青藤碱对BALB/c-nu/nu裸小鼠高侵袭性人结肠癌SW 480移植瘤增殖及环氧合酶-2表达的影响

目的观察青藤碱对高侵袭性人结肠癌细胞株SW 480移植瘤细胞周期及结肠瘤体组织中环氧合酶-2(COX-2)表达的影响,研究青藤碱防治结肠癌的机制。方法先用5只免疫功能正常的BALB/c-nu/nu裸小鼠建立高侵袭性人结肠癌瘤源,3周后取直径约2 mm的瘤块移植于20只免疫缺陷的BALB/c-nu/nu2裸小鼠回盲浆膜凹龛部,1周后再随机分为结肠癌组和青藤碱组。青藤碱组按10 m L/(kg·d)灌10%青藤碱治疗30 d,结肠癌组灌0.9%氯化钠注射液对照。测量BALB/c-nu/nu裸小鼠结肠瘤体积、瘤质量并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪检测结肠瘤体组织SW 480细胞在G1、G2、M和S期的细胞周期比例;免疫组化法检测结肠瘤体组织COX-2的表达,RT-PCR法检测COX-2 m RNA表达。结果与结肠癌组比较,青藤碱组结肠瘤体积、瘤质量及S期细胞比值明显降低、G1、G2期细胞比值提高,肿瘤抑制率为(39.75%)(P<0.05);COX-2和COX-2 m RNA低表达(P<0.05)。结论青藤碱可能在G1、G2和S期诱导SW 480细胞阻滞、抑制结肠癌细胞株SW 480细胞的有丝分裂,并通过下调COX-2表达而间接影响癌细胞的增殖,具有抗高侵袭性人结肠癌的作用。

如意金黄软膏联合秋水仙碱治疗痛风性膝关节炎效果及对COX-2、DKK-1和关节功能的影响

目的:探讨如意金黄软膏联合秋水仙碱治疗痛风性膝关节炎的效果及对环氧合酶-2(COX-2)、Dickkopf-1(DKK-1)和关节功能的影响。方法:选取本院收治的符合相关标准的痛风性膝关节炎105例,随机分成两组,对照组52例,观察组53例。对照组给予秋水仙碱治疗,观察组在对照组的基础上加用如意金黄软膏治疗。比较两组临床疗效、COX-2、DKK-1、膝关节功能[采用奎森功能演算指数(Lequesne)进行评价]、运动功能[采用Fugl-Meyer运动功能评定量表(FMA)进行评价]、关节症状评分变化情况及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率高于对照组(P<0.05);两组COX-2、DKK-1均较治疗前降低,且观察组降低更显著(P<0.05);两组Lequesne、滑膜厚度均较治疗前降低,且观察组降低更显著(P<0.05),FMA评分均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05);两组关节症状评分均较治疗前降低,且观察组降低更显著(P<0.05)。结论:如意金黄软膏联合秋水仙碱治疗痛风性膝关节炎有一定的效果,可能与有效改善患者COX-2、DKK-1及关节功能水平有关。

人胃癌细胞环氧合酶-2表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析

目的:建立和优化胃癌蛋白质组研究的方法系统,并分析人胃癌细胞SGC7901-asCOX2及SGC7901-pcDNA(用COX-2反义重组质粒及空载体分别转染胃癌细胞系SGC7901得到的两个细胞系)表达的蛋白质组,并建立二者之间的差异表达谱.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离SGC7901-asCOX2及SGC7901-pcDNA细胞总蛋白,银染显色,Melanie32-D软件分析两种细胞蛋白质组的表达差异.结果:获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱.图像分析发现6个蛋白点只在SGC7901-pcDNA细胞中检测到表达,4个点只在SGC7901-asCOX2细胞中检测到表达.与SGC7901-pcDNA细胞相比,在SGC7901-asCOX2细胞中有10个蛋白质点表达下调,6个蛋白点表达上调.结论:人胃癌细胞SGC7901-asCOX2及SGC7901pcDNA表达的蛋白质组有明显差异.

环氧合酶-2在口腔黏膜下纤维性变癌变过程中作用研究

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)癌变组织中的表达,观察槟榔碱对人口腔角质形成细胞(KC)COX-2表达的影响。方法应用免疫组化SP法检测15例OSF癌变组织,30例OSF组织,10例正常口腔黏膜中COX-2蛋白表达,Western-blot法检测不同浓度槟榔碱(30、60、90ug/mL)对KCCOX-2蛋白表达的影响。结果COX-2在正常黏膜组织中无明显表达,在OSF组织及OSF癌变组织中阳性表达率分别是36.7%(11/30)、80.0%(12/15),且癌变组织中表达强度明显高于OSF组织(P<0.05);槟榔碱呈剂量依赖性增加KCCOX-2蛋白表达,不同浓度槟榔碱组均高于空白对照组(P<0.05)。结论COX-2在OSF癌变组织中表达异常增高,槟榔碱能增加KCCOX-2表达,COX-2过度表达可能在OSF癌变过程中起一定作用。

榜嘎总碱对关节炎模型大鼠炎症因子表达的影响

目的观察榜嘎总碱对弗氏完全佐剂致关节炎模型大鼠环氧合酶-2(COX-2)、白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、前列腺素E2(PGE2)活性的影响。方法建立关节炎模型大鼠模型。实验大鼠分为空白对照组、模型组、阿斯匹林组、榜嘎总碱低剂量组及高剂量组。用放免法检测COX-2、IL-1、TNF和PGE2活性。结果榜嘎总碱能显著降低模型大鼠血清中COX-2活性及IL-1、TNF和PGE2的含量,并呈现一定的量-效关系。结论榜嘎总碱对关节炎模型大鼠具有明显的抗炎作用。

盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞PGE_2、COX-2表达的影响

目的研究盐酸小檗碱对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响,探讨盐酸小檗碱的抗炎作用机理。方法MTT法测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响;酶联免疫法(ELA)检测盐酸小檗碱对PGE2生成的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA的表达;蛋白印迹法(Western Blotting)检测COX-2的蛋白表达。结果盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞有生长增殖抑制作用;盐酸小檗碱抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞PGE2的生成;但是对COX-2 mRNA及COX-2蛋白表达均无明显影响。结论盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞有生长增殖抑制作用,盐酸小檗碱不是通过抑制COX-2生成的途径来影响PGE2的生成的。

盐酸青藤碱通过C/EBPβ-COX-2通路抑制LPA诱导的肝癌细胞增殖

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用。方法采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖。结果用10μmol/L LPA处理Huh7细胞不同时间(0~6 h)后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性升高;分别用不同浓度的LPA(0~10μmol/L)处理Huh7细胞6 h后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达均呈浓度依赖性升高;SIN浓度依赖性抑制LPA所诱导的C/EBPβ、COX-2表达及细胞增殖。结论LPA通过诱导C/EBPβ-COX-2通路表达促进人肝癌Huh7细胞增殖,而SIN能够通过下调C/EBPβ-COX-2表达抑制LPA所诱导的细胞增殖。

马钱子碱经皮给药对乳腺癌种植瘤中VEGF和COX-2蛋白表达的影响

目的:探讨马钱子碱经皮给药对乳腺癌种植瘤的抑制机制,为乳腺癌的治疗提供新的途径。方法 :培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,取对数生长期细胞制成单细胞悬液。20只雌性Balb/c-nu/nu裸鼠麻醉后,无菌条件下,局部肌肉注射乳腺癌单细胞悬液0.2 mL,复制乳腺癌肿瘤模型。20只荷瘤裸鼠随机分为4组:马钱子碱高剂量组(A组)、中剂量组(B组)、低剂量组(C组)和模型组(D组),分别给予20%、10%、5%浓度的马钱子碱膏(经腹腔给药,每日总剂量不超过LD50)和凡士林经皮给药,涂抹裸鼠的整个腹部和造模的部位,每次1 g,每日4次,连续15 d。观察各组裸鼠生存状态和肿瘤生长情况,评价抑瘤率;检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:①肿瘤大小和抑瘤率:A组和B组裸鼠生存状态良好,肿瘤引起的活动障碍较轻,肿瘤生长均受到不同程度的抑制,肿瘤生长较C组和D组迟缓,各组的抑瘤率分别为A组53%、B组45%、C组27%(P<0.05);而C组和D组裸鼠出现活动障碍、瘫痪、消瘦和精神萎靡,肿瘤体积较大。②免疫组化结果:VEGF和COX-2马钱子碱A组分别为0.22±0.01和0.15±0.02,B组分别为0.25±0.01和0.18±0.01,C组分别为0.26±0.02和0.20±0.01,D组分别为0.42±0.02和0.35±0.03。VEGF和COX-2蛋白在肿瘤组织中表达的程度与模型组比较是随马钱子碱剂量的增加而逐渐减弱,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:马钱子碱经皮给药能抑制乳腺癌种植瘤中VEGF和COX-2的蛋白表达。

基于ERK/NF-κB/COX-2信号通路研究珠子参总皂苷改善对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的作用机制

研究珠子参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠肝损伤的影响及作用机制。将雄性昆明小鼠随机分为空白组、TSPJ组(200 mg·kg^(-1),ig)、模型组、APAP+TSPJ低剂量组(50 mg·kg^(-1),ig)、APAP+TSPJ中剂量组(100 mg·kg^(-1),ig)、APAP+TSPJ高剂量组(200 mg·kg^(-1),ig)和APAP+N-乙酰半胱氨酸组(200 mg·kg^(-1),ip)。给药组每天ig或ip相应的药物,每天1次,连续14 d。末次给药1 h后,除空白组和TSPJ组外,各组小鼠均灌胃给予500 mg·kg^(-1) APAP,24 h后收集小鼠血清与肝脏组织进行血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2、IL-6、IL-4、IL-10及肝组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的水平,苏木精-伊红染色观察肝组织形态学改变;实时定量PCR法测定肝组织中淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6G,Ly6G)、半乳糖凝集素3(galectin 3,Mac-2)、TNF-α、IL-1β、COX-2、IL-6、IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot法测定肝组织中Ly6G、Mac-2、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)、COX-2、核因子κB抑制因子α(inhibitor of nuclear factorκB protein α,IκBα)、磷酸化核因子κB抑制因子α(phosphorylated inhibitor of nuclear factorκB protein α,p-IκBα)、胞浆和胞核中核因子κB亚基p65(nuclear factorκB subunit p65,NF-κB p65)蛋白表达。结果显示,TSPJ可显著降低APAP诱导小鼠肝脏系数、血清中ALT、AST、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2水平及肝组织LDH、MPO、MDA水平和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高血清中IL-4、IL-10含量及肝组织中GSH、CAT、SOD、T-AOC水平和肝组织中IL-4、IL-10 mRNA表达;改善肝脏病理损伤程度,抑制肝组织中性粒细胞浸润和巨噬细胞募集;降低肝组织中中性粒细胞标记物Ly6G、巨噬细胞标记物Mac-2和COX-2 mRNA和蛋白表达,降低p-ERK、p-IκBα、胞核NF-κB p65蛋白表达和p-ERK/ERK、p-IκBα/IκBα比率,升高胞浆NF-κB p65蛋白表达。以上结果表明,TSPJ对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著保护作用、可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制与抑制ERK/NF-κB/COX-2信号通路激活,进而抑制炎性细胞浸润、炎症因子生成和抑制肝细胞损伤密切相关。

白芍总苷对巨噬细胞生成PGE_2的影响及机制研究

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是造成人类丧失劳动力与致残的主要病因之一,给患者和社会带来巨大的痛苦与经济负担。以往研究证实了白芍总苷（total

老瓜头生物总碱对LPS诱导RAW264.7细胞中COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的:研究老瓜头生物总碱(TACKI)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7在COX-2酶活性、基因表达及蛋白表达的影响。方法:采用LPS诱导RAW264.7细胞作为炎症模型,以非甾体抗炎药选择性COX-2酶抑制剂塞来昔布作为阳性对照。MTT比色法分析TACKI对RAW264.7生长活性的影响,LPS长时间刺激RAW264.7,ELISA检测细胞上清液中前列腺素-E2(PGE2)活性,以PGE2的活性反映COX-2的酶活性,半定量RT-PCR检测RAW264.7细胞中COX-2 mRNA的表达,免疫荧光观察RAW264.7细胞中COX-2的表达,Western blotting法检测COX-2蛋白表达。结果:与LPS组比较,TACKI 0.1,1μg·L-1能减弱COX-2酶活性(P<0.05),TACKI 0.01,0.1,1μg·L-1可下调COX-2 mRNA的表达(P<0.05),TACKI 0.1,1μg·L-1能减少COX-2蛋白表达(P<0.05)。结论:TACKI减弱LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性,对LPS诱导RAW264.7细胞中COX-2基因表达及蛋白表达抑制作用明显。

芫花总黄酮的抗炎机制研究

目的研究芫花总黄酮(TFDG)对脂多糖(LPS)协同干扰素γ(IFN-γ)诱导鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型中亚硝酸盐含量、诱导型合酶和细胞因子表达的影响,并从ERK/MAPK通路探讨其抗炎机制。方法细胞随机分为芫花总黄酮处理组,阳性药物组(I-NIL50μM)、炎症模型组和正常对照组;Griess反应测定TFDG25、50、100mg/L3个剂量和预刺激、同时加入、预处理3个处理时间及I-NIL对激活细胞上清液中亚硝酸盐的影响,并测定TFDG3个剂量及I-NIL对静息细胞上清液中亚硝酸盐产量的影响;MTT法测定TFDG3个剂量和I-NIL分别对激活细胞和静息细胞的细胞活力的影响;RT-PCR检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达的影响;Western blot检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2和p-ERK蛋白表达的影响。结果模型组中一氧化氮(NO)产物亚硝酸盐含量、诱导型合酶iNOS和COX-2基因和蛋白表达,细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达,ERK蛋白磷酸化水平均明显高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),细胞活力显著下降(P<0.01);TFDG呈剂量和时间依赖性抑制激活细胞上清液中亚硝酸盐含量(P<0.01),提高炎症损伤的细胞活力(P<0.01);TFDG对静息细胞上清液中亚硝酸盐含量无影响,无细胞毒性且于100mg/L剂量促进细胞增殖(P<0.05)。阳性药物I-NIL于50μM剂量的抑制率为35.20%(P<0.01),提高炎症损伤后的细胞活力(P<0.01),但对静息细胞呈细胞毒性(P<0.05)。与模型组比较,芫花总黄酮下调iNOS基因和蛋白表达(P<0.01,P<0.05),抑制COX-2基因表达(P<0.01),对COX-2蛋白表达仅在高剂量100mg/L具抑制效果(P<0.01);下调细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达(P<0.01),同时能抑制ERK蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论芫花总黄酮抑制激活细胞中iNOS基因和蛋白的表达从而降低NO稳定产物亚硝酸盐的产量,抑制COX-2基因和蛋白的表达,同时抑制细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达,部分机制为抑制ERK/MAPK信号通路中ERK蛋白磷酸化而达到多靶点抗炎效果。

小檗碱抑制兔胆固醇结石形成的作用和机制

目的观察小檗碱对兔胆囊胆固醇结石形成的预防作用和机制。方法动物模型:日本大耳白兔30只,随机等分三组:每组10只,对照组喂普通饮食;结石组,喂含1.2%高胆固醇饲料100g;实验组,同时喂饲含1.2%高胆固醇饲料100 g和每日10 mg/kg的小檗碱灌胃。8周后利用全自动生化分析仪酶法测定兔胆汁中的总胆固醇、磷脂、胆盐,通过Carey表计算胆固醇饱和指数(cholesterol saturation index,CSI),观察各组胆囊胆汁结晶情况及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)含量。结果实验组比成石组形成胆固醇结晶机会明显减少(8/10、3/10,χ2=5.051,P<0.05);各组胆囊胆汁中CSI(对照组0.82±0.23、结石组1.64±0.27及实验组1.13±0.29);结石组COX-2表达与空白组相比明显升高(47.66±1.54比28.39±1.46,P<0.05),实验组较之结石组COX-2表达量有降低(37.42±2.45比47.66±1.54,P<0.05)。结论小檗碱能够抑制胆固醇结石形成和发展,其机制与调节脂质代谢,改善致石性胆汁及抑制COX-2的活性等作用有关。

欧芹根总黄酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠的治疗作用及机制研究

目的探讨欧芹根总黄酮对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型的影响机制。方法采用高脂饮食诱导NAFLD大鼠40例建模,随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组和欧芹根总黄酮组,各10只,分别给予生理盐水、生理盐水、水飞蓟素、欧芹根提取物,除正常组外,其他组均每日喂食高脂饲料。检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR)法检测肝组织中环氧合酶-2(COX-2)的mRNA表达水平。结果建模成功,模型组大鼠血清ALT,AST,TC,TG水平与正常组大鼠相比均明显升高(P<0.05);水飞蓟素和欧芹根总黄酮干预后能显著降低NAFLD大鼠上述4项指标水平,并抑制COX-2的mRNA表达,差异均有统计学意义(P<0.05);欧芹根总黄酮作用略强于水飞蓟素,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论欧芹根总黄酮对NAFLD大鼠有一定的治疗作用,其作用机制与抑制肝组织中COX-2的表达有关。

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。

溴芬酸钠滴眼液对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的探讨溴芬酸钠滴眼液对碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管(CNV)的抑制作用。方法健康清洁级成年雄性SD大鼠192只,任意取172只大鼠通过碱烧伤法建立右眼CNV模型,按照随机数字表法分为CNV组、模型对照组、溴芬酸钠组和氟米龙组,每组43只大鼠43只眼,其余20只大鼠40只眼为正常对照组,不做任何处理。模型对照组、溴芬酸钠组和氟米龙组于造模后第1天分别给予PBS、溴芬酸钠滴眼液及0.1%氟米龙滴眼液连续点眼21d。造模后每日裂隙灯显微镜下观察各组大鼠角膜、前房及CNV生长情况,并于造模后1、3、7、14、21、28d行裂隙灯显微镜照相,计算CNV面积比率;于造模后7、14、28d每组制作眼球石蜡切片,行苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色,检测角膜中CD45及血管内皮生长因子(VEGF)-A的表达;取实验眼角膜组织,采用实时荧光定量PCR法检测角膜组织中环氧合酶(COX)-2及VEGFmRNA含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测角膜组织中COX-2及VEGF蛋白含量。结果造模后1d,各模型组角膜水肿、混浊;造模后7d,角膜水肿持续加重;造模后14d,角膜混浊、水肿程度逐渐减轻;造模后28d,CNV组、模型对照组有白斑形成,溴芬酸钠组和氟米龙组有角膜云翳。造模后7、14、21、28d,溴芬酸钠组和氟米龙组CNV面积比率均较CNV组和模型对照组低,差异均有统计学意义(均P<0.05);各时间点溴芬酸钠组与氟米龙组CNV面积比率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。组织病理学染色及免疫组织化学染色显示,造模后7d,各模型组角膜上皮变薄,基质层水肿增厚,胶原纤维排列紊乱,VEGF-A阳性表达;仅CNV组及模型对照组存在少量CD45阳性炎性细胞浸润。造模后14d、28d,各组角膜上皮角化,基质水肿逐渐减轻,均未见炎性细胞浸润,CNV组、模型对照组角膜中央可见CNV。荧光定量PCR结果显示,造模后7d,CNV组、模型对照组角膜COX-2及VEGFmRNA相对表达量均明显高于正常对照组、溴芬酸钠组和氟米龙组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ELISA检测结果显示,造模后7d、14d,溴芬酸钠组COX-2及VEGF蛋白表达量明显低于CNV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型对照组和溴芬酸钠组角膜穿孔发生率均为10%(1/10),氟米龙组角膜穿孔发生率达30%(3/10),各造模组前房积血发生率为10%~30%。结论溴芬酸钠滴眼液可抑制大鼠碱烧伤后CNV的形成与发展,这一作用可能是通过调节COX-2表达、减轻炎症反应和抑制VEGF产生介导的。

赤芍总苷对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响及作用机制探讨

目的:探讨赤芍总苷对肝癌细胞SMMC-7721细胞迁移能力的影响及对血管内皮生长因子(VEGF),环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,随机分组,不加药物作用的为空白组,其他各组为赤芍总苷低、中、高剂量组,将不同质量浓度(200,400,600 mg·L-1)的赤芍总苷作用于细胞24 h后,采用MTT法检测赤芍总苷对细胞抑制作用,细胞划痕实验测定迁移能力,RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果:与空白组比较,赤芍总苷能够明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈现量效关系(P<0.01),并能够抑制细胞的迁移(P<0.01),RTPCR及Western blot结果显示,赤芍总苷作用细胞24 h后,可使COX-2 mRNA和VEGF蛋白的表达明显下降(P<0.01)。结论:赤芍总苷能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、迁移,其机制可能是通过下调COX-2,VEGF的表达来实现,从而为赤芍总苷治疗肝癌的发展及其临床应用提供理论和实验依据。

培养雪莲总黄酮对巨噬细胞炎性介质一氧化氮和前列腺素E_2的影响

目的:研究培养雪莲总黄酮对炎性介质一氧化氮(NO),前列腺素E2(PGE2)分泌以及一氧化氮合酶(iNOS),环氧酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨其抗炎机制。方法:用Griess法测定培养雪莲总黄酮对Raw264.7细胞NO的影响,放射免疫法测定培养雪莲总黄酮对Raw264.7细胞PGE2含量;逆转录聚合酶链式反应方法检测Raw264.7细胞iNOS,COX-2mRNA表达情况。结果:培养雪莲总黄酮可明显降低Raw264.7细胞上清中NO,PGE2含量,同时,降低iNOS,COX-2 mRNA表达。结论:培养雪莲总黄酮的抗炎作用与抑制炎性介质NO,PGE2分泌有关,抑制iNOS,COX-2 mRNA表达从而降低炎性介质NO,PGE2分泌可能是培养雪莲总黄酮的抗炎作用的机制之一。

山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS,COX-2,NF-кB表达的影响

目的观察山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS、COX-2及NF-кB表达的抑制作用。方法采用Griess法检测山香圆总黄酮对NO生成的影响,通过westernblot分析i NOS、COX-2及NF-кB的表达。结果山香圆总黄酮能显著抑制RAW264.7细胞中NO的生成以及iNOS、COX-2及NF-кB蛋白的表达,且随着浓度的增加,抑制效果明显。结论山香圆总黄酮的抗炎作用是通过下调NF-кB的活性进而抑制i NOS、COX-2的表达来实现的。

青藤碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及COX-2和VEGF表达的影响

目的探讨青藤碱对人乳腺癌MCF-7细胞系增殖的抑制作用及其对环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度青藤碱(0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 mmol/L)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;以实时聚合酶链反应(real-time PCR)分析青藤碱(0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 mmol/L)对人乳腺癌MCF-7细胞COX-2和VEGF mRNA表达的影响;以酶联免疫(ELISA)方法分析青藤碱(0.5、1.0、2.5 mmol/L)对人乳腺癌MCF-7细胞上清VEGF含量的影响。结果 (1)将对照组定义为100%,青藤碱浓度在0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 mmol/L时,出现剂量依赖性的MCF-7细胞增殖率降低(78%、68%、53%、35%、17%,P均<0.05)。(2)将对照组定义为1,0.25、1.0、2.5 mmol/L青藤碱组使MCF-7细胞COX-2mRNA相对表达值依次递降至0.75±0.12、0.64±0.15、0.35±0.14;VEGF mRNA相对表达值依次递降低为0.88±0.08、0.67±0.13、0.46±0.11,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)MCF-7细胞上清VEGF含量按对照组、青藤碱0.25、1.0、2.5 mmol/L组之序[(90.3±8.2)、(76.6±9.7)、(55.7±7.2)、(31.2±5.2)pg/ml]依次降低(P<0.05)。结论青藤碱能够抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其作用机制可能是通过抑制COX-2表达,从而影响VEGF的表达和释放。