辽东楤木叶HPLC-ELSD指纹图谱,各批次图谱与共有模式图谱间相似度在0.850以上,指认并归属其中5个峰成分。各批次楤木叶总皂苷抗肿瘤作用的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为7.39~79.13 mg/L,其中,黑龙江凤凰山7月的样品抗肿瘤效果最佳。谱-效相关性表明28个共有峰成分与抗肿瘤活性的关联度为0.4692~0.8103,其中10个成分与抗肿瘤活性间的关联度大于0.70,8个成分与抗肿瘤活性间的关联度小于0.60。图谱中有2个峰成分在各批次药材中含量都相当大,但谱-效关联度却很小。5个已知的峰成分中,楤木皂苷TTP和楤木皂苷Ⅴ抗肿瘤作用的IC50均小于190 mg/L,楤木皂苷Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ抗肿瘤作用的IC50均大于200 mg/L。结论辽东楤木叶HPLC指纹图谱及抗肿瘤相关性分析可以为辽东楤木叶的质量评价提供参考。若从已知的5种楤木皂苷中挑选质量控制成分,楤木皂苷TTP和Ⅴ要优于楤木皂苷Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ。