茶树橙花叔醇和芳樟醇樱草糖苷含量全基因组关联分析及候选基因预测

橙花叔醇与芳樟醇是广泛分布于植物中的挥发性萜烯醇类化合物,在茶树新梢中主要以樱草糖苷形式存在,提高其含量对茶叶香气品质改良具有重要意义。为揭示茶树橙花叔醇和芳樟醇樱草糖苷的遗传机制,本研究以169个茶树自然杂交后代单株为关联群体,利用均匀分布在茶树染色体上的675,245个SNP标记,对3个年份下茶树新梢中橙花叔醇与芳樟醇樱草糖苷含量进行全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)。结果表明,橙花叔醇与芳樟醇樱草糖苷含量的表型变异系数为60.83%~80.08%,广义遗传力分别为51.29%与61.87%,基本符合正态分布,具有典型的数量性状遗传特征。全基因组关联分析共检测到50个显著关联位点,各位点分别对橙花叔醇和芳樟醇樱草糖苷含量变化的贡献率均超过20%,其中橙花叔醇樱草糖苷含量(nerolidol primeveroside content,NPC)变化位点最大贡献率为38.73%,芳樟醇樱草糖苷含量(linalool primeveroside content,LPC)变化位点最大贡献率为39.07%。通过等位变异效应分析,鉴定出4个主效SNP位点及其优异等位变异,并发现1个可同时调控NPC和LPC的一因多效位点。结合已有的文献报道和基因的功能注释,筛选出每个显著位点置信区间内最有可能的候选基因共59个,主要涉及茶树的糖类代谢、转录调控、萜烯类生物合成等多个生物学过程,其中26个基因在适制绿茶品种和适制乌龙茶品种单芽中的表达水平存在显著差异。本研究为深入解析茶树橙花叔醇和芳樟醇樱草糖苷含量的遗传机制提供了新的信息,为加速培育高香型优异茶树新品种提供了重要的基因资源。

橙花叔醇通过Wnt-β-catenin通路调控黑色素瘤细胞的恶性生物学行为

目的:探讨橙花叔醇通过Wnt-β-catenin通路抑制黑色素瘤A-375和WM-115细胞恶性生物学行为的分子机制。方法:体外培养黑色素瘤细胞A-375和WM-115,用不同浓度的橙花叔醇处理,采用SRB法和克隆形成实验、FCM术、Transwell实验和细胞划痕实验、DCFH-DA染色法、qPCR和WB法分别检测橙花叔醇对A-375和WM-115细胞的增殖能力、细胞周期和凋亡、迁移能力、活性氧(ROS)水平和Wnt-β-catenin通路及其下游相关基因和相关蛋白表达的影响。利用ULCAN和GEPIA2数据库分析黑色素瘤中Wnt-β-catenin通路的激活与患者预后的关系。结果:与对照组比较,橙花叔醇处理组A-375和WM-115细胞的增殖能力受明显抑制(均P<0.01)、细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05或P<0.01)、细胞凋亡率增加(均P<0.01)、迁移能力降低(P<0.05或P<0.01)、ROS水平升高(均P<0.01)、Wnt-β-catenin通路被抑制而其下游基因和蛋白表达明显上调(均P<0.01)。数据库数据分析显示,WNT1基因高表达患者OS低于低表达患者(P<0.01)。结论:橙花叔醇通过上调A-375和WM-115细胞中ROS水平影响Wnt-β-catenin通路,从而抑制其恶性生物学行为;Wnt-β-catenin通路可能是黑色素瘤治疗的潜在靶点。

酸橙花总黄酮的分离纯化及其对抗运动疲劳的影响

从酸橙花中提取总黄酮并对其进行纯化,研究酸橙花总黄酮对抗运动疲劳的影响。结果表明:上样液在总黄酮质量浓度1.5 mg/mL、体积70 mL、pH 5.1、流速2.0 mL/min条件下上样至AB-8大孔树脂后,采用110 mL体积分数72.5%乙醇以1.0 mL/min流速洗脱,所得产物的总黄酮含量由22.12%±1.15%提高至66.42%±1.47%,酸橙花总黄酮回收率为71.9%。抗运动疲劳试验表明,酸橙花总黄酮能够延长小鼠的游泳力竭时间,减少乳酸与尿素氮在小鼠血清中的累积,改善肌酸激酶与超氧化物歧化酶的活力。

橙花叔醇对脓毒症急性肺损伤大鼠炎症反应及AMPK/SIRT1通路的影响

【目的】探讨橙花叔醇对脓毒症急性肺损伤大鼠的治疗作用及机制。【方法】采用脂多糖(LPS)股静脉注射法构建脓毒症急性肺损伤大鼠模型,应用橙花叔醇进行预防性治疗。测试用力呼出25%~75%肺活量时的呼气流量(FEF25%-75%)和20毫秒用力呼气量/用力肺活量(FEV20/FVC)比值评估大鼠肺功能。收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理形态,应用血细胞计数器计数BALF中总白细胞数和中性粒细胞数,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测BALF中炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,采用Western Blot法检测肺组织单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/SIRT1通路相关蛋白表达。继而给予AMPK抑制剂Dorsomorphin进行干预,进一步观察橙花叔醇通过激活AMPK/SIRT1通路对LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠的影响。【结果】橙花叔醇可减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理及肺功能损伤,降低BALF中总白细胞数、中性粒细胞数及炎症因子IL-1和TNF-α水平,提高BALF中IL-10水平,上调肺组织磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1蛋白表达水平。【结论】橙花叔醇可通过激活AMPK/SIRT1通路及减轻炎症反应改善脓毒症急性肺损伤大鼠。

酸橙花和甜橙花的UPLC-Q-TOF-MS/MS定性分析及HPLC含量测定

目的 对酸橙花和甜橙花的化学成分进行定性分析与差异性比较,并对不同产地酸橙花和甜橙花中黄酮类成分进行定量分析。方法 采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对酸橙花和甜橙花负离子模式质谱信息进行采集,Peakview质谱分析软件分析数据,通过数据库匹配、质谱峰的裂解规律并结合文献对其成分进行定性分析。质谱数据经MarkerView 1.2.1归一化处理后进行主成分分析与正交偏最小二乘法-判别分析,筛选得到差异性成分。运用HPLC法,采用聚类分析,比较27个不同产地酸橙花和甜橙花中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷黄酮类成分含量的差异。结果 不同产地酸橙花与甜橙花样品的化学组成差异明显,共鉴定出72个化学成分,47个共有成分中共筛选出9个差异性成分,其中5个黄酮类差异性成分的响应信号表现酸橙花明显高于甜橙花。聚类分析可将27批酸橙花与甜橙花样品按不同产地聚成五类。结论 该研究比较了酸橙花与甜橙花的化学成分组成和指标成分的含量,为江西道地植物酸橙和甜橙资源的综合开发利用提供参考依据。

脱氢橙花叔醇的选择性加氢反应研究

脱氢橙花叔醇在催化剂存在和常压(或接近常压)下发生选择性部分氢化反应,形成橙花叔醇.脱氢橙花叔醇氢化反应的合理条件:乙炔化产物中加入质量分数0.075%的Lindlar催化剂(Pd含量5%)、甲苯(按每g乙炔化产物中加入2 mL甲苯的比例计)和少量喹啉,50～60℃通氢气还原,反应终点由色谱跟踪分析结果确定.橙花叔醇的氢化反应得率可达96.2%.

大豆橙花叔醇合酶基因克隆及功能鉴定

通过同源检索得到大豆橙花叔醇合酶(nerolidol synthase,Gm NES)基因Glyma13g32380,采用RT-PCR方法从经水杨酸(SA)处理的大豆材料中,克隆到c DNA片段,其包括完整的ORF(1 605bp)。共编码534个氨基酸,蛋白分子量约62.338 k D。该蛋白序列与番茄等植物的NES序列同源性较高,包含DDXXD保守结构域。将该ORF构建入p ET28a表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达为可溶性蛋白。通过与法尼基焦磷酸合酶基因在大肠杆菌中进行微生物代谢工程共表达,气质联用检测到橙花叔醇的生成。同时还检测到SA模拟生物胁迫处理诱导大豆叶片产生橙花叔醇,并且在1.0 mmol/L SA处理下,Gm NES基因表达量明显上调。本研究克隆了大豆橙花叔醇合酶基因,并鉴定了其生化功能及其在植物体内的生理相关性,为研究大豆萜类代谢及对病虫害的防御反应和抗性品种选育提供了理论依据。

橙花叔醇植物资源及利用的研究

讨论了芳香药用植物秘鲁香、吐鲁香及降香黄檀的分布、生长环境及适应性．西双版纳热带植物园引种栽培表明，它们有各自的生育节律和生态适应幅度．这三种植物的树干和根产生的香树脂，可用于提取芳香油，主要成分为橙花叔醇（Ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ），含量为５０．７９％～８０．９２％．引种的秘鲁香和吐鲁香精油的主要成分不同于原产地，而原产地的主要成分为肉桂酸苄酯（Ｃｉｎｎａｍｅｉｎ）、肉桂酸（Ｃｉｎｎａｍｉｃａｃｉｄ）、苯甲酸苄酯（Ｐｈｅｎｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）等．

HPLC法测定不同产地降香中橙花叔醇的含量

目的:建立降香药材中橙花叔醇的含量测定方法并比较不同产地降香中橙花叔醇的含量。方法:色谱柱:迪马公司 Dia-monsil C_(18)(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水(80:20),流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:220 nm。结果:橙花叔醇在1.9～186.0μg范围内线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为98.9%(RSD=1.2%),不同产地药材中橙花叔醇的含量范围为0.017%～0.670%。结论:不同产地的降香药材中橙花叔醇含量存在显著性差异。

酸橙花化学成分研究

从酸橙(Citrus aurantium L.)花的乙醇提取物中分离并鉴定了11个化合物,分别为:新橙皮甙(Ⅰ)、辛弗林(Ⅱ)、5,8-表双氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(Ⅲ)、腺苷(Ⅳ)、天门冬素(Ⅴ)、酪氨酸(Ⅵ)、缬氨酸(Ⅶ)、异亮氨酸(Ⅷ)、丙氨酸(Ⅸ)、β-谷甾醇(Ⅹ)和β-胡萝卜甙(Ⅺ)。其中,化合Ⅲ～Ⅸ为首次从该植物中分得,化合物Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ为首次从柑橘属植物中分得。

微波辐射氯化铁催化合成橙花素

探讨了在微波辐射下用ＦｅＣｌ３·６Ｈ２Ｏ催化合成橙花素的新合成方法，此法反应速度快，副产物少，产率高。

柱切换色谱法同时测定香丹注射液中水溶性成分及橙花叔醇的含量

目的：采用柱切换程序进样高效液相色谱法对香丹注射液中高含量水溶性成分（丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B）及微量挥发性成分橙花叔醇（含量相差近3个数量级）的含量进行测定。方法：以Agilent SB-C18预柱为预处理柱，Lichrospher C18（4．6min×250mm，5μm）为分析柱；预处理流动相为1％醋酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，流速0．5mL·min^-1；分析流动相为0．05％醋酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，流速1．0mL·min^-1；检测波长：0min，280nm，40min，210nm；柱温40℃；进样程序及进样量为：0min，10灿供试品溶液1；15．3min，200μL供试品溶液2。结果：丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和橙花叔醇在实验浓度范围内线性关系良好（R^2〉10．9990）；平均加样回收率在100％-102％，RSD小于3．0％；丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和橙花叔醇的检出限分别为17．1，0．473，60．2，50．6μg·L^-1。结论：方法简便、灵敏，重复性与加样回收率良好，可用于香丹注射液质量分析。

橙花瑞香的繁殖特性研究

瑞香属植物具有重要的药用和观赏价值,在中国资源丰富,但自然条件下低坐果率限制了该属植物的进一步开发和利用。该研究以橙花瑞香为对象,通过对其有性繁殖及传粉特性的研究,探索其自然坐果率低的原因,内容包括花部特征的测量分析,MTT染色法测定花粉活性,联苯胺-过氧化氢法测定柱头可授性,扫描电镜观察柱头、花粉的形态,传粉者观察,通过花粉胚珠比(P/O)和人工授粉实验推测橙花瑞香的繁育系统类型。结果表明:橙花瑞香的花部结构特殊,管状小花,花药两轮,雌雄蕊分离。花开后的花粉具有活性,柱头具有可授性,扫描电镜下,柱头和花粉的结构没有发育异常,且柱头上有花粉落置。橙花瑞香的传粉者主要是夜间访花的蛾类,访花频率低。P/O及人工授粉实验表明橙花瑞香的繁育系统为专性异交。橙花瑞香的坐果率非常低,自然坐果率为1.4%,人工异花授粉为23.3%,低坐果率可能是受其开花量大、异花花粉限制、资源限制以及花部结构等因素的影响。

催化剂对橙花叔醇异构化反应影响的研究

钒铝钨酸盐类无机催化剂、原钒酸酯类和原钒酸硅酯类有机催化剂均可对橙花叔醇 的催化异构化反应起作用。研究结果表明,3类催化剂中催化效果较好的分别是偏钒酸铵、 原钒酸丁酯和原钒酸三苯基硅酯,它们作为单一催化剂均可使橙花叔醇发生较好的异构化反 应,金合欢醇的产率分别为37．1％、37．2％和32．O％。在单一催化剂对比研究的基础上,将 偏钒酸铵、原钒酸丁酯和原钒酸三苯基硅酯等3种比较好的催化剂进行了多元复配应用试验,研究结果表明, 这3种催化剂的复配应用虽然可以轻微提高橙花叔醇异构化反应效果,但未表现出明显的增效和协同作用。

气相色谱法测定姜味草挥发油中橙花醛与香叶醛

采用水蒸气蒸馏法提取姜味草挥发油,用气相色谱法-氢火焰离子化检测器测定挥发油中橙花醛和香叶醛的含量。橙花醛和香叶醛的线性范围分别为0.0971～0.5826g·L^(-1)和0.1152～0.6912g·L^(-1)方法用于测定4批次姜味草挥发油中橙花醛与香叶醛的含量,橙花醛与香叶醛的质量分数分别为25.00%,29.57%,26.30%,28.59%和36.41%,43.80%,38.72%,41.52%。

H_2SO_4改性活性炭催化合成橙花素

以活性炭负载硫酸作为一种新型、便宜且有效的环境友好固体催化剂,催化合成了橙花素.考察了反应时间、无水乙醇用量、催化剂用量对合成工艺的影响,确定了最佳反应条件为n(β-萘酚)∶n(无水乙醇)=1∶8,催化剂用量1.2 g,反应时间5 h,反应温度80℃.在此条件下,橙花素产率为91.8%.

氯化铁催化合成橙花素

氯化铁催化合成橙花素俞善信，唐艳春（湖南师范大学化学系，长沙４１００８１）橙花素，学名β－萘乙醚，是一种合成香料，具有柔和的花香和持久的橙花香韵，比β－萘甲醚温和，幽雅，在气体中性能稳定，能和其他香料化合物调合，效果良好［１］，因此广泛用于肥皂和化妆...

橙花瑞香茎中酚性成分研究

目的:研究橙花瑞香茎的酚性成分。方法:采用硅胶柱层析与凝胶柱色谱进行分离与纯化,并运用核磁共振和质谱等波谱方法鉴定化合物的结构。结果:从橙花瑞香茎的乙醇提取物中分离得到16个化学成分,包括10个木脂素类成分:(-)-罗汉松脂素(1)、7-羟基扁柏脂素(2)、4-O-去甲基橡胶素(3)、(-)-荜澄茄素(4)、3-甲氧基-3′,4′-(亚甲二氧基)-9,9′-环氧木脂素-4,7′-二醇(5)、(2S,3S)-3-(1,3-苯并二氧戊环-5-亚甲基)-1-(3,4-二甲氧苯基)-2-(羟甲氧基)-1,4-丁二醇(6)、异荜澄茄素(7)、2-(α-羟藜芦基)-3-藜芦基-1,4-丁二醇(8)、瑞香酮(9)、(S)-3-羟基-1,5-二苯基-1-戊酮(10);2个双黄酮类:毛瑞香素A(11)和狼毒素(12);4个香豆素:6-羟基-香豆素(13)、7-羟基-香豆素(14)、异莨菪亭(15)、6,8-二羟基-7-甲氧基-香豆素(16)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。