HPLC法测定田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量

目的建立田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量测定方法，为田基黄药材的质量控制和综合开发利用提供一定的科学依据。方法采用HPLC法。色谱柱为Hypersil C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为体积分数0．04％的乙腈-磷酸水（体积比77：23），流速为1．0mL·min^-1，检测波长为371nm，柱温为35℃。结果槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷质量浓度在3．12～99．84mg·L^-1（r=0．9998，n=6）内与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率为99．1％（RSD=1．5％，n=9）。结论该方法简便、快速、精密度好，可用于田基黄的质量控制。

HPLC同时测定柿叶提取物中槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷和染料木素含量的方法研究

目的：建立柿叶提取物中槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷和染料木素的HPLC同时测定方法。方法：采用HPLC法,Phenomenex-C18（250mm×4.6mm,5μm）,甲醇-0.02%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长：368nm,流速：1mL/min;柱温30℃。结果：槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷和染料木素分别在7.44-297.4μg/mL范围和1.10-109.8μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.20%和98.77%。结论：该方法准确、可靠,重复性好,可用于柿叶提取物的质量评价与控制标准,为柿叶功能性产品的研究开发奠定基础。

四种天然槲皮素-3-糖苷的合成

以芦丁为原料,经苄基化、酸水解得到关键中间体3',4',7-O-三苄基槲皮素(3),3与相应的1-溴代乙酰糖在四丁基溴化铵催化下在氯仿-0.25mol?L-1K2CO3溶液中缩合成相应的糖苷,脱去保护基得天然槲皮素3-糖苷类化合物1a～1d.其结构经IR,1HNMR,MS及元素分析确证.

金露梅中一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取富集及活性研究

本研究采用AB-8大孔吸附树脂、半制备高效液相色谱对金露梅枝叶中槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸提取分离,并通过13 C NMR鉴定其化学结构,最后采用以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物的酶抑制剂筛选模型检测其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性和类型。结果显示:槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸分布在20%乙醇大孔吸附树脂(AB-8)洗脱液中,采用半制备高效液相色谱和高效液相色谱分离纯化得槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸2481.8 mg,纯度为97.95%。活性检测结果表明,槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸对α-葡萄糖苷酶的最大抑制率为94.67%,IC 50为0.259 mmol/L,抑制率显著高于阳性对照药物阿卡波糖,且抑制剂类型为竞争性抑制。

南葶苈子中的指标成分槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龙胆双糖苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺部免疫功能调节机制研究

目的研究南葶苈子中的指标成分槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龙胆双糖苷(QGG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部免疫功能调节机制,阐释南葶苈子止咳平喘功效的物质基础与科学内涵。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组及QGG高(QGGH)、中(QGGM)、低(QGGL)剂量(0.20、0.15、0.10 g/kg)组和阳性对照氨茶碱(0.09 g/kg)组,连续8周采用香烟熏暴露联合细菌感染的方法制备COPD稳定期大鼠模型。各给药组大鼠于烟熏5周后开始ig给药,连续28 d。采用荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测大鼠肺组织中Th17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FOXP3 mRNA表达水平;流式细胞仪检测Th17/Treg细胞比例;TUNEL法观察QGG对大鼠肺组织细胞凋亡的影响;Western blotting法检测大鼠肺组织蛋白提取液中凋亡相关蛋白(cytoC、Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bcl-2)及胞质转录因子-κBp65(NF-κBp65)和胞核NF-κBp65的表达。结果对照组大鼠体质量增长率随周龄增长而明显增加,模型组大鼠体质量在第1～8周增长率变化缓慢。与模型组比较,QGGH和氨茶碱组大鼠体质量增长率从第5周开始呈增长趋势,而QGGM、QGGL组大鼠体质量增长缓慢。q RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肺组织中Treg和Th17细胞相关转录因子FOXP3和RORγt的表达水平显著增高(P<0.05),FOXP3与RORγt比值显著升高。与模型组比较,QGGH组和阳性对照组大鼠FOXP3和RORγt的表达均显著降低(P<0.05),且QGGH组效果优于氨茶碱组。流式细胞仪检测结果表明,与模型组比较,QGGH组大鼠外周血中CD4^+IL-17^+/CD4^+和CD4^+FOXP3+/CD4^+的表达均显著下调(P<0.05);CD4^+IL-17^+/CD4^+FOXP3+显著降低(P<0.05)。氨茶碱组大鼠外周血中Th17和Treg细胞相关的表达与QGGH组相近,但是CD4^+IL-17^+/CD4^+FOXP3+无明显差异。与对照组比较,模型组大鼠肺组织细胞凋亡显著增加。与模型组比较,QGGH组和氨茶碱组大鼠肺组织细胞凋亡显著减少(P<0.05),QGGM、QGGL组改变不明显。与对照组比较,模型组大鼠肺组织Bax、cytoC、Caspase-9、Caspase-3、胞核NF-κBp65表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl-2、胞质NF-κBp65表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,QGGH组和氨茶碱组大鼠肺组织Bax、cytoC、Caspase-9、Caspase-3、胞核NF-κBp65表达水平显著降低(P<0.05),而Bcl-2、胞质NF-κBp65表达水平显著升高(P<0.05)。结论 QGG可以显著改善COPD模型大鼠的生存状态、体质量,降低外周血CD4^+IL-17^+/FOXP3+CD4^+,调控Treg和Th17特征性转录因子FOXP3和RORγt的基因表达,平衡外周血中Th17与Treg比例,抑制肺组织细胞凋亡,修复损伤的组织,维持器官功能的完整性。

HPLC法同时测定南葶苈子生品及清炒品中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷和芥子碱硫氰酸盐含量

目的:建立高效液相法同时测定南葶苈子生品及清炒品中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷和芥子碱硫氰酸盐含量方法,并对比清炒前后2种成分含量变化。方法:采用NUCLEODUR Pyramid C18色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm);以乙腈-0. 01 mol·L-1KH2PO4水溶液为流动相,梯度洗脱;流速1. 0m L·min-1;柱温30℃;检测波长254 nm。结果:在选定的色谱条件下,槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷和芥子碱硫氰酸盐分离度良好,槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷线性范围为4. 24~50. 88μg·m L-1,芥子碱硫氰酸盐线性范围为25. 96~311. 04μg·m L-1;平均回收率分别为99. 37%,98. 06%; RSD均小于2. 63%。结论:该方法准确、简便,能够同时测定南葶苈子生品及清炒品中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷和芥子碱硫氰酸盐含量。

南葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的稳定性考察

目的:探究南葶苈子药材中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷(槲皮素双糖苷)的稳定性,为南葶苈子在临床上的合理应用提供借鉴和参考。方法:采用经典恒温法考察了该成分在水溶液中的热稳定性,得出了不同温度下的反应速率方程,推算出了其有效期和半衰期;以lgK(K为反应速率常数)对1/T进行一元线性回归,得到回归方程;考察该成分在不同pH、不同溶剂以及不同浓度条件下的稳定性情况。结果:该成分在80、100℃条件下加热10h后,含量分别降至初始含量的50.1%、5.4%,热降解规律符合零级反应方程。温度为60、80、100℃时的有效期分别为7.71、2.95、2.39h,半衰期分别为58.29、7.54、5.07h。另外,在pH>6条件下,该成分发生大量降解,为碱催化反应。结论:南葶苈子中的槲皮素双糖苷不稳定,在制剂生产过程中应进行相应条件控制。

RP-HPLC法测定小儿清肺化痰口服液中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的含量

目的:建立测定小儿清肺化痰口服液中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil-C18柱,流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液(9∶91),流速为0.8mL·min-1,检测波长为260nm,进样量为10μL,柱温为25℃。结果:槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷检测浓度在5～60μg·mL-1范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系(r=0.9999);槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷平均回收率为104.2%,方法精密度RSD=0.65%(n=6)。结论:该法分离效果好、灵敏、准确,可用于小儿清肺化痰口服液的质量控制。

HPLC-DPPH快速发现重楼果壳总黄酮中抗氧化成分及其活性初步验证

目的:以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)为底物,利用HPLC快速发现重楼果壳总黄酮中的抗氧化物成分,为重楼果壳资源的利用提供研究基础。方法:对重楼果壳用70%乙醇水提取进行总黄酮提取富集后,利用DPPH与重楼果壳总黄酮进行反应,采用HPLC分析反应前后色谱峰的变化,通过制备色谱、高分辨质谱、核磁共振等鉴定潜在的抗氧化成分,并进行其抗氧化活性验证。结果:与DPPH反应后,发现一个色谱峰消失,利用制备色谱对该消失的色谱峰进行制备纯化,利用质谱和核磁共振数据,鉴定为槲皮素-3-O-龙胆二糖苷,该化合物首次从重楼属植物中分离得到,在重楼果壳总黄酮中的含量为3.28%。对其抗氧化活性进行验证,发现其对DPPH自由基半数清除率(IC50)为0.0340 mg·ml^(-1),与维生素C(IC50=0.0240 mg·ml^(-1))的抗氧化活性相当。结论:该法快速从重楼果壳中发现抗氧化活性成分槲皮素-3-O-龙胆二糖苷,为重楼果壳总黄酮的进一步开发提供研究基础。

傅里叶红外光谱结合HPLC对不同产地南葶苈子成分的含量测定

目的创建一种能够快速测定南葶苈子药材中芥子碱硫氰酸盐(sinapine thiocyanate,SH),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-0-β-D-龙胆双糖苷(quercetin-3-O-beta-D-glucose-7-O-beta-D-gentiobioside,QGG),异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin-3-O-glucoside,IG),槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin3-O-β-D-glucopyranoside,QG)4种成分的方法。方法高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定南葶苈子样品中SH、QGG、IG、QG的含量,采用偏最小二乘法(partial least squares method,PLS)建立南葶苈子中SH、QGG、IG、QG的定量分析模型。结果所创建的QGG、QG、IG、SH的定量分析模型的内部交叉验证决定系数(R2)分别为0.9270、0.9266、0.8086、0.8289;校正均方差(root mean square error of calibration,RMSEC)分别为0.0100、0.00263、0.00313、0.111;验证均方差(root mean square error of prediction,RMSEP)分别为0.0139、0.00715、0.00395、0.0860。其中SH的特征光谱为9100~6100 cm-1;QGG的特征光谱为7300~5500 cm-1;IG的特征光谱为9500~6700 cm-1;QG的特征光谱为8200~5100 cm-1。结论利用傅里叶红外光谱建立的定量模型,能够对南葶苈子药材中QGG、QG、IG、SH的含量进行无损测定。此外通过近红外光谱PCA分析发现道地产地南葶苈子与非道地产地南葶苈子的差异较大,道地产地南葶苈子之间的差异较小。

地锦草化学成分的研究

目的 研究地锦草的化学成分。方法 采用硅胶柱层析分离和 Sephadex L H- 2 0纯化 ,从地锦草中分得 9个化合物 ,经理化性质和波谱分析鉴定了它们的结构。结果 它们分别为β-谷甾醇 ( ) ,没食子酸 ( ) ,鞣花酸( ) ,短叶苏木酚 ( ) ,槲皮素 ( ) ,山奈酚 ( ) ,芹菜素 - 7- O-葡萄糖苷 ( ) ,木犀草素 - 7- O-葡萄糖苷 ( ) ,槲皮素 - 3- O-阿拉伯糖苷 ( )。结论 化合物 , , , 和

鬼针草化学成分的分离和鉴定

目的研究鬼针草的化学成分。方法采用乙醇提取,硅胶柱、聚酰胺柱层析分离纯化,波谱分析鉴定其结构。结果从鬼针草中得到5个化合物:异槲皮苷(Ⅰ),异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅱ),海生菊苷(Ⅲ),槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅳ),D-甘露醇(Ⅴ)。结论5个化合物中的Ⅳ、Ⅴ是首次从本属植物中得到的。

HPLC法同时测定苦碟子注射液中4种成分的含量

目的建立同时测定苦碟子注射液中绿原酸、木犀草素-7-O-龙胆二糖苷、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷含量的HPLC法。方法色谱柱为Agela Pro-mosil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-体积分数为1.0%乙酸水溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 mL.min-1;检测波长为350 nm。结果绿原酸、木犀草素-7-O-龙胆二糖苷、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的线性关系良好,线性范围分别为0.730～5.84 mg.L-1、0.530～4.24 mg.L-1、0.990～7.92 mg.L-1和2.00～16.0 mg.L-1;平均回收率分别为98.8%、99.9%、99.6%和100.6%,RSD分别为0.8%、1.1%、1.0%和0.6%(n=5)。结论该法简便、可行,重现性好,结果准确,为苦碟子注射液质量控制提供参考依据。

芪白平肺颗粒中南葶苈子包煎提取方法考察

目的:本研究主要考察不同包煎方法提取对芪白平肺颗粒中的南葶苈子成分煎出的影响,优选最佳提取工艺。方法:以南葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷提取率与提取出膏率为主要评价指标,考察包煎前后及不同装样量对芪白平肺颗粒中南葶苈子提取的影响,并选用Box-Behnken响应面法考察提取时间、提取次数、溶剂倍数对南葶苈子药材中指标成分提取率的影响。结果:在中试生产规模下采用1/4装量进行药材包煎效果最佳,最佳提取工艺为:提取次数2次,提取时间2 h,提取溶剂倍数8倍。结论:芪白平肺颗粒中的南葶苈子采用包煎提取方法,能有效的提高药材中指标成分的提取率,该工艺合理、可行,为产业化生产提供理论依据。

肺心宁胶囊中南葶苈子包煎提取方法的研究

目的考察大批量提取时不同包煎方法对肺心宁胶囊中的南葶苈子成分煎出的影响,优选最佳方案。方法以南葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷提取率为主要评价指标,选取不同材质布料及不同装样量对肺心宁胶囊中的南葶苈子进行包煎,并考察提取时间、提取次数、加水量对肺心宁胶囊中的南葶苈子包煎的影响。结果用单层纱布装1/4药材包煎效果最佳,在适当装量下提取次数对其包煎提取指标成分影响显著,以3次为佳。结论包煎所用不同材质布袋及装样量对肺心宁胶囊中南葶苈子成分煎出的影响很大。

多指标正交试验优化芪蛭益肺颗粒水提醇沉工艺

目的采用多指标正交试验优选芪蛭益肺颗粒的最佳提取及醇沉工艺。方法以黄芪中黄芪甲苷、葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的提取率及干膏得率为指标,优选芪蛭益肺颗粒的提取工艺;以黄芪甲苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的保留率为指标,优选最佳醇沉工艺。结果最佳水提工艺为:加10倍量水,提取1.5 h,共提取3次。最佳醇沉工艺为:浓缩至相对密度1.05~1.10(60℃),加乙醇至60%醇沉。结论本试验优选的水提醇沉工艺稳定可行,可为该制剂生产提供依据。

高效液相色谱法同时测定森登-4有效部位中7种成分的含量

目的：建立HPLC法同时测定森登-4有效部位中7种成分的含量。方法：采用Extend-C18（250mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以乙腈（A）-0.6%磷酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流速0.5 m L·min-1,柱温27℃,检测波长为254 nm和292 nm,进样量10μL。结果：没食子酸、京尼平-1-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、（2R,3R）-双氢杨梅素、芦丁、杨梅素、槲皮素的质量浓度与其峰面积具有良好的线性关系（r=0.999 9）;平均回收率为97.30%～103.9%,RSD为0.08%～1.00%。没食子酸、京尼平-1-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、（2R,3R）-双氢杨梅素、芦丁、杨梅素、槲皮素平均含量分别为0.379%、0.447%、2.740%、3.965%、0.253%、0.878%、0.044%。结论：经方法学验证,本法可用于森登-4有效部位的化学成分含量测定。

山桃根化学成分研究

采用硅胶柱层析和重结晶方法对山桃根化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和光谱数据分析鉴定得11个化合物,分别是:棕榈酸(palmitic acid,1a)、硬脂酸(stearic acid,2b)、β-谷甾醇(β-sitosterol,3c)、山柰酚(kaempferol,4d)、槲皮素(quercetin,5e)、二氢槲皮素(dihydroquercetin,6f)、柚皮素(Naringenin,7g)、山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷(Kaempferol-7-O-β-D-glucoside,8h)、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷(Quercetin-7-O-α-L-rhamnopyranoside,9i)、槲皮素-3,7-二-O-α-L-鼠李糖苷(quercetin-3,7-O-α-L-dirhamnopyranoside,10j)、胡萝卜苷(daucosterol,11k)。化合物1,4,6,9,11均为首次从该植物中分离得到。

黑骨藤总黄酮的提取纯化及体外抗黄嘌呤氧化酶的活性筛选

目的对黑骨藤总黄酮进行提取纯化,并测试总黄酮、2个黄酮类化合物槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(QP)和槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(QG)的体外抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性,为其药效物质研究提供依据。方法使用大孔树脂联合聚酰胺法纯化黑骨藤总黄酮,根据Lambert-Beer定律测定总黄酮含量,采用紫外分光光度法测定不同浓度总黄酮及2个黄酮类化合物的体外XOD抑制活性。结果分离纯化得到了含量>95%的总黄酮。总黄酮及2个黄酮类化合物均显示有体外XOD抑制活性,且随浓度增加,抑制活性逐步增强。总黄酮的IC50为608.9μg/ml,而2个黄酮类化合物QG和QP的IC50分别为261.2和221.2μg/ml。结论黑骨藤总黄酮及2个黄酮类化合物QG和QP均显示出一定的体外XOD抑制活性。

HPLC法同时测定小儿宣肺止咳颗粒中8种成分含量

目的:建立RP-HPLC法同时测定小儿宣肺止咳颗粒中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、升麻素苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷、芥子碱硫氰酸盐、甘草酸铵的含量。方法:色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二丁胺),梯度洗脱;检测波长:254 nm;流速:1.0 ml·min^-1;柱温:30℃;进样量:10μl。结果:盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、升麻素苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷、芥子碱硫氰酸盐、甘草酸铵检测质量浓度的线性范围分别为6.405~57.64,7.845~70.60,36.96~332.6,78.30~704.7,3.126~28.13,2.844~25.59,3.478~31.30,15.78~142.0μg·ml^-1(r值范围0.9994~0.9999);平均加样回收率分别为98.6%,99.2%,99.0%,99.1%,98.7%,98.9%,98.5%,99.0%(RSD<2.0%,n=6);精密度、重复性、稳定性(48 h)试验的RSD<2.0%(n=6)。结论:该方法简单、有效、结果准确,可用于小儿宣肺止咳颗粒中上述8种成分含量的同时测定。