槲皮素-3-O-葡萄糖苷抑制α-乳白蛋白非酶糖基化机制分析

以牛α-乳白蛋白(bovineα-lactalbumin,α-La)和果糖为非酶糖基化模型,分析槲皮素-3-O-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucuronide,Q3G)对α-La非酶糖基化过程中果糖胺和5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)形成及游离氨基含量和褐变度的影响,然后结合分子对接和质谱鉴定技术进一步揭示其对非酶糖基化的抑制机理。结果表明:Q3G能显著减轻糖基化过程中的褐变程度,增加游离氨基含量,抑制果糖胺和5-HMF的形成,延缓糖基化反应的进程,且Q3G添加量为2 mmol/L时效果最好。分子对接结果表明Q3G可通过氢键、范德华力和疏水相互作用与α-La的活性氨基酸残基进行结合,影响α-La和果糖的糖基化反应,缓解糖基化反应的进程。同时,超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道离子阱串联质谱分析也发现Q3G屏蔽了糖基化的潜在活性位点Lys93和Lys108,且新增糖基化位点Lys98的糖基化活性较弱,可达到抑制非酶糖基化的作用。本研究可为Q3G作为潜在抗糖基化剂的开发提供理论基础。

槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷通过PI3K/AKT通路对免疫性骨髓衰竭小鼠血小板凋亡和活化的影响

目的:探讨槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷(QG)通过PI3K/AKT通路对免疫性骨髓衰竭小鼠模型血小板凋亡和活化的影响。方法:建立免疫性骨髓衰竭小鼠模型,将40只C57BL/6小鼠随机分为正常、模型、环孢素(CsA)、QG共4组,每组10只。正常组及模型组小鼠分别给予生理盐水灌胃,CsA组给予0.027 g/kg CsA灌胃,QG组给予0.2 g/kg QG灌胃。造模3 d后处死小鼠并从尾静脉处抽血,用全自动血细胞分析仪测定血小板数并制备洗涤血小板。采用流式细胞仪检测BAX、BAD、caspase-9、磷脂酰丝氨酸(PS)、血小板激活复合物-1(PAC-1)、P-选择素的表达;使用Western blot法测定PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的蛋白含量;运用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测PI3K mRNA、AKT mRNA的表达。结果:与正常组相比较,模型组中小鼠外周血小板数明显减少,洗涤血小板中的BAX、BAD、caspase-9、PS、PAC-1、P-选择素明显升高(P<0.05),同时,PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白含量以及PI3K mRNA和AKT mRNA表达水平则明显下降(P<0.05);与模型组相比较,CsA组及QG组洗涤血小板中的BAX、BAD、caspase-9、PS、PAC-1、P-选择素明显下降(P<0.05),而PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平以及PI3K mRNA及AKT mRNA表达水平则明显上升(P<0.05)。结论:QG能减少免疫性骨髓衰竭小鼠血小板凋亡,并参与部分血小板活化功能的调节,其机制可能与PI3K/AKT通路有关。

HPLC法测定不同产地黄蜀葵花中金丝桃苷异槲皮苷及槲皮素-3'-葡萄糖苷含量

目的测定不同产地黄蜀葵花药材中金丝桃苷,异槲皮苷,槲皮素-3'-葡萄糖苷含量。方法高效液相色谱法。色谱柱:Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇(10∶1)-0.4%磷酸,梯度洗脱;检测波长:360nm;柱温:室温;流速:1.0ml/min。结果江苏江堰黄蜀葵花中金丝桃苷含量1.12%,RSD为1.54%;异槲皮苷含量0.68%,RSD为1.58%;槲皮素-3'-葡萄糖苷含量0.59%,RSD为1.47%;江苏兴化黄蜀葵花中金丝桃苷含量0.98%,RSD为1.49%;异槲皮苷含量0.60%,RSD为1.62%;槲皮素-3'-葡萄糖苷含量0.52%,RSD为1.55%;河北邢台黄蜀葵花中金丝桃苷含量1.03%,RSD为1.72%;异槲皮苷含量0.62%,RSD为1.84%;槲皮素-3'-葡萄糖苷含量0.54%,RSD为1.62%。结论江苏江堰黄蜀葵花中金丝桃苷,异槲皮苷,槲皮素-3'-葡萄糖苷含量均最高,江苏兴化黄蜀葵花中金丝桃苷,异槲皮苷,槲皮素-3'-葡萄糖苷含量均最低,该方法简便,准确,重现性好,为各地黄蜀葵花药材的进一步开发利用提供质量控制依据。

HPLC测定南葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的含量

目的 :研究南葶苈子中槲皮素 3 O β D 葡萄糖 7 O β D 龙胆双糖苷的含量测定方法 ,建立南葶苈子药材质量标准。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,以自制标准品作对照 ,对南葶苈子药材中主要有效成分槲皮素 3 O β D 葡萄糖 7 O β D 龙胆双糖苷进行了含量测定。 结果 :回收率为 99.78% ,RSD为 2 .4 %。结论 :该方法可用于南葶苈子药材的质量控制。

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对游离脂肪酸诱导HepG2细胞脂肪变性的作用

探讨槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(quercetin-3-O-β-D-glucuronide,Q3GA)对游离脂肪酸诱导的人源肝癌细胞HepG2细胞脂质蓄积的甘油三酯调节和氧化应激的作用及其可能的相关机制。采用油红染色检测Q3GA对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞中脂滴含量的影响,并同时检测其对甘油三酯和胆固醇的作用。DCFH-DA法检测Q3GA对HepG2细胞脂质蓄积引起的活性氧(ROS)的变化;硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法分别测定丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。RT-PCR分析脂肪酸氧化相关的基因过氧化物酶体增殖物受体(PPARα)、肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1A)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)、细胞色素P450 4A11(CYP4A11)、乙酰辅酶A氧化酶(ACO)的表达情况。实验结果显示,Q3GA可剂量依赖性降低FFA诱导的Hep G2细胞脂质蓄积和甘油三酯的含量,但未降低胆固醇的含量。同时可改善脂肪酸氧化引起ROS,MDA的升高以及SOD的降低。另外,Q3GA在一定浓度下可上调脂肪酸β氧化相关基因PPARα、CPT1A、MCAD的表达,而对CYP4A11和ACO的表达没有促进作用。综上所述,Q3GA可抵抗脂肪酸氧化引发肝细胞的氧化应激损伤,保护HepG2细胞,降低游离脂肪酸诱导HepG2细胞脂质蓄积和甘油三酯的含量,其调节机制可能与其对HepG2细胞中游离脂肪酸氧化有关。

春柴胡中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的单体制备与含量测定研究

目的分离制备春柴胡中特征化学成分并建立含量测定方法。方法采用聚酰胺柱色谱,制备薄层色谱,SephadexLH-20柱色谱分离纯化,利用波谱技术(LC-MS,UV,1H-NMR)进行结构鉴定;采用高效液相色谱法分析,色谱柱KromasilC18(4.6mm×250mm,5μm),流动相甲醇-0.5%醋酸(43∶57,V/V),检测波长365nm。结果从春柴胡正丁醇萃取部位分离得到一化合物,鉴定为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷;槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的线性范围为4.375～140μg.ml-1,r=0.9998;平均回收率为98.43%,RSD为2.26%(n=6)。结论槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷化合物系首次从该柴胡属植物中分离得到,建立的春柴胡中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷高效液相色谱含量测定方法,简便、准确可靠,可用于春柴胡药材的质量控制。

HPLC法测定桑叶药材中槲皮素-3,7-二氧葡萄糖苷的含量

目的:建立测定桑叶药材中槲皮素-3,7-二氧葡萄糖苷含量的HPLC方法.方法:色谱柱为C18柱(250mm×464mm);检测波长为257nm;流速为0.8ml/min;流动相为甲醇-水-冰乙酸-二乙胺(25:75:2:0.2).结果:此条件下槲皮素-3,7-二氧葡萄糖苷与其他组分能够得到很好分离.槲皮素-3,7-二氧葡萄糖苷在0.4～2.0ug间呈线性关系(r=0.9999).结论:本方法重现性好,灵敏度高,结果准确可靠.

高效液相色谱法测定黄蜀葵花总黄酮胶囊中的金丝桃苷和槲皮素-3’-葡萄糖苷

建立高效液相色谱法测定黄蜀葵花总黄酮中金丝桃苷和槲皮素-3’-葡萄糖苷的含量。以乙腈-0.5%磷酸水溶液(22∶78)为流动相,流量为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为360nm。金丝桃苷和槲皮素-3’-葡萄糖苷的质量浓度分别在12.232~73.392μg/mL,11.044~66.264μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,相关系数均为0.9999,检出限分别为200,180ng/g。样品加标回收率分别为99.73%,100.78%,测定结果的相对标准偏差分别为0.86%,1.48%(n=6)。该方法操作简单、快速,结果准确,重现性好,可为黄蜀葵花总黄酮胶囊的质量控制提供依据。

槲皮素-3-葡萄糖苷对心肌缺血及再灌注损伤的保护作用

目的槲皮素-3葡-萄糖苷(quercitrin-3-glucoside,QG)是一种黄酮单体化合物,为槲皮素3位葡萄糖苷的衍生物,槲皮素有明显的抗心肌缺血作用。但迄今为止未见QG对心肌缺血的影响的研究。方法本文通过药物诱导的小鼠心肌缺血、小鼠气管夹闭致心肌缺氧、冠状动脉结扎致小鼠和大鼠心肌缺血/再灌注损伤等多种心肌缺血动物模型,研究QG对心肌缺血损伤的保护作用,并对其可能机制进行了初步探讨。结果诱导的小鼠急性心肌缺血性损伤,延长气管夹闭小鼠心电持续时间。结论 QG对心肌缺血及再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制细胞膜脂质过氧化和增加一氧化氮合成有关。

槲皮素-3-葡萄糖苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:观察槲皮素-3-葡萄糖苷(quercitrin-3-glucoside,缩写为QG)对脑缺血-再灌注损伤大鼠的保护作用。方法:采用线栓法制备大鼠脑缺血-再灌注损伤的动物模型。通过QG对脑缺血-再灌注大鼠神经功能评分,病理组织学变化以及脑细胞凋亡情况的影响,探讨QG对脑缺血-再灌注损伤大鼠的保护作用及其可能的作用机制。结果:QG剂量组神经功能评分较模型组显著降低(P<0.05);TUNEL阳性细胞数QG剂量组与模型组相比明显减少(P<0.05)。结论:槲皮素-3-葡萄糖苷可明显改善大鼠脑缺血-再灌注损伤,减轻缺血再灌注导致的脑水肿、氧化损伤和能量代谢障碍。

槲皮素-3-葡萄糖苷对肾缺血-再灌注损伤大鼠的保护作用

目的:观察槲皮素-3-葡萄糖苷对急性肾缺血-再灌注损伤大鼠的保护作用。方法:采用夹闭大鼠双侧肾动脉45min后再灌注60min的方法,建立大鼠急性肾缺血-再灌注损伤的动物模型。通过测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),和TUNEL法分析肾小管上皮细胞的凋亡情况,探讨槲皮素-3-葡萄糖苷对急性肾缺血-再灌注损伤大鼠的保护作用及可能机制。结果:槲皮素-3-葡萄糖苷组MDA值显著降低(P<0.05);血清SOD含量升高明显;血清NO含量较模型组明显下降,两组比较有显著性差异(P<0.05)。槲皮素-3-葡萄糖苷组的TUNEL阳性细胞数与模型组相比明显减少(P<0.05)。结论:槲皮素-3-葡萄糖苷可以减轻肾小管细胞的损伤,对肾缺血-再灌注损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能是通过清除氧自由基,抑制脂质过氧化,进而改善肾功能。

分子对接和荧光光谱法研究槲皮素与β-葡萄糖苷酶的相互作用

结合分子对接法和光谱法,研究了槲皮素与β-葡萄糖苷酶的相互作用及作用机理。首先利用AutoDock 4.2软件对β-葡萄糖苷酶与槲皮素、竞争性抑制剂对硝基苯-β-D-巯基葡萄糖的分子对接分别进行研究,然后采用荧光光谱法研究了槲皮素与β-葡萄糖苷酶的结合反应,并测定了结合常数。结果表明:这种相互作用使β-葡萄糖苷酶发生内源荧光猝灭,属于静态猝灭机制。通过计算得到槲皮素与β-葡萄糖苷酶在17,27和37℃下结合常数分别为4.36×104,4.04×104和3.18×104 L.mol-1。氢键和疏水作用对槲皮素与β-葡萄糖苷酶的结合起重要作用,也存在静电作用力。分子对接研究和荧光光谱实验两者相互补充,可从理论和实验两方面协同研究槲皮素与β-葡萄糖苷酶之间的相互作用。

荞麦花总黄酮和槲皮素对α-葡萄糖苷酶活性的影响

目的观察荞麦花总黄酮和槲皮素对体内外α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,探讨其降血糖机制。方法提取大鼠小肠α-葡萄糖苷酶,分别测定荞麦花总黄酮及槲皮素对其活性的抑制作用;采用健康雄性SD大鼠为实验对象,随机分麦芽糖(2g/kg)组、麦芽糖(2g/kg)+荞麦花总黄酮(0.4g/kg)组、麦芽糖(2g/kg)+槲皮素(0.04g/kg)组、麦芽糖(2g/kg)+阿卡波糖(0.1g/kg)组,禁食12h后灌胃给药,分别于给药前和给药后60min用血糖仪测血糖。结果荞麦花总黄酮及槲皮素在浓度20,2,0.2mg/ml时能够显著抑制α-葡萄糖苷酶的活性(P<0.05),抑制率分别为54.74%,42.91%,35.79%和74.98%,59.38%和45.79%;二者对大鼠餐后血糖也有明显的抑制作用,与对照组比较,阿卡波糖、荞麦花总黄酮+麦芽糖和槲皮素+麦芽糖抑制率分别为74.22%,53.06%,64.33%(P<0.01)。结论荞麦花总黄酮和槲皮素在体内外对α-葡萄糖苷酶的活性均有明显的抑制作用,可能是其降血糖机制之一。

异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷与牛血清白蛋白相互作用的研究

目的研究异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、异槲皮苷(Ⅱ)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制。方法主要应用荧光猝灭法和紫外吸收光谱法。结果确定两化合物与牛血清白蛋白的猝灭机制主要为静态猝灭和非辐射能量转移。结论异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷与牛血清白蛋白有较强的相互作用,作用力主要为静电引力与疏水作用力;3′-OH比3′-OCH3更能增进黄酮与牛血清白蛋白的作用。

依帕司他与槲皮素对3-脱氧葡萄糖醛酮还原酶活性的影响

目的观察依帕司他与槲皮素对3-脱氧葡萄糖醛酮(3-DG)还原酶活性的影响。方法采用体外3-DG还原酶反应体系,应用紫外分光光度计(λ=530 nm)检测底物3-DG剩余量反映酶活性。结果反应组与空白对照组比较,3-DG剩余量明显减少(P<0.01)。依帕司他组与空白对照组比较,差异无显著性;与反应组比较,3-DG剩余量明显增多(P<0.01)。槲皮素组与空白对照组比较,3-DG剩余量明显减少(P<0.05);与反应组比较,剩余量明显增多(P<0.01)。结论依帕司他可完全抑制3-DG还原酶活性,槲皮素可部分抑制其活性。

HPLC法测定维药恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量

目的：建立 HPLC 法测定维药恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量。方法采用 HPLC 法测定新疆阿克苏、吐鲁番、伊犁地区维药恰麻古槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量，色谱条件：KromasilC18柱（200 mm＆#215;4．6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0．5％冰醋酸水溶液（25∶75，v/v）；检测波长：257 nm；流速：1．0 mL/min；柱温：30℃。结果恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在0．0105～0．2100 mg/mL 浓度范围内呈良好的线性关系（r ＝0．9997），平均加样回收率为99．1％，RSD 为2．4％（n ＝9），新疆阿克苏、吐鲁番、伊犁产地恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量分别为0．702、0．334、0．524 mg/g。结论 HPLC 法简单可行，重复性好，可作为恰麻古质量评价的方法之一。

无尾果中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量测定研究

目的:研究无尾果中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量测定方法。方法:使用高效液相色谱法,色谱柱C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水(15∶85);流速1.0 mL/min;检测波长360 nm;柱温35℃;进样量10μL。结果:采用高效液相色谱方法测定无尾果中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的含量,线性范围、重复性、稳定性和加样回收率等方法学验证项目均在合格范围内。结论:建立了高效液相色谱法测定槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量,方法简便、准确可靠、稳定性及重复性良好,可用于无尾果的质量控制。

HPLC法测定杠板归中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸及槲皮素的含量

建立了高效液相色谱法同时测定杠板归中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸和槲皮素含量的方法。采用Lichrosher 5-C18色谱柱,以甲醇-0.05%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL/min,紫外检测波长为258 nm,柱温为25℃,2种化合物在30 min内均得到较好分离。槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸和槲皮素的线性范围分别为0.037 6～3.920 0 mg和0.004 2～0.440 0 mg,检出限和定量下限分别为2.509、0.282 ng和6.272、0.702 ng,方法的平均回收率分别为99%和98%。运用该方法对不同产地杠板归药材中的2种黄酮类化合物进行测定,并得出二者含量的比例。方法快速简便,灵敏准确,重现性好,可作为杠板归药材的质量控制方法。

槲皮素糖苷类化合物的合成及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

以芦丁为原料合成了6个槲皮素糖苷类化合物,并经MS,~1H NMR及^(13)C NMR确证其结构。以阿卡波糖为阳性对照测试目标产物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,发现当该类化合物中糖基上的羟基被苯甲酰化后能增强其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,其中V-b和V-c的IC50各为19.4μmol/L,21.5μmol/L,而未被苯甲酰化的化合物VI-b和VI-c的抑制活性相对较低。这将为该类化合物在降糖活性方面的深入研究提供参考。

金露梅中一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取富集及活性研究

本研究采用AB-8大孔吸附树脂、半制备高效液相色谱对金露梅枝叶中槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸提取分离,并通过13 C NMR鉴定其化学结构,最后采用以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物的酶抑制剂筛选模型检测其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性和类型。结果显示:槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸分布在20%乙醇大孔吸附树脂(AB-8)洗脱液中,采用半制备高效液相色谱和高效液相色谱分离纯化得槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸2481.8 mg,纯度为97.95%。活性检测结果表明,槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸对α-葡萄糖苷酶的最大抑制率为94.67%,IC 50为0.259 mmol/L,抑制率显著高于阳性对照药物阿卡波糖,且抑制剂类型为竞争性抑制。