基于NR3C1/p53/SLC7A11通路探讨龙牙楤木总皂苷及其成分楤木皂苷A对缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡的影响

目的基于NR3C1/p53/SLC7A11通路观察龙牙楤木总皂苷(As)及其成分楤木皂苷A(As A)对缺氧/复氧(H/R)诱导的AC16心肌细胞铁死亡的影响。方法通过缺氧24 h/复氧12 h建立AC16细胞H/R损伤模型,采用细胞转染法调控NR3C1表达,将细胞分为正常组、H/R组、As组(As+H/R)、As A组(As A+H/R)、过表达空载体组(过表达空载体+H/R)、NR3C1过表达组(NR3C1过表达+H/R)、沉默对照组(si-NC+As+H/R)和NR3C1沉默组(si-NR3C1+As+H/R),分别进行相应干预,荧光探针检测活性氧(ROS)水平,ELISA检测丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,Western blot检测NR3C1、p53和SLC7A11蛋白表达,免疫荧光染色检测NR3C1和p53蛋白表达。结果与正常组比较,H/R组AC16细胞ROS和MDA水平明显升高,GSH水平明显降低(P<0.05),NR3C1和SLC7A11蛋白表达明显降低,p53蛋白表达明显升高(P<0.05);与H/R组比较,As组、As A组和NR3C1过表达组AC16细胞ROS和MDA水平明显降低,GSH水平明显升高(P<0.05),NR3C1和SLC7A11蛋白表达明显升高,p53蛋白表达明显降低(P<0.05);与过表达空载体组比较,As组和NR3C1过表达组AC16细胞ROS和MDA水平明显降低,GSH水平明显升高(P<0.05),NR3C1和SLC7A11蛋白表达明显升高,p53蛋白表达明显降低(P<0.05);与As组及沉默对照组比较,NR3C1沉默组AC16细胞ROS、MDA水平明显升高,GSH水平明显降低(P<0.05),NR3C1和SLC7A11蛋白表达明显降低,p53蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论As及As A可能通过上调NR3C1、SLC7A11蛋白表达,下调p53蛋白表达,抑制H/R诱导的AC16心肌细胞铁死亡。

楤木皂苷A的研究进展

楤木皂苷A是齐墩果酸型五环三萜皂苷,具有广泛的生物活性。本文就近20年文献报道的楤木皂苷A的理化性质、提取分离技术、生物活性、作用机制及分析方法等方面进行了综述,并对其进行分析归纳总结,提出了目前存在的问题和今后的发展方向,以期为该化合物深入研究开发提供参考。

龙牙楤木总皂苷及楤木皂苷A对缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡的影响

目的探讨龙牙楤木总皂苷及其组分楤木皂苷A能否减轻缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡。方法将AC16细胞随机分为正常组、模型组、龙牙楤木总皂苷组、楤木皂苷A组。通过缺氧24小时、复氧12小时建立AC16细胞缺氧/复氧模型,药物组缺氧/复氧损伤前6小时给予药物处理。CCK-8检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞受损程度,透射电子显微镜观察AC16细胞形态学变化,比色法检测Fe^(2+)水平,酶联免疫试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,DHE荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,蛋白免疫印迹法检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、SAT1、GLS2的表达。结果与正常组相比,模型组AC16细胞存活率明显下降,细胞受损程度明显升高,细胞内的线粒体皱缩、内嵴增厚、膜电子密度增高,Fe^(2+)、ROS、MDA水平明显上升,GSH活力明显下降,铁死亡相关蛋白p53、SAT1、GLS2蛋白表达明显升高,SLC7A11蛋白表达明显降低,以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,龙牙楤木总皂苷组及楤木皂苷A组AC16细胞存活率明显上升,细胞受损程度明显降低,细胞内的线粒体形态趋于正常状态,Fe^(2+)、ROS、MDA水平下降,GSH活力升高,铁死亡相关蛋白p53、SAT1、GLS2蛋白表达下调,SLC7A11蛋白表达上调,以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论龙牙楤木总皂苷及其组分楤木皂苷A能减轻缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡,其机制可能与抑制p53、SAT1、GLS2蛋白表达,上调SLC7A11蛋白表达有关。

龙牙楤木总皂苷通过调控AMPK/Nrf2信号抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究龙牙楤木总皂苷对AMPK/Nrf2信号通路的影响。方法:将人心肌细胞AC16进行体外培养,分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、铁离子螯合剂对照组,铁离子螯合剂组、龙牙楤木总皂苷低(0.02μg/mL)浓度组、龙牙楤木总皂苷中(0.1μg/mL)浓度组、龙牙楤木总皂苷高(0.5μg/mL)浓度组,丹参滴丸(50μg/mL)阳性对照组,AMPK抑制剂Compound C(5μg/mL)+龙牙楤木总皂苷(0.5μg/mL)组,Nrf2抑制剂ML385(2μg/mL)+龙牙楤木总皂苷(0.5μg/mL)组。MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞内Fe^(2+)、ROS水平;免疫荧光法检测脂质过氧化物及GPX4、ACSL4蛋白表达;qRT-PCR检测GPX4、ACSL4 mRNA表达,Western Blot检测GPX4、ACSL4、p-AMPK、Nrf2蛋白表达;结果:与空白对照组比较,模型组细胞存活率、GPX4 mRNA表达显著降低,Fe^(2+)含量、ROS和脂质过氧化水平、ACSL4 mRNA表达显著升高,p-AMPK、Nrf2蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,铁离子螯合剂组细胞存活率、GPX4 mRNA表达显著升高,Fe^(2+)、ROS、脂质过氧化水平及ACSL4 mRNA表达显著降低(P<0.01);龙牙楤木总皂苷各组和丹参滴丸组细胞存活率及GPX4、p-AMPK、Nrf2蛋白表达显著升高,心肌细胞中Fe^(2+)、ROS、脂质过氧化水平及ACSL4蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与龙牙楤木总皂苷组比较,Compound C+龙牙楤木总皂苷组和ML385+龙牙楤木总皂苷组细胞存活率显著降低,Fe^(2+)含量显著升高,Nrf2蛋白表达显著降低,Compound C+龙牙楤木总皂苷组ROS和脂质过氧化水平显著升高,p-AMPK蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:龙牙楤木总皂苷可通过激活AMPK/Nrf2信号通路,抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡。

龙牙楤木总皂苷通过调控miR-149-5p对高糖诱导的MIN6细胞损伤的影响及机制

目的探讨龙牙楤木总皂苷(Aralosides)通过调控miR-149-5p对高糖诱导的MIN6细胞损伤的影响及机制研究。方法体外培养小鼠胰岛素瘤细胞MIN6,采用浓度为25 mmol/L葡萄糖诱导建立细胞模型,将细胞分为对照(Control)组、高糖(HG)组、高糖+龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量(HG+Aralosides-L、HG+Aralosides-M、HG+Aralosides-H)组、高糖+miR-NC(HG+miR-NC)组、高糖+miR-149-5p(HG+miR-149-5p)组、高糖+龙牙楤木总皂+anti-miR-NC(HG+Aralosides+anti-miR-NC)组和高糖+龙牙楤木总皂+anti-miR-149-5p(HG+Aralosides+anti-miR-149-5p)组。通过CCK8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;定量反转录(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-149-5p表达。结果与Control组相比,HG组明显降低细胞活力、Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性、miR-149-5p表达,增加细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量(均P<0.05)。与HG组相比,HG+Aralosides-L组、HG+Aralosides-M组、HG+Aralosides-H组明显增加细胞活力、Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性、miR-149-5p表达,明显降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量(均P<0.05)。与HG+miR-NC组相比,HG+miR-149-5p组明显增加细胞活力、Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性、miR-149-5p表达,明显降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量(均P<0.05)。与HG+Aralosides+anti-miR-NC组相比,HG+Aralosides+anti-miR-149-5p组明显降低细胞活力、Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性、miR-149-5p表达,明显增加细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量(均P<0.05)。结论龙牙楤木总皂苷通过调控miR-149-5p减缓高糖诱导的MIN6细胞的凋亡和氧化应激,并促进细胞的增殖。

基于PI3K/Akt信号通路探讨龙牙楤木总皂苷抗心肌缺血再灌注损伤的机制

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨龙牙楤木总皂苷抗心肌缺血再灌注损伤的机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、龙牙楤木总皂苷组、LY29004组、LY29004+龙牙楤木总皂苷组,每组10只。除假手术组外,其余组利用Langendorff离体心脏灌流装置,通过结扎左冠状动脉前降支30 min、复灌75 min的方法构建离体大鼠心脏再灌注模型。模型组采用K-H液恒速灌流;龙牙楤木总皂苷组和LY29004组分别采用含5 mg/L龙牙楤木总皂苷的K-H液和含15μmol/L LY29004的K-H液恒速灌流;LY29004+龙牙楤木总皂苷组先给予含15μmol/L LY29004的K-H液灌流15 min,再以含5 mg/L龙牙楤木总皂苷的K-H液灌流60 min。采用Western blot法检测心肌组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白[Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)]表达情况,免疫组化法检测心肌组织中凋亡相关蛋白[半胱氨酸天门冬氨酸酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2关联蛋白X(Bax)]表达情况,HE染色观察心肌组织病理形态。结果模型组、龙牙楤木总皂苷组、LY29004组、LY29004+龙牙楤木总皂苷组Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白相对表达量和Caspase-3、Bax蛋白阳性表达面积均明显高于假手术组(P均<0.05),Bcl-2阳性表达面积均明显低于假手术组(P均<0.05);龙牙楤木总皂苷组Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白相对表达量和Bcl-2阳性表达面积均明显高于模型组、LY29004组和LY29004+龙牙楤木总皂苷组(P均<0.05),Caspase-3、Bax蛋白阳性表达面积均明显低于模型组、LY29004组和LY29004+龙牙楤木总皂苷组(P均<0.05)。假手术组心肌细胞排列有序,未见变性、坏死及炎性细胞浸润;模型组大量心肌细胞变性、坏死及炎性细胞浸润;龙牙楤木总皂苷组心肌细胞轻度肿胀,少量细胞变性、坏死,少量炎性细胞浸润;LY29004+龙牙楤木总皂苷组大量心肌细胞坏死和炎性细胞浸润。结论龙牙楤木总皂苷可能通过激活PI3K/Akt信号通路,上调抗凋亡蛋白表达和下调促凋亡蛋白表达而减轻心肌缺血再灌注损伤。

HPLC测定不同产地楤木中的楤木皂苷A

目的采用HPLC法测定并比较不同产地楤木中楤木皂苷A的含量。方法色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(35∶65);检测波长205nm;柱温30℃;流速0.8mL·min-1;进样量20μL。结果楤木皂苷A0.6325～25.3000μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.97%,RSD=1.02%。结论所建方法灵敏、准确、重复性好,可用于楤木的质量控制。

基于LC-MS/MS探讨楤木皂苷A在大鼠体内的药动学特性

目的建立SD大鼠血浆中楤木皂苷A的LC-MS/MS分析方法,探讨楤木皂苷A在大鼠体内的药动学特征。方法分别灌胃、静脉注射楤木皂苷A 50和5 mg·kg^(-1)后,建立LC-MS/MS分析方法测定大鼠血浆中楤木皂苷A含量,运用DAS 3.0软件计算药动学参数。结果楤木皂苷A在1.0~10 000.0μg·L^(-1)内线性良好(r>0.994 8),专属性,精密度和准确度,基质效应和提取回收率,以及稳定性均符合要求;SD大鼠灌胃楤木皂苷A 50 mg·kg^(-1)和静脉注射楤木皂苷A 5 mg·kg^(-1),血浆中的t_(1/2)分别为(8.65±3.22)和(2.00±0.21)h,AUC_(0-t)分别为(277.14±101.00)和(21 194.59±4 385.13)ng·h·L^(-1),MRT_(0-t)分别为(7.88±0.64)和(1.21±0.11)h,Vd/F分别为(2 229.99±1 013.97)和(0.71±0.20)L·kg^(-1),CL/F分别为(149.11±62.28)和(0.24±0.05)L·h^(-1)·kg^(-1),灌胃给药ρ_(max)为(32.68±10.74)μg·L^(-1),t_(max)达到(1.21±0.70)h,楤木皂苷A的口服绝对生物利用度约为0.14%。结论本实验所建立的LC-MS/MS方法特异性强,灵敏度高,可用于楤木皂苷A的药动学研究。

楤木皂苷抗肿瘤活性研究

目的研究楤木皂苷的体内外抗肿瘤作用。方法以人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株LOVO和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为模型,采用cell counting kit-8(CCK-8)检测楤木皂苷的体外抗肿瘤活性;以小鼠肝癌H22和小鼠肉瘤S180为移植性肿瘤模型,检测楤木皂苷的体内抗肿瘤活性。结果楤木皂苷可抑制K562、HepG2,LOVO和MDA-MB-231的增殖,其IC50值分别为(209.10±32.69),(273.30±20.40),(293.60±5.85),(329.67±26.42)mg.L-1,均大于30 mg.L-1;在50,100 mg.kg-1时,楤木皂苷对小鼠肝癌H22的抑瘤率分别为28.8%,47.06%,对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为27.94%,54.92%。结论楤木皂苷体外抗肿瘤活性弱,但体内抗肿瘤活性较强。

龙牙楤木总皂苷对缺氧/再给氧心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨龙牙楤木总皂苷(As)对培养心肌细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/再给氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组空白对照组;模型组(A/R组),缺氧6h再给氧3h;3个As给药组,缺氧6h再给氧3h,并于缺氧及再给氧开始时分别加入终浓度为1.25、2.5、5.0mg.L-1的As,观察As对细胞上清液中缺氧及再给氧后LDH、CK漏出量、MDA含量、SOD活性的影响。用MTT法检测As对缺氧再给氧损伤心肌细胞线粒体的保护作用。结果As可抑制缺氧及再给氧后LDH、CK漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,升高OD570吸光度值。结论As对培养心肌细胞的缺氧再给氧损伤具有保护作用,提示其作用机制与增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关。

龙牙楤木总皂苷对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究龙牙楤木总皂苷(AS)对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法分次消化法分离原代培养的乳鼠心肌细胞,建立H2O2诱导心肌细胞损伤模型;MTT法检测不同浓度AS对细胞保护作用的量效、时效关系;倒置显微镜下观察AS对细胞形态学和细胞搏动频率的影响;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量及丙二醛(MDA)含量,检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果不同浓度H2O2处理心肌细胞2 h,100～400μmol.L-1对心肌细胞具有明显的损伤作用,呈剂量依赖性;LDH漏出量增加,MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低。而12.5～25 mg.L-1AS预处理8、12 h可明显地减轻损伤,有效保护心肌细胞。明显减少LDH的漏出,降低MDA含量,提高SOD、CAT、GSH-Px活力;12.5～25 mg.L-1 AS于给药后4h明显减慢心肌细胞的搏动频率,并呈剂量依赖性,表明在该剂量范围内AS具有明显的负性频率效应。结论 AS对H2O2致心肌细胞氧化损伤具有明显的保护作用,呈时间、剂量依赖性。其作用机制可能与其清除自由基,提高心肌细胞的抗氧酶活力有关;同时提示AS的心肌保护作用可能与其减少心肌做功、降低心肌耗氧量、增加心肌细胞稳定性有关。

HPLC法测定辽东楤木根皮中木皂苷C的含量

目的建立HPLC法测定辽东楤木根皮中楤木皂苷C含量的方法。方法固定相为Diamonsin C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水-磷酸（体积比为67．0：33．0：0．2），流速为0．8mL·min^-1。检测波长为206nm，柱温为30℃。结果楤木皂苷C在20～40μg内呈良好的线性关系（r=0．9999）。平均回收率为99．7％，RSD为3．2％（n=6）。结论可用于楤木皂苷C的定量分析。

楤木总皂苷对S_(180)小鼠肿瘤生长及免疫细胞功能的影响

目的:研究楤木总皂苷的体内抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠免疫细胞功能的影响。方法:以小鼠肉瘤细胞S180为移植性肿瘤模型,观察对小鼠肿瘤生长的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验、淋巴细胞转化试验和迟发型超敏反应观察对荷瘤小鼠免疫细胞功能的影响。结果:楤木总皂苷400 mg/kg对S180的肿瘤生长有一定的抑制作用,抑瘤率达33.63%;楤木总皂苷200、400 mg/kg能增强S180小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力、提高T淋巴细胞的转化率和促进DTH反应(P<0.05或P<0.01),且呈现出较好的量效关系。结论:楤木总皂苷具有一定的体内抗肿瘤活性,且能增强荷瘤小鼠的免疫细胞功能。

辽东楤木叶中3个皂苷的鉴定

目的对辽东楤木叶中分离得到的3个皂苷类化合物的结构进行鉴定。方法利用多级串联电喷雾质谱结合其它色谱方法对其结构进行分析。结果分别鉴定为辽东木皂苷、辽东木皂苷、辽东木皂苷。结论3个皂苷类化合物均为首次从该植物叶中得到。

楤木皂苷对大小鼠应激能力的影响

目的:研究在不同应激状态下,楤木皂苷对大小鼠应激能力的影响。方法:建立缺氧、异丙肾上腺素+缺氧、低温、氢化可的松+低温、强迫游泳、心肌缺血6种应激模型,每模型均分成生理盐水、人参皂苷和楤木皂苷3组进行随机对照实验,比较楤木皂苷与其它两组对大小鼠应激能力的影响。结果:楤木皂苷对提高大小鼠的应激能力作用明显(p<0.05),有些指标优于人参皂苷。结论:楤木皂苷能明显提高大小鼠的应激能力。

楤木总皂苷减轻实验性2型糖尿病大鼠氧化损伤作用的研究

目的观察楤木总皂苷对实验性2型糖尿病大鼠机体氧化损伤的影响。方法采用高脂高糖饮食辅以小剂量腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)复制大鼠实验性2型糖尿病模型。将30只SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,楤木总皂苷高、中、低剂量组(给药量分别为250.0、125.0、62.5 mg.kg-1)和阳性药物对照组,每组5只。对大鼠血清及肝脏、肌肉、脂肪组织中的氧化损伤指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)进行测定,光镜下观察各组大鼠胰腺病理形态学变化。结果楤木总皂苷能显著改善2型糖尿病大鼠机体的氧化损伤且有较好的剂量效应依赖关系。楤木总皂苷中、高剂量组大鼠与模型组大鼠相比,血清及肝脏、肌肉、脂肪组织中的MDA浓度显著下降(P<0.05,除肌肉组织),SOD活性显著上升(P<0.05),AGEs水平显著下降(P<0.05),胰腺病理形态明显改善。结论楤木总皂苷能减轻实验性2型糖尿病大鼠机体的氧化损伤,从而保护STZ所致大鼠胰腺损伤。

楤木皂苷抗四氯化碳致大鼠肝纤维化作用

目的观察楤木皂苷对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用。方法采用质量分数为40%的四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,MASSON染色观察肝组织病理学改变,采集血清检测肝功能及透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、三型胶原蛋白(typesⅢ-collagen,COI-Ⅲ)含量的变化。结果楤木皂苷可抑制肝假小叶的形成和胶原纤维沉积,改善肝功能,降低血清中HA、LN、COI-Ⅲ的含量(P<0.05)。结论楤木皂苷有显著的抗肝纤维化的作用。

辽东楤木叶有效部位中楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ及总皂苷质量控制

目的建立HPLC-ELSD法测定辽东楤木叶中楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ量及可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量的方法。方法采用HPLC-ELSD法测定楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ,Diamonsil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,体积流量0.7 mL/min,柱温35℃,漂移管温度115℃,载气体积流量3.2 L/min。采用可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量,检测波长550 nm。结果楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ、辽东楤木叶总皂苷分别在1.253～8.768μg(r=0.999 7),1.251～8.767μg(r=0.999 7),0.1549～1.549 mg(r=0.999 8)呈良好的线性关系;加样回收率分别为99.67%(RSD为1.30%),99.17%(RSD为0.97%),99.57%(RSD为0.53%)。结论本实验采用的方法简便快速、准确、重复性好,可用于辽东楤木叶有效部位中皂苷类成分的质量控制。

楤木皂苷通过降低Akt/NF-κB通路抑制HeLa细胞的增殖并促进其凋亡

目的探讨楤木皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法以体外培养的人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,实验分为阴性对照组和楤木皂苷组(50、100、200μg/mL)共4组,分别给予RPMI-1640培养液和楤木皂苷(50、100、200μg/mL)处理。24、48和72h后,分别收集各组细胞,采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot技术测定细胞内蛋白(pAkt1、pIкBα、NF-κB p65、Bcl-2和Caspase-3)表达水平。结果楤木皂苷呈时间-剂量依赖性地抑制HeLa细胞的增殖,并增加其凋亡水平。另外,楤木皂苷显著降低Akt1和IкBα的磷酸化水平,减少NF-κB(亚基p65)和Bcl-2的蛋白表达,相反却显著增加Caspase-3的含量。结论楤木皂苷通过降低Akt/NF-κB信号通路的活性抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖并促进其凋亡。

龙芽楤木总皂苷对糖尿病大鼠早期肾病结构改变的保护作用及其机制探讨

目的探讨龙芽楤木总皂苷[total aralosides of aralia elata(Miq)seem,TASAES]对实验性糖尿病(DM)大鼠肾脏功能及结构保护作用的机制。方法应用链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,于8 w时对正常对照组、模型组、不同剂量TASAES治疗组(低、中、高剂量组)DM大鼠进行尿量、肾重体重比、24 h尿微量自蛋白(mALB)测定;RT-PCR技术检测结缔组织生长因子(CTGF)在核酸水平上的转录情况;电镜观察超微结构变化。结果与正常对照组比较,8 w时模型组、低、中、高剂量TASAES组大鼠尿量、相对肾重/体重比、24 h mALB明显增加(P<0.05,P<0.01);与模型组大鼠比较,低、中、高剂量TASAES组大鼠相对肾重/体重比,24 h mALB下降(P<0.05),而血肌酐虽无明显变化,但有上升趋势;与模型组比较,中、高剂量TASAES组CTGF在分子水平表达差异有显著性(P<0.01);电镜显示:模型组肾基底膜增厚,厚薄不均,上皮细胞内线粒体空化,低、中、高剂量TASAES组明显减轻。结论龙芽楤木能有效降低DM大鼠尿微量白蛋白含量;降低CTGF在肾脏的表达;改善肾脏超微结构,防止基底膜增厚,保护肾小球滤过屏障。