辣椒素与槲皮苷通过EGFR/PI3K/Akt信号通路调节HepG2细胞脂质代谢作用机制

为探究辣椒素与槲皮苷协同调节肝脏脂质代谢的分子机制,本实验利用油酸诱导的HepG2高脂细胞模型,研究辣椒素单独处理及辣椒素与槲皮苷联合处理对HepG2细胞存活率的影响,采用油红O染色法观察HepG2细胞脂质积累情况,同时测定细胞内总甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆汁酸的含量水平,采用免疫印迹法测定表面生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)及法尼醇X受体1(farnesoid X receptor 1,FXR1)、胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、成纤维细胞生长因子19(fibroblast growth factor 19,FGF19)的表达量。结果显示,各处理组HepG2细胞的增殖率均大于75%,表明药物对细胞没有明显毒性,可进行后续实验。油红O染色结果表明,加药处理组细胞内脂质积累减少。辣椒素与槲皮苷处理可降低细胞内总甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,提高高密度脂蛋白胆固醇和胆汁酸含量;同时各实验组上调了EGFR、PI3K、Akt及FXR1、FGF19蛋白的表达水平。综合来看,辣椒素与槲皮苷在调节肝脏脂质代谢方面具有协同效应,二者在高剂量水平以3∶1比例混合效果最佳。

乳苣不同部位异槲皮苷含量测定及其抗氧化活性研究

采用高效液相色谱(HPLC)法测定了乳苣不同部位的异槲皮苷含量;以抗坏血酸(VC)为阳性对照,采用DPPH法和FRAP法对乳苣不同部位提取物的抗氧化活性进行了初步探索。结果表明,乳苣样品在14 min内分离度良好,异槲皮苷浓度在2.00~10.00μg·mL^(-1)范围内与吸光度线性关系良好(R=0.9996),精密度(RSD=0.63%)、重复性(RSD=1.24%)、平均加标回收率(95.15%,RSD=1.72%,n=6)均符合要求,乳苣全草提取物溶液在室温下放置24 h稳定性良好(RSD=1.75%);采用HPLC法测得乳苣茎、叶、全草提取物中异槲皮苷含量分别为0.67 mg·g^(-1)、1.70 mg·g^(-1)、1.21 mg·g^(-1),根中未检测到异槲皮苷;乳苣不同部位提取物均具有一定的抗氧化活性,其对DPPH自由基的清除率和还原能力均随提取物浓度的增加逐渐升高,特别是乳苣叶提取物,当其浓度为0.4 mg·mL^(-1)时,其还原能力接近VC。

桑寄生配方颗粒中槲皮苷近红外定量分析模型的建立

建立桑寄生配方颗粒中槲皮苷含量测定的近红外定量分析模型。采集桑寄生配方颗粒的近红外光谱,将剔除异常光谱后的样本,采用X-Y联合距离的样本集划分法划分校正集和验证集。结合高效液相色谱法测定的槲皮苷的含量值,应用偏最小二乘法,建立测定桑寄生配方颗粒中槲皮苷含量的定量分析模型。采用矢量归一化法对近红外光谱进行预处理,选7502~4597.6 cm^(-1)光谱区,主因子数为11,建立的定量分析模型性能良好,交叉检验均方根误差为0.199,决定系数为96.99%。用验证集样本进行验证,预测均方根误差为0.132,决定系数为98.68%,剩余预测偏差为8.98。将预测值与参考值进行配对t检验,两种方法测得的槲皮苷的含量值无显著差异。该模型准确度高,可作为测定桑寄生配方颗粒中槲皮苷含量的快速检验方法。

异槲皮苷调控线粒体动力学逆转造影剂所致大鼠急性肾损伤

探究异槲皮苷对造影剂所致大鼠急性肾损伤的治疗作用及机制,通过建立碘普罗胺370注射液诱发的大鼠造影剂所致肾病模型,采用每天25、50 mg/kg异槲皮苷和阳性药N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行预处理治疗,检测大鼠肾脏血肌酐水平、组织形态学、丙二醛(MDA)和H_(2)O_(2)水平、还原性谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)水平;采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)、半胱天冬酶3(caspase-3)活性检测肾脏组织的凋亡情况;免疫组织化学检测多腺苷二磷酸多聚酶(Cleaved PARP)、线粒体融合蛋白2(MFN2)和线粒体动力相关蛋白1(DRP1)的表达和免疫印迹法检测肾脏组织MFN2和DRP1的表达。结果表明:异槲皮苷可以有效减轻造影剂碘普罗胺所致的急性肾损伤,缓解肾脏组织的氧化应激状态,改善线粒体动力学失衡。本研究结果将为异槲皮苷进一步被开发成为造影剂所致肾病急性肾损伤的治疗药物提供理论基础。

HPLC法同时测定甘薯叶中5种酚酸和异槲皮苷

咖啡酸、绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和异槲皮苷是甘薯叶中的主要活性成分,本研究建立高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定这6种成分的方法。通过对检测波长、色谱柱、洗脱溶剂、洗脱流速等参数优化得到的最佳分析条件为:ZORBAX SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)为分析柱,以0.1%甲酸水溶液(A)和乙腈(B)为流动相,采用梯度洗脱:0~12 min,10%~25%B;12~18 min,25%B,流速0.8 mL/min,检测波长326 nm,柱温30℃。咖啡酸、绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和异槲皮苷的线性范围分别为0.25~25.0、0.5~50.0、5.0~100.0、10.0~200.0、5.0~100.0和0.5~50.0μg/mL。该方法分析时间短(18 min),线性度(R^(2)≥0.998)、稳定性(RSD≤1.97%)、精密度(RSD≤1.56%)和加标回收率(95.14%~103.22%)好。对江西10个不同产地甘薯叶目标成分分析发现,宜春丰城的甘薯叶具有最高的总酚含量。

异槲皮苷对β-淀粉样蛋白诱导毒性的阿尔茨海默病转基因秀丽隐杆线虫模型的神经保护作用

目的:探究探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导毒性的转基因CL4176秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)的神经保护作用及其作用机制。方法:以转基因线虫CL4176为模型,在显微镜下考察异槲皮苷对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧(ROS)水平、抗氧化酶活力等指标的影响。采用实时荧光定量技术测定异槲皮苷作用后线虫Aβ沉积及胰岛素信号途径相关基因表达情况。结果:异槲皮苷能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率(P<0.05),可延长模型线虫寿命,提高其运动能力,能够显著提高模型线虫体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力(P<0.05),显著降低其体内ROS和丙二醛水平(P<0.05),同时显著下调Aβ mRNA表达量,上调DAF-16、SKN-1、SOD-3、GST-4、CTL-3、HSF-1 mRNA表达量。结论:异槲皮苷能够显著延缓线虫衰老、降低瘫痪率和抑制Aβ沉积,可能与调控胰岛素/胰岛素样生长因子1信号通路上的基因表达有关。

异槲皮苷抗腹泻作用的研究

为了研究异槲皮苷的抗腹泻作用,本试验采用酶水解芦丁法制备异槲皮苷,通过蓖麻油致小鼠腹泻模型、小肠炭墨推进试验和大鼠肠腔积液试验,分析异槲皮苷的抗腹泻作用,并进一步检测其对肠道离子通道蛋白mRNA表达的影响,初步探讨其抗腹泻机制。结果显示,高剂量的异槲皮苷[50 mg/(kg·bw)]可明显延迟蓖麻油诱导的小鼠初次腹泻时间(P<0.01),并减少稀便次数(P<0.05),抑制炭粉在小肠内的推进(P<0.01),并显著减少大鼠的小肠积液(P<0.01);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结果显示,与腹泻模型组小鼠相比,异槲皮苷高剂量组小鼠钠/氢交换因子1(NHE1)、钠/氢交换因子2(NHE2)、钠/氢交换因子3(NHE3)、水通道蛋白4(AQP4)和钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)的mRNA表达显著上调(P<0.05),囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)的mRNA表达显著下调(P<0.05)。结果表明,异槲皮苷具有明显的抗腹泻作用,为其临床应用提供理论依据。

槲皮苷对PCV2感染猪肺泡巨噬细胞吞噬活性的影响

试验旨在研究槲皮苷(QUE)对正常3D4/2细胞吞噬活性及对感染猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的3D4/2细胞吞噬活性的影响。试验设置细胞对照组、0.05%DMSO对照组和不同浓度的槲皮苷药物QUE组(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol/L),采用中性红法测定QUE在36 h内对3D4/2细胞吞噬活性及对感染PCV2的3D4/2细胞吞噬活性的影响。结果表明,与对照组相比,25.0μmol/L和50.0μmol/L的QUE处理后显著提高了3D4/2细胞的吞噬指数(P<0.05);100.0~400.0μmol/L的QUE处理后极显著提高3D4/2细胞的吞噬指数(P<0.01)。与PCV2阳性对照组相比,不同浓度的QUE (12.5~400.0μmol/L)处理36 h后均能够极显著提高PCV2感染3D4/2细胞的吞噬指数(P<0.01)。与对照组相比,100.0、200.0、400.0μmol/L的QUE极显著提高了细胞吞噬指数(P<0.01)。研究表明,QUE对3D4/2细胞具有一定的保护作用与免疫调节作用,对其吞噬活性具有良好的促进作用。

阳春砂仁中总黄酮、异槲皮苷和槲皮苷含量测定研究

建立阳春砂仁中异槲皮苷和槲皮苷含量的高效液相(HPLC)测定方法。异槲皮苷进样量在0.0183～0.0915μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为102.69%,相对标准偏差为0.70%(n=6);槲皮苷进样量在0.0294～0.1470μg范围内线性关系良好,平均回收率为103.15%,相对标准偏差为0.68%(n=6)。建立了紫外分光光度法测定砂仁中总黄酮含量的方法,采用槲皮苷为对照品,浓度在0～9.8μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为100.89%,相对标准偏差为1.19%(n=6)。本方法简便快捷,可作为砂仁含量测定质量控制方法。

莲须的UPLC指纹图谱及异槲皮苷含量分析

目的建立莲须的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,并建立其异槲皮苷的含量测定方法。方法色谱柱为Waters Acquity UPLC HSS T3,1.8μm,2.1×100 mm;以乙腈(A)-0.2%乙酸(B)为流动相进行梯度洗脱;流速0.2 mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量3μL;检测波长300 nm。建立莲须药材的指纹图谱和异槲皮苷含量分析方法,并对19批不同产地莲须药材进行测定。结果指纹图谱及含量测定方法的各项方法学验证均良好,19批莲须与对照指纹图谱的相似度在0.883~0.995,标定了7个共有峰。主要成分异槲皮苷线性关系良好(R^(2)>0.999),加样回收率在91.58%~99.70%,RSD为3.54%,19批莲须异槲皮苷含量在0.011%~0.033%。结论所建立的莲须UPLC指纹图谱及异槲皮苷含量分析方法专属性强、分离度好、灵敏度高,可为莲须药材的质量控制与评价提供参考。

异槲皮苷-β-环糊精包合物的制备及溶解度研究

采用共沉淀法制备了异槲皮苷-β-环糊精固体包合物,用紫外、红外光谱进行包合物表征,同时利用紫外分光光度法建立了包合物中异槲皮苷的含量测定方法,并考察了方法的精密度和回收率。结果表明,异槲皮苷的日内和日间精密度均小于2%,平均回收率为96.04%~99.88%。在此基础上,对异槲皮苷在β-环糊精溶液中的相溶解度进行研究,发现异槲皮苷与β-环糊精形成了1∶1型包合物;相溶解度结果显示异槲皮苷被制备成固体包合物后,在本实验浓度范围内溶解度最大可提高为包合前的7.31倍。

RP-HPLC同时测定田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素的含量

目的:建立田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素的 RP-HPLC 同时含量测定方法。方法:使用 Hypersil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈(A)-0.02 mmol·L^(-1)磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调 pH 3.0)(B)为流动相进行梯度洗脱(0～20 min,A 相为14%;20～35 min,A 相从14%变至30%;35～45 min,A 相从30%变至38%),流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:360 nm,柱温:35℃。结果:异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素浓度分别在9.90～330μg·mL^(-1)(r=0.9996,n=6)、19.2～640 μg·mL^(-1)(r=0.9998,n=6)和2.16～72.0 μg·mL^(-1)(r=0.9997,n=6)范围内与峰面积积分值线性关系良好;平均加样回收率(n=9)分别为97.2%,99.1%,98.9%。结论:不同购买地田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素含量存在较大差异;该方法简便可靠,重复性好,为田基黄药材质量控制提供了方法。

高效液相色谱法同时测定田基黄注射液中槲皮苷、异槲皮苷的含量

目的:建立以高效液相色谱法同时测定田基黄注射液中槲皮苷、异槲皮苷含量的方法。方法:色谱柱为MerckLichrospher RP18,流动相为乙腈-(pH=3.0)磷酸盐缓冲液(18∶82),流速为1ml/min,柱温为25℃,检测波长为350nm。结果:槲皮苷、异槲皮苷进样量分别在0.278μg～4.440μg(r=0.9991)、0.315μg～2.520μg(r=0.9991)范围内与峰面积积分值线性关系良好;平均加样回收率分别为98.60%(RSD=2.23%)、97.79%(RSD=1.74%)。结论:本方法准确可靠、应用性强,可用于本品的质量控制。

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。

槲皮苷对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用

目的:研究槲皮苷对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法:50只小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。采用一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX)(200 mg/kg)方式建立小鼠免疫抑制模型,对照组腹腔注射等体积生理盐水。低、中、高剂量组分别灌胃20、50、80 mg/kg的槲皮苷,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。14 d后测定胸腺及脾免疫器官指数、腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数、脾脏组织T淋巴细胞亚群CD4^+、CD8^+亚群及其比例、血浆IgG和IgM、IL-2和IL-4水平并观察脾脏组织病理学状态。以流式细胞术检测抗氧化指标活性氧(ROS),ELISA试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)。Western blot检测小鼠脾脏组织核转录因子kappaB(NF-κB)p65和TLR2蛋白表达水平,对槲皮苷的干预作用机制进行探索。结果:与对照组相比,模型组的免疫器官指数、腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数、CD4^+、CD8^+亚群及其比例、IgG、IgM、IL-2、IL-4、SOD、CAT均显著降低(P<0.05),脾脏病理学损伤明显,而ROS和MDA水平则显著升高(P<0.05);较模型组而言,给予槲皮苷干预后,各组免疫器官指数、腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数、CD4^+、CD8^+亚群及其比例、IgG、IgM、IL-2、IL-4、SOD、CAT均剂量依赖性地显著升高(P<0.05),脾脏病理学损伤程度呈剂量依赖地减轻,而ROS和MDA水平则剂量依赖性显著降低(P<0.05)。Western blot法检测显示模型组的NF-κB p65和TLR2蛋白均较对照组显著上调(P<0.05);槲皮苷干预各组的NF-κB p65和TLR2蛋白表达水平则剂量依赖性显著下降(P<0.05)。结论:槲皮苷可改善小鼠免疫功能低下状态,通过促进免疫器官功能恢复及提高机体抗氧化水平来提高免疫功能低下小鼠的免疫水平,其作用机制可能与TLR2信号通路有关。

UPLC测定桑叶中抗氧化活性成分异槲皮苷、芦丁和紫云英苷的含量

目的：建立UPLC法测定桑叶中抗氧化活性成分异槲皮苷、芦丁和紫云英苷的含量。方法：采用ABTS＋快速法评价异槲皮苷、芦丁和紫云英苷的抗氧化能力;采用UPLC法,选择ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1mm,1.7μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速为0.6 m L/min,柱温40℃,检测波长358 nm。结果：异槲皮苷、芦丁和紫云英苷均具有ABTS＋自由基清除能力,其中异槲皮苷与芦丁对ABTS＋自由基清除率可达80%;异槲皮苷、芦丁和紫云英苷在相应的浓度范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率在98.57%~98.84%之间,RSD均小于2.0%。结论：该方法可更好的对桑叶进行质量控制。

侧柏叶不同炮制品中槲皮苷与槲皮素的含量测定

目的以槲皮苷、槲皮素含量为指标,考察不同炮制方法对侧柏叶止血成分含量的影响。方法采用RP-HPLC法测定不同炮制品中槲皮苷、槲皮素的含量,色谱柱为Lichrospher C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(38∶10∶52);流速1.0 ml.min-1;检测波长254 nm;柱温25℃。结果不同炮制品中槲皮苷、槲皮素的含量有显著差异,槲皮苷的含量以生品最高,炭品最低;槲皮素的含量变化为:炒炭品(炒焦品,其它炮制品未检出槲皮素。结论随着炮制温度的升高,槲皮苷的含量逐渐减少;炒炭后止血作用增强,推测与炭品中槲皮苷部分分解生成槲皮素有关。

HPLC测定侧柏炭中槲皮苷与槲皮素的含量

目的:建立HPLC测定侧柏炭中槲皮苷与槲皮素含量的定量分析方法。方法:采用色谱柱:LichrospherC18(4.6mm×150mm,5μm),流动相:水甲醇乙腈磷酸(72∶32∶12∶1),检测波长:254nm,流速:1mL·min-1,柱温:室温。结果:在上述色谱条件下,槲皮苷和槲皮素进样量分别在0.041～0.41μg和0.076～0.764μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系,r均为0.9999。平均回收率分别为98.49和99.07,RSD分别为2.96(n=5)和1.44(n=5)。精密度试验RSD分别为0.61(n=5)和0.50(n=5)。稳定性试验RSD分别为1.04(n=5)和0.42(n=5)。重复性试验RSD分别为1.17(n=5)和1.62(n=5)。结论:该测定方法简便易行,结果准确,重复性好,可用于侧柏炭中槲皮苷与槲皮素的含量测定。

HPLC测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量

目的用HPLC测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量。方法采用ShimadzuC18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%H3PO4水溶液(45∶55),流速1.0ml·min-1,检测波长350nm,柱温为室温,用外标法定量,测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量。结果金丝桃苷的线性范围0.50～2.50μg(r=0.9998),回收率95.90%,RSD=0.93%;槲皮苷的线性范围0.40～2.00μg(r=0.9996),回收率99.19%,RSD=2.39%。结论所建方法简便,快速,线性关系良好。

HPLC法同时测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量

目的建立晾晒、烘干及鲜桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量测定方法。方法采用HPLC法,Shim pack ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,流动相为0.4%磷酸乙腈溶液(A)和0.4%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,检测波长为360 nm,流速设为1.0 ml.min-1。结果三种黄酮类成分在35 min内达到良好分离,芦丁在0.076～1.920 mg.L-1,异槲皮苷在0.086～2.148 mg.L-1,紫云英苷在0.042～2.108 mg.L-1范围内线性关系良好(r>0.999 3,n=6),三种成分平均加样回收率分别为99.7%(RSD=2.5%)9、8.8%(RSD=2.4%)和99.5%(RSD=4.1%)。结论该方法操作简单,结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为评价桑叶药材炮制方法提供了一个很好的依据,同时也可用于桑叶药材的质量控制。