橙皮素A的NMR研究

橙皮素A是从中药北沙参 (GlehnialittoralisFr.SchmidtexMiquel)的正丁醇萃取物中分离得到的一种 8 O 4′型异木脂素苷类化合物 .通过化学方法和波谱分析鉴定了该化合物的结构 .采用 2DNMR技术对其NMR信号进行了全归属 .DMSO d6 代替CD3OD作为溶剂 ,并利用重水交换 ,能准确读出偶合常数J7。

基于网络药理学和细胞实验探讨橙皮素对LPS诱导的小胶质细胞炎症模型的改善作用

目的通过网络药理学和细胞实验研究橙皮素对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎症模型的改善作用。方法筛选橙皮素治疗神经炎症的关键成分,构建PPI网络,筛选核心节点网络,并进行GO及KEGG富集分析。细胞实验分为空白对照组、LPS(100 ng/mL)+ATP(5μmol/L)组、橙皮素组(20、40μmol/L),MTT法检测细胞存活率,Griess法检测NO水平,免疫荧光法检测ROS以及小胶质细胞标记物IBA1表达,RT-qPCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,Western Blot法检测RAGE蛋白表达。结果PPI网络分析得到88个核心靶点。KEGG富集分析显示,橙皮素主要通过对细菌起源分子的反应、脂多糖反应调节、炎症反应调节等改善经炎症。细胞实验显示,橙皮素能抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应,降低细胞上清液NO水平、细胞ROS水平、IBA1表达以及TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达、RAGE蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论橙皮素具有改善小胶质细胞极化、抗神经炎症作用,其机制与下调AGE/RAGE介导的炎症信号通路有关。

黑曲霉转化橙皮苷制备橙皮素的条件优化及其抗氧化活性的比较

该研究采用微生物转化法,以橙皮苷为底物,利用黑曲霉菌株(Aspergillus niger CP-2)进行定向生物转化制备橙皮素,通过对黑曲霉菌种接种量、pH值、底物浓度、反应温度以及恒温摇床转速进行单因素实验,并选择接种量、pH值、底物浓度三个重要影响因素进行正交实验,以探究出最适转化条件。结果表明:通过高效液相色谱法(HPLC)对Aspergillus niger CP-2生物转化的产物鉴定,确定为橙皮素,最终确定的最佳工艺为:黑曲霉接种量为10%、pH值为7.5、橙皮苷底物浓度为1.0 mmol/L、反应温度为37℃、恒温摇床转速为200 r/min。在此反应体系下反应24 h后,得到的橙皮素产率为63.90%;此外,转化产物橙皮素的抗氧化活性以及对H_(2)O_(2)损伤HCK-8细胞的保护能力均高于转化底物橙皮苷,因此,黑曲霉的生物转化技术可为柑橘属副产物活性物质的高值化利用提供理论依据。

橙皮素抑制氧化应激影响软骨细胞的炎性退变

背景:研究表明,橙皮素可以通过多种机制或者信号通路对软骨细胞产生保护作用,但其保护机制尚未完全阐明。目的:探讨橙皮素对脂多糖诱导的软骨细胞炎性退变的影响。方法:体外提取、培养SD乳鼠关节软骨细胞,采用番红O染色鉴定。通过MTT法检测细胞毒性确定最佳橙皮素干预浓度。将软骨细胞随机分为3组:对照组、模型组和实验组,后2组采用脂多糖诱导软骨细胞建立骨关节炎细胞模型,实验组造模后给予橙皮素干预24 h。采用Calcein-AM/EthD-Ⅰ染色检测细胞活性,免疫组化染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达,活性氧检测试剂盒检测软骨细胞内活性氧水平,ELISA检测软骨细胞内抗氧化剂总谷胱甘肽水平,qRT-PCR检测炎症基因白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和软骨特异性基因Ⅱ型胶原基因的表达。结果与结论:①番红O染色结果表明,提取的细胞为软骨细胞;②细胞毒性实验表明0.5μmol/L橙皮素干预软骨细胞活力最明显;③与对照组比较,模型组软骨细胞增殖能力降低,活性氧水平升高,总谷胱甘肽水平下降,Ⅱ型胶原降解增加,白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α基因表达水平升高,软骨特异性Ⅱ型胶原基因表达水平下降,差异均有显著性意义(P<0.05);④与模型组比较,实验组软骨细胞增殖能力上升,活性氧水平下降,总谷胱甘肽水平上升,Ⅱ型胶原降解减少,白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α基因表达水平下降,软骨特异性Ⅱ型胶原基因表达水平升高(P<0.05)。结果表明:橙皮素对脂多糖诱导的骨关节炎软骨细胞炎性退变具有保护作用,其机制可能与橙皮素抑制活性氧介导的氧化应激有关。

分散液液微萃取-高效液相测定食用植物油中对羟基肉桂酸和橙皮素含量

通过分散液液微萃取-高效液相(DLLME-HPLC)建立一种同时测定食用植物油中对羟基肉桂酸和橙皮素的分析方法。以正己烷为分散剂,以含体积分数5%氨水(500μL)和体积分数10%乙腈的水溶液为萃取剂萃取样品,以体积分数0.3%三氟乙酸溶液-乙腈为流动相,在柱温25℃条件下进行梯度洗脱,萃取液放置过夜后再进行测定。结果表明:样品峰面积的相对标准偏差均小于3%,对羟基肉桂酸和橙皮素在各自质量浓度范围内的线性相关系数均大于0.99,检测限分别为8.7、6.2 ng/g,定量限分别为26.1、18.5 ng/g,回收率分别为93.1%~103.7%、100.5%~111.1%。

橙皮苷和橙皮素对电离辐射致小鼠心血管损伤的防护作用研究

本研究以C57BL/6J小鼠为对象,探讨橙皮苷和橙皮素对其电离辐射致心血管损伤的防护作用。将小鼠随机分为空白对照组(NC组)、照射对照组(IR组)、橙皮苷低剂量组(L组200 mg/kg)、橙皮苷中剂量组(M组400 mg/kg)、橙皮苷高剂量组(H组800 mg/kg)和橙皮素低剂量组(L组50 mg/kg)、橙皮素中剂量组(M组100 mg/kg)、橙皮素高剂量组(H组200 mg/kg)8个组。照前2 h采用灌胃方式,空白对照组和照射对照组给予等量溶媒,除空白对照组外,各组小鼠均接受单次2 Gy的^(60)Coγ射线照射。分别于照射后24 h和48 h,对小鼠的免疫、抗氧化和DNA损伤三方面指标进行检测。结果显示,与照射组相比,给予橙皮苷和橙皮素的小鼠的肝脏指数均显著降低,但未表现出明显的剂量-效应关系,说明橙皮苷和橙皮素可能对辐射损伤小鼠的器官具有一定的保护作用;给予橙皮苷和橙皮素的小鼠血清中IL-1β、IL-6等炎性因子均显著降低,且具有剂量-效应关系,高剂量组表现更突出;给予橙皮苷和橙皮素均可显著降低小鼠主动脉丙二醛(MDA)含量和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量,表明两种处理具有显著的抗氧化作用;给予橙皮苷和橙皮素能降低照射后小鼠主动脉组织γ-H2AX foci数量,且具有剂量依赖性关系,表明两种处理能减轻照射后小鼠主动脉DNA的损伤。本研究的结果表明橙皮苷和橙皮素对照射致小鼠血管损伤具有一定的保护作用。

PPARα激动剂橙皮油素对小鼠摄食的影响

探讨橙皮油素(Auraptene,AUR)的摄入对正常小鼠摄食的影响及其作用机制。将正常小鼠分为3组,正常对照组、AUR(2μmol/kg)组、AUR(1μmol/kg)组,连续灌胃给予AUR 2周,检测小鼠的累积摄食,检测血清、肝脏和下丘脑中胰岛素样生长因子(IGFs)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)、下丘脑中厌食因子阿片促黑色素原(POMC)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、靶基因肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)mRNA和蛋白水平的变化。结果发现:AUR能够浓度依赖性地促进小鼠摄食,抑制下丘脑厌食因子POMC的表达(P<0.01),对肝脏IGFBP-1的表达有显著的促进作用(P<0.01),在血清和下丘脑中IGF-1的含量显著减少(P<0.01),但并未影响肝脏IGF-1的表达(P>0.05),同时,AUR显著增加了CPT1A在肝脏中的表达(P<0.01)。综上,AUR可显著促进小鼠摄食,其机制主要为AUR激活了PPARα,促使肝脏IGFBP-1表达增加,从而结合了血清中游离的IGF-1,使进入下丘脑的IGF-1含量减少,抑制了厌食因子POMC的表达,促进了小鼠摄食。

橙皮素早期干预对APPswe/PS1dE9小鼠星形胶质细胞的作用

目的 研究橙皮素早期干预对野生型及转基因小鼠星形胶质细胞的作用。方法 选取3月龄野生型C57BL/6J小鼠为对照组、对照给药橙皮素10 mg/kg/d、20 mg/kg/d剂量组;设立3月龄转基因小鼠为模型组、橙皮素20 mg/kg/d、40 mg/kg/d、80 mg/kg/d剂量组,灌胃1次/d,灌胃6个月后处死。购买3月龄C57BL/6J小鼠为正常对照组,免疫组化(IHC)检测小鼠脑组织星形胶质细胞活化标志物GFAP表达;免疫荧光双重染色(IF)检测小鼠脑组织GFAP/C3、GFAP/S100A10共定位的细胞表达;蛋白免疫印迹法(WB)检测小鼠脑组织中GFAP、C3的蛋白表达;ELISA法测定小鼠脑组织中IL-1α、TGF-β1含量。结果 与正常对照组相比,对照组GFAP阳性表达上调,GFAP/C3共定位阳性细胞数增加,GFAP/S100A10减少,C3表达上调,IL-1α含量升高。与对照组相比,对照给药橙皮素组GFAP表达下降,GFAP/C3共定位阳性细胞数减少,GFAP/S100A10增加,C3表达下调,IL-1α含量下降,TGF-β1含量升高。与对照组相比,模型组GFAP表达增强,C3蛋白表达上调,GFAP/S100A10阳性细胞数减少,TGF-β1含量下降。与模型组相比,橙皮素给药组GFAP表达下降,GFAP/C3共定位阳性细胞数减少,GFAP/S100A10增加,C3的表达下调,TGF-β1含量升高(P<0.05)。结论 橙皮素早期干预能够明显减轻自然衰老小鼠及转基因小鼠炎症反应,其机制可能与抑制星形胶质细胞活化,促进抗炎A2型细胞活化,抑制促炎A1型活化,减轻炎症对神经元的损伤有关。

橙皮素抑制TLR4-mTOR-ULK1信号通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨橙皮素(HES)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠细胞自噬与凋亡的影响,并初步分析其机制。方法 将SD大鼠分为假手术(Sham)组、MIRI组、低剂量HES(HES-L,15 mg/kg)组、高剂量HES(HES-H,30 mg/kg)组和HES-H+Toll样受体4(TLR4)抑制剂(HES 30 mg/kg+复合物C 0.2 mg/kg)组。连续给药7 d,除Sham组外,大鼠采用冠脉结扎法构建MIRI模型,24 h后检测左心室血流动力学参数[包括左室舒张期末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)];采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死(心梗)面积,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);Western blotting检测大鼠心肌组织中微管相关蛋白1-轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬效应蛋白(Beclin1)、TLR4、磷酸化(p)-TLR4、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)、p-ULK1蛋白表达。结果 与Sham组比较,MIRI组大鼠心肌细胞线粒体损伤、自噬空泡形成;LVEDP[mmHg(1 mmHg≈0.133 kPa):14.22±2.12比5.44±0.83]、心肌细胞凋亡率[(31.52±4.01)%比(2.41±0.26)%]、心梗面积(mm2:43.68±3.86比0.00)、心肌组织MDA(ng/L:8.25±1.03比3.71±0.65)、p-mTOR/mTOR(0.76±0.08比0.33±0.04)、p-ULK1/ULK1(0.69±0.08比0.22±0.03)均显著升高,dp/dtmax(mmHg/s:3 441.43±289.25比4 910.57±350.12)、-dp/dtmax(mmHg/s:2 588.96±260.23比3 845.94±364.19)、心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(1.13±0.14比2.35±0.21)、Beclin1(0.35±0.06比0.87±0.09)、p-TLR4/TLR4(0.40±0.05比0.84±0.10)均显著降低(均P <0.05)。与MIRI组比较,HES-L、HES-H组大鼠线粒体损伤缓解,自噬空泡少见;LVEDP(mmHg:11.56±1.60、7.88±1.21比14.22±2.12)、心肌细胞凋亡率[(25.52±3.11)%(、17.54±1.89)%比(31.52±4.01)%]、心梗面积(mm2:36.67±3.58、29.58±3.04比43.68±3.86)、心肌组织MDA(ng/L:6.98±0.65、4.12±0.48比8.25±1.03)、p-m TOR/m TOR(0.60±0.07、0.45±0.05比0.76±0.08)、p-ULK1/ULK1(0.54±0.05、0.32±0.04比0.69±0.08)均显著降低,dp/dtmax(mmHg/s:3 972.82±310.17、4 442.97±396.24比3 441.43±289.25)、-dp/dtmax(mmHg/s:3 152.30±312.18、3 430.57±324.24比2 588.96±260.23)、心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(1.76±0.18、2.01±0.20比1.13±0.14)、Beclin1(0.56±0.07、0.79±0.08比0.35±0.06)、p-TLR4/TLR4(0.55±0.06、0.73±0.08比0.40±0.05)均显著升高(均P <0.05)。结论 HES可通过抑制TLR4-m TOR-ULK1信号通路促进MIRI大鼠心肌细胞自噬,抑制凋亡。

橙皮素调控Nrf2/ARE通路改善载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的实验研究

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)通路探讨橙皮素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响。方法:将48只ApoE^(-/-)小鼠用高脂饮食喂养12周后,采用左颈总动脉缩窄性套管法建立ApoE^(-/-)小鼠AS模型。模型制备成功后将ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、橙皮素低剂量组、橙皮素高剂量组、鸦胆子苦醇组,每组12只。另取12只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,给予普通饲料喂养。橙皮素低、高剂量组小鼠分别给予50 mg/kg、100 mg/kg橙皮素灌胃,每日1次;鸦胆子苦醇组小鼠灌胃100 mg/kg橙皮素,隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇2 mg/kg,连续给药12周;对照组和模型组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。检测各组血清血脂水平以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;油红O染色观察主动脉斑块形成和主动脉窦脂质沉积情况,并计算损伤面积百分比;荧光探针测定主动脉中活性氧(ROS)的生成;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉中Nrf2/ARE通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠主动脉ROS增加,血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、MDA、主动脉斑块损伤和主动脉窦脂质损伤面积百分比、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的表达均明显升高,血清SOD、GSH-Px活性、主动脉Nrf2、还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,橙皮素低、高剂量组小鼠ROS降低,血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、MDA水平、主动脉斑块损伤和主动脉窦脂质损伤面积百分比、Keap1均明显下降,HDL-C、SOD、GSH-Px活性、Nrf2、NQO1、HO-1的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);鸦胆子苦醇可逆转高剂量橙皮素减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变的作用。结论:橙皮素可能通过激活Nrf2/ARE通路,维持内皮细胞中的氧化还原平衡,减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变,具有较好的抗AS作用。

橙皮素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对D-半乳糖诱导的白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的:探究橙皮素对D-半乳糖诱导的白内障大鼠氧化应激损伤的影响以及调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路的机制。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、橙皮素低、高剂量组、橙皮素高剂量+Nrf2抑制剂ATRA组,除假手术组,其余组均通过皮下注射200mg/kg的D-半乳糖建立白内障大鼠模型。阳性对照组灌胃复明胶囊(30mg/kg),橙皮素低、高剂量组分别灌胃橙皮素(50mg/kg、150mg/kg),橙皮素高剂量+ATRA组先灌胃橙皮素(100mg/kg),再腹腔注射ATRA(10mg/kg)。裂隙灯观察双眼晶状体组织浑浊程度;HE观察各组晶状体上皮组织形态学变化;TUNEL法检测晶状体上皮组织细胞凋亡率;ELISA测定晶状体中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;Western blotting检测晶状体中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠模型组晶状体上皮组织出现细胞排列紊乱、水肿、间隙增大等病变;晶状体浑浊程度、上皮细胞凋亡率、Keap1、细胞质Nrf2蛋白表达升高,SOD、CAT、GSH-Px活性、细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组和橙皮素低、高剂量组大鼠晶状体上皮损伤减轻;晶状体浑浊程度、上皮细胞凋亡率、Keap1、细胞质Nrf2蛋白表达降低,SOD、CAT、GSH-Px活性、细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达均升高(P<0.05)。Nrf2抑制剂ATRA可显著减弱高剂量橙皮素对白内障大鼠晶状体损伤的改善作用。结论:橙皮素可减轻D-半乳糖诱导的白内障大鼠氧化应激损伤,可能通过抑制Keap1表达,促进Nrf2/ARE通路活化实现。

橙皮素介导Keap1-Nrf2/ARE信号通路对糖尿病视网膜病变的影响

目的探讨橙皮素通过Kelch样ECH相关蛋白(Keap1)-转录因子核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对2型糖尿病小鼠及糖尿病视网膜病变(DR)细胞模型的影响。方法取小鼠眼球HE染色观察视网膜形态;MTT法检测细胞活性;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞内ROS;蛋白印迹检测Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC和GCLM蛋白水平。结果较对照组,模型组小鼠视网膜各层厚度明显变薄(P<0.05),外核层细胞杂乱无章,视网膜呈波浪变化;与模型组相比,治疗组小鼠视网膜全层和内外核层增厚(P<0.05),外核层轻度无序,波形变化小;低浓度(≤40μM)的橙皮素对ARPE-19细胞活性无明显影响;与空白对照组相比,葡萄糖/葡萄糖氧化酶(G/GO)处理后ARPE-19细胞活性明显降低(P<0.05),细胞内ROS绿色荧光显著增加;G/GO组较空白对照组Keap1蛋白表达增加,Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC、GCLM蛋白表达下降(P<0.05)。较G/GO组,10μM和40μM橙皮素预处理细胞活性提高(P<0.05),细胞内ROS绿色荧光减弱。同时,与G/GO组相比,10μM和40μM橙皮素预处理后Keap1蛋白表达下降,Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC、GCLM蛋白表达增加(P<0.05)。结论橙皮素能改善2型糖尿病小鼠视网膜组织的病变,保护ARPE-19细胞免受G/GO诱导的氧化应激损伤,其机制可能与激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路有关。

橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素的平衡溶解度和油水分配系数的测定

采用HPLC法测定橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素在水和不同pH缓冲溶液中的平衡溶解度;结合摇瓶法测定其在正辛醇-水体系和正辛醇-不同pH缓冲溶液体系中的油水分配系数。37℃时,橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素在水中的平衡溶解度分别为18.94、632.34、15.37μg·mL^(-1);pH值升高,橙皮苷平衡溶解度逐渐降低,对橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素无影响,但在pH 7.4时,二者均有最大值,分别为836.57、71.82μg·mL^(-1)。橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素在正辛醇-水体系中lg P值分别为0.094、0.573、2.876,在不同缓冲溶液中(pH3.4~7.4)的lg P值范围分别为0.069~0.281、0.603~0.664、2.459~2.905。橙皮素单葡萄糖苷的平衡溶解度远大于橙皮苷和橙皮素,其lg P值在0.6左右,具有一定的亲水亲脂性,预测其在胃肠道中有较好的吸收;橙皮苷的lg P值小于0.3,推测其不易被胃肠吸收;橙皮素的lg P值大于2,其脂溶性极强,易通过主动转运进入生物膜。上述结果可为3个单体成分的成药性,以及中药陈皮中的橙皮苷酶转化为橙皮素单葡萄糖苷的研究,提供实验基础和科学依据。

橙皮素药理活性以及开发技术的研究进展

橙皮素广泛存在于柑橘类水果中,属于二氢黄酮类物质。橙皮素具有抗炎抑菌、抗氧化、抑制纤维化等作用,近年来有文献报道橙皮素还具有治疗癌症、心血管系统、中枢神经系统等相关疾病的作用。但由于橙皮素水溶性差而影响其进一步的开发利用。本文对橙皮素的药理作用以及开发利用技术等相关内容进行综述,为橙皮素的结构改造以及开发新药提供理论依据。

基于网络药理学与实验验证探讨橙皮素治疗乳腺癌疾病的分子机制

目的基于网络药理学、分子对接和体外实验探讨橙皮素(Hes)治疗乳腺癌疾病的分子机制。方法通过TCMSP、Swiss Target Prediction、PharmMapper数据库筛选Hes作用靶点,GeneCards、OMIM、TTD数据库检索乳腺癌疾病相关靶点。采用Venny 2.1在线获取药物与疾病共同靶点;Cytoscape 3.7.2软件建立药物-靶点-信号通路-疾病网络;STRING数据库在线绘制蛋白互作网络;Metascape数据库进行GO和KEGG通路富集分析;Pymol和AutoDock软件预测分子结合能力;体外实验验证网络预测结果并探讨Hes抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的潜在机制。结果网络筛选Hes抗乳腺癌疾病共同靶点36个,GO富集获得487个条目,包括生物过程414个、分子功能55个、细胞组分18个;KEGG通路富集获得40条通路,大多涉及癌症相关途径和主要信号通路PI3K/AKT等;分子对接显示Hes与PI3K/AKT信号通路的关键靶点具有良好结合活性。体外实验显示Hes能够抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进凋亡;降低PI3K、AKT、Bcl-2和MET的表达。结论Hes可能通过多靶点抑制PI3K/AKT信号通路的激活,影响乳腺癌细胞的增殖与凋亡。

毛细管电泳法测定密蒙花中的橙皮素、木犀草素和芹菜素

建立了毛细管电泳法分析密蒙花中橙皮素、木犀草素和芹菜素的方法,研究了缓冲溶液pH和浓度、工作电压和进样时间以及β CD的影响。在优化的条件下,3种物质在15min内得到良好分离。橙皮素、木犀草素和芹菜素的质量浓度分别在0.01～0.50mg mL、0.02～0.70mg mL、0.04～0.80mg mL范围内与峰高成良好线性,线性相关系数分别为0.9992、0.9994和0.9984。3种物质基于迁移时间和峰高的相对标准偏差分别为1 3%、2 2%、2 6%和4 2%、3 7%、4 6%。检出限分别为3 5、4 5和5 0μg mL。

橙皮苷及橙皮素清除自由基活性的研究

目的:比较橙皮苷和橙皮素的抗氧化活性。方法:UV-Vis光谱测定橙皮苷和橙皮素对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除作用。结果:橙皮苷和橙皮素对两种自由基都有较好的清除作用,清除效果随浓度的增大而增大。橙皮素清除DPPH·的能力明显强于橙皮苷,橙皮素清除·OH的能力略强于橙皮苷。结论:橙皮素比橙皮苷的体外抗氧化活性强。

TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖及橙皮素、芍药苷的干预

目的：探讨橙皮素和芍药苷对正常培养及TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：首先,0、50、100、150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷作用于正常培养条件下的人肺动脉血管平滑肌细胞,24 h及48 h检测药物的细胞增殖抑制率。接着,应用均匀设计制订TGF-β1与BMP的剂量组合,诱导细胞增殖,多元线性回归和单因素方差分析确定诱导细胞增殖的TGF-β1与BMP的优化剂量组合;应用该剂量诱导细胞增殖,MTT和Brd U两种方法检测药物对细胞增殖的影响。结果：150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷抑制正常培养条件下的细胞增殖（P〈0.05或0.01）。多元回归方程显示：TGF-β1和BMP-4对细胞增殖的影响相互拮抗,7.5 ng/mL TGF-β及20 ng/mL BMP-4显著增加细胞的增殖（P〈0.05）。12.5-100μg/mL的橙皮素不能显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〉0.05）;25-100μg/mL的芍药苷显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〈0.05或0.01）。结论：橙皮素和芍药苷均抑制正常肺动脉平滑肌细胞的增殖。芍药苷抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖,具有较高的研究与开发价值。

5, 7, 3′-三乙酰橙皮素对AA大鼠成纤维样滑膜细胞Jak2/Stat3信号通路及凋亡相关蛋白的影响

目的研究5,7,3'-三乙酰橙皮素(5,7,3'-triacetylhesperetin,TAHP)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)Jak2/Stat3信号通路及凋亡相关蛋白的影响。方法用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型;MTT法检测FLS的增殖反应;Hoechst 33258染色法检测FLS的凋亡;RT-PCR法检测FLS中Jak2、Stat3、Bcl-2、Bax及Caspase-3的基因表达;Western blot法检测FLS中p-Stat3及Caspase-3的蛋白表达情况。结果 TAHP呈剂量和时间依赖性抑制FLS的增殖(P<0.05);Hoechst 33258染色结果提示TAHP可以明显地促进FLS的凋亡;同时TAHP(50,250μmol·L-1)可以明显降低Jak2、Stat3及Bcl-2表达,而上调Bax及Caspase-3表达。Western blot结果显示,TAHP可降低p-Stat3的表达、上调Caspase-3表达。结论 TAHP可以抑制FLS增殖,其作用机制可能与抑制FLS Jak2/Stat3信号通路、促进Bax及Caspase-3表达、抑制Bcl-2的表达有关。

橙皮苷及橙皮素清除超氧阴离子自由基能力的研究

目的:比较橙皮苷和橙皮素清除超氧阴离子自由基(O-2·)的活性。方法:邻苯三酚自氧化法测定橙皮苷和橙皮素对O-2·的清除作用。结果:橙皮苷和橙皮素对O-2有一定的清除作用,在实验范围内,清除效果随浓度的增大而增大。橙皮素清除O-2·的能力明显强于橙皮苷。结论:橙皮素比橙皮苷体外抗氧化能力强。