RP-HPLC法测定人尿苷二磷酸葡醛酸转移酶UGT1A3转基因细胞中槲皮素

目的:建立反相高效液相色谱法测定人重组UGT1A3转基因细胞中槲皮素,并研究该酶对槲皮素的相关代谢及动力学参数测定。方法:Bac-to-Bac系统表达的人UGT1A3重组酶细胞破碎液与槲皮素共孵育之后,以乙腈沉淀蛋白,采用木犀草素为内标,以Phenomenex Luna C18柱为分析柱,甲醇(A)-0.1%甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱:0~25 min(30∶70-80∶20,A∶B),>25~25.5min(80∶20),>25.5~27 min(80∶20-30∶70),>27~30 min(30∶70);流速1.0 ml/min,紫外检测波长为368 nm。结果:槲皮素在5~200μmol/L内线性关系良好(r=0.9999),检测限为1.25μmol/L(S/N≥3),定量限为5μmol/L(S/N>10,RSD=6.99%),方法回收率达99.1%~103.5%,日内、日间RSD分别<2.5%和<8%。另测得UGT1A3催化槲皮素的Km为(62.95±13.16)μmol/L,Vmax为(284.50±24.35)nmol.min-1.g-1,清除率Vmax/Km为4.52 ml.min-1.g...

山蜡梅颗粒的质量标准研究

目的建立山蜡梅颗粒的质量控制标准。方法以山蜡梅药材为对照,采用薄层色谱法对该产品进行定性鉴别,并用高效液相色谱法对其中含有的槲皮素及山柰素进行含量测定。结果鉴别项下的阴性对照无干扰,重现性好;槲皮素在1.61μg/mL～25.72μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.89%,RSD为1.21%;山柰素在2.16μg/mL～34.60μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.75%,RSD为1.53%。结论该方法准确、简便、灵敏度高,结论可靠,可作为山蜡梅颗粒的质量控制标准。