槐角黄酮调控miR-199a-3p/p38MAPK/NF-κB对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响

目的 探讨槐角黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响。方法 将乳腺癌细胞BT549分为正常对照(NC)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、miR-NC组、miR-199a-3p组、高剂量+anti-miR-NC组、高剂量+anti-miR-199a-3p组。采用CCK-8、克隆形成实验评估细胞增殖;采用Transwell法评估细胞迁移和侵袭。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-p38MAPK和p-p65蛋白表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,miR-199a-3p表达升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,高剂量组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 槐角黄酮可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症反应,其机制可能是通过上调miR-199a-3p表达、抑制p38MAPK/NF-κB通路实现的。

槐角黄酮通过调控miR-4284表达对结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨槐角黄酮对结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法SW620细胞用RPMI-1640培养基常规培养,作为对照组,分别用浓度为2.5 mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml的槐角黄酮处理,记为槐角黄酮-低、中、高组;将miR-4284抑制剂及阴性对照载体质粒转染至SW620细胞,记为anti-miR-4284组、anti-miR-NC组;将miR-4284模拟物及阴性对照转染至SW620细胞后用10 mg/ml的槐角黄酮处理,记为槐角黄酮+miR-4284组、槐角黄酮+miR-NC组。MTT检测细胞抑制率;展开克隆形成实验并检测相关克隆细胞数量;应用流式细胞术确认细胞凋亡情况;蛋白表达水平采用蛋白质印迹法完成;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结直肠癌组织和SW620细胞中miR-4284的表达水平。结果不同浓度槐角黄酮处理后,SW620细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,克隆形成实验显示克隆细胞形成数量减少,cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 9蛋白均呈高表达态势发展,miR-4284表达水平降低,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-4284表达后,SW620细胞增殖抑制活性明显升高,细胞凋亡率升高,细胞克隆形成数减少,cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 9蛋白呈高表达态势发展,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-4284过表达逆转了槐角黄酮对结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的作用。结直肠癌组织中miR-4284表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槐角黄酮通过下调miR-4284表达抑制结直肠癌SW620细胞增殖,促进细胞凋亡。

槐角黄酮通过调控miR-188-5p/PRMT5基因表达对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的研究槐角黄酮对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)5和miR-188-5p mRNA的表达,Western印迹检测PRMT5、增殖相关蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1和p21、迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-188-5p与PRMT5的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡。结果槐角黄酮可抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移和增殖,且呈显著的剂量依赖性;槐角黄酮可以促进A549细胞中miR-188-5p表达,抑制PRMT5表达;双荧光素酶报告系统实验结果表明,miR-188-5p靶向调控PRMT5的表达;过表达miR-188-5p和抑制PRMT5均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制miR-188-5p逆转了槐角黄酮对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论槐角黄酮通过miR-188-5p靶向PRMT5基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。槐角黄酮对肺癌具有潜在治疗作用。

槐角黄酮胶囊制剂成型工艺研究

目的:研究槐角黄酮胶囊制剂成型工艺。方法:确定加入辅料最大量,选择适合的稀释剂、润滑剂、崩解剂以确定基本处方,考察堆密度和临界相对湿度(CRH),制备胶囊,检查其装量差异和崩解时限。结果:根据临床剂量和胶囊实际装量,加入适当的辅料可以使制成的药粉符合胶囊填装要求。结论:制剂符合胶囊剂质量要求。

槐角黄酮通过调控LncRNA FBXL19-AS1/miR-342-3p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

探讨槐角黄酮对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响并分析其对长链非编码RNA FBXL19-AS1(LncRNA FBXL19-AS1)/微小RNA-342-3p(miR-342-3p)通路的调控机制。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法与平板克隆试验检测不同质量浓度(1,5,10 mg·mL-1)的槐角黄酮对肝癌Huh7细胞增殖能力的影响;Transwell小室试验检测槐角黄酮对Huh7细胞迁移及侵袭能力的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测槐角黄酮对Huh7细胞中FBXL19-AS1和miR-342-3p表达水平的影响;双荧光素酶报告试验检测FBXL19-AS1是否靶向miR-342-3p;采用上述方法检测抑制FBXL19-AS1表达或FBXL19-AS1过表达后对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白1(cyclinD1),p21,MMP-2,MMP-9蛋白表达量。槐角黄酮可明显抑制Huh7细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05),促进p21蛋白表达(P<0.05),抑制cyclinD1,MMP-2,MMP-9蛋白表达(P<0.05),并可降低MMP-2和MMP-9活性(P<0.05);槐角黄酮处理后Huh7细胞中FBXL19-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-342-3p的表达水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告试验结果证实FBXL19-AS1靶向抑制miR-342-3p的表达;抑制FBXL19-AS1表达后细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞克隆形成数显著减少(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),cyclinD1,MMP-2,MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.05),MMP-2和MMP-9活性显著降低(P<0.05),p21蛋白表达水平显著升高(P<0.05);FBXL19-AS1过表达可逆转槐角黄酮对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。槐角黄酮通过调控LncRNA FBXL19-AS1/miR-342-3p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭。

槐角黄酮衍生物制备工艺及其降脂作用研究

目的:通过对槐角的黄酮提取物及其衍生物制备工艺研究,对比药物降脂作用,探索中药创新的研究思路。方法:槐角通过乙醇提取、大孔吸附树脂法得到槐角总黄酮;槐角总黄酮通过酸水解工艺得到槐角总黄酮苷元;再从槐角总黄酮苷元中分离出主要有效成分染料木素,染料木素通过结构修饰得到单体化合物三甲基染料木素;采用高脂血症小鼠模型进行药物降脂活性的对比试验,考察小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量。结果:槐角黄酮提取物及其衍生物各剂量组能明显降低小鼠高脂血症模型中TC、TG与LDL-C的含量,同时升高HDL-C的含量;各剂量组(0. 15 g/kg、0. 3 g/kg、0. 6 g/kg)较模型组均显著降低了小鼠血清TC水平,量效关系明显;各0. 6 g/kg组较模型组均显著降低了小鼠血清TG水平;三甲基染料木素0. 3 g/kg、0. 6 g/kg组和其余0. 6 g/kg组较模型组均显著降低了小鼠血清LDL-C水平;相同剂量下,三甲基染料木素组的效果明显。结论:通过从中药中筛选出有效部位,在有效部位中分离出有效成分,有效成分经过结构修饰而得到疗效更好的药物,这是中药新药创新的一种可行的思路。

响应面试验优化“Amano”β-糖苷酶水解槐角异黄酮工艺

利用"Amano"β-糖苷酶对槐角异黄酮进行水解制备染料木黄酮。采用高效液相色谱法检测槐角异黄酮水解率。探讨酶质量浓度、水解时间、p H值和水解温度对异黄酮水解率的影响,并通过响应面法确定最佳水解条件。结果表明,最佳水解条件为酶质量浓度0.5 mg/m L、水解时间3.68 h、p H 4.95、水解温度59.2℃。在此条件下,槐角异黄酮水解率达95.76%。该研究为自然界药用植物的开发应用提供了理论依据。

盐酸催化水解槐角异黄酮的研究

利用盐酸甲醇溶液对槐角总异黄酮进行水解制备染料木黄酮。采用高效液相色谱法检测槐角异黄酮水解率。探讨水解时间、盐酸浓度和水解温度对异黄酮水解率的影响,并通过响应面法确定最佳水解条件。实验结果表明最佳水解条件为:水解时间3.8 h、盐酸浓度2.59 mol/L、水解温度78.5℃。在此工艺下,槐角异黄酮水解率达93.38%。

高效液相色谱法测定槐角总黄酮水解产物中染料木素和槐角苷含量

目的建立同时测定槐角总黄酮水解产物中染料木素和槐角苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液（70：30）,流速1.0 mL/min,进样量为10 μL,检测波长262 nm,柱温30℃。结果进样量槐角苷在3.94~591 ng（r=0.9999）、染料木素在20.12~1006 ng（r=0.9999）范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为101.68%和97.99%,RSD分别为1.68%和1.81%（n=6）。结论该方法简便、快速、准确、重复性好,可作为控制槐角总黄酮水解产物质量的定量依据。

HPLC测定槐角总黄酮水解产物中的染料木素

目的采用HPLC测定槐角总黄酮水解产物中染料木素的含量。方法色谱柱为Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温28℃,流动相为甲醇-水(60∶40),流速1 mL.min-1,检测波长260 nm。结果染料木素0.02～0.20μg与内峰面积的线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为100.40%,RSD=0.92%(n=6)。结论所用方法简便、准确、重复性好,可作为控制槐角总黄酮水解产物质量的定量依据。