鹿茸多肽对微波辐射致小鼠卵巢次级卵泡发育损伤的保护作用

目的研究鹿茸多肽(VAP)对微波辐射所致小鼠卵巢次级卵泡发育损伤的保护作用及其机制。方法将75只8周龄昆明种雌性小鼠,随机分为对照组、微波辐射组(MR组)、MR+低VAP组、MR+中VAP组、MR+高VAP组,每组15只。除对照组外,其余小鼠进行5 m W/cm2强度的微波辐射30天;然后MR+低VAP组、MR+中VAP组、MR+高VAP组腹腔注射VAP 30天,剂量分别为1.5 mg·kg-1·d-1、3 mg·kg-1·d-1和6 mg·kg-1·d-1。观察小鼠卵巢组织中次级卵泡的发育情况,TUNEL法检测小鼠次级卵泡中颗粒细胞的凋亡,免疫组织化学法检测小鼠次级卵泡颗粒细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2和活化型促凋亡蛋白caspase-3的表达,ELISA法检测小鼠血清中雌激素水平。结果与MR组比较,高浓度VAP显著提高了小鼠卵巢组织中次级卵泡的发育,改善其组织结构状态,显著减少次级卵泡颗粒细胞的凋亡和活化型促凋亡蛋白caspase-3的表达,升高次级卵泡颗粒细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达和小鼠血清中的雌激素水平。结论 VAP可显著修复微波辐射引起的小鼠卵巢次级卵泡发育损伤,其修复机制可能与减少次级卵泡中颗粒细胞凋亡,促进卵泡雌激素合成和分泌有关。

分离方法及卵巢发育状况对猪次级卵泡分离和采集的影响

试验以直径在200～300μm的次级卵泡为研究对象,研究了不同分离方法和卵巢不同发育状况对猪次级卵泡分离和采集的影响。结果表明,显微分离法每个卵巢可采集的卵泡数极显著高于剪碎过滤法,显微分离法分离每个卵泡所用的时间极显著低于剪碎过滤法;有黄体和无黄体的卵巢对卵泡采集的影响差异不显著,但有黄体的卵巢分离的卵泡数稍多于无黄体的卵巢。

牛次级卵泡和三级卵泡前期生长发育的组织学研究

通过对牛次级卵泡和三级卵泡前期生长发育的组织学研究 ,探讨了次级卵泡和三级卵泡前期的生长发育规律。结果表明 :在卵泡生长发育过程中 ,卵泡颗粒细胞层数达 5～ 6层时 ,开始出现不连续卵泡腔 ;其层数在 8层以上则以连续腔为主 (占 94 .74 % ) ,连续腔出现最多的层数为 8～ 16层 (占 84 .2 1% )。次级卵泡在颗粒细胞层数达到 3～ 4层时 ,已形成完整的透明带 ,颗粒细胞层数达到 5层时 ,透明带增厚。随着颗粒细胞层数的增多 ,卵泡直径和卵母细胞直径均增大。次级卵泡卵母细胞直径的增长和卵泡直径增长速度基本接近 ;而进入有腔卵泡阶段 ,卵母细胞直径的增长速度相对于其卵泡直径的增长缓慢。次级卵泡颗粒细胞层数在 2～ 5层 ;颗粒细胞层数达

分离方法及卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响

【目的】探讨影响猪腔前卵泡分离的因素,建立有效分离猪腔前卵泡的方法。【方法】以猪次级卵泡为对象,比较4种分离方法和11种卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响。【结果】针刮法分离猪次级卵泡的数量（（14.37±2.29）枚）极显著高于剪碎法（（5.62±2.67）枚）、显微分离法（（8.28±2.53）枚）和酶消化-机械分离法（（8.86±1.91）枚）,而且针刮法的处理时间（（15.29±1.82）min）较其他3种方法短（（20.51±1.99）min（、59.24±4.59）min（、40.59±2.67）min）,分离得到的次级卵泡体外培养3 d后,存活率在针刮法（53.29%）、剪碎法（51.08%）、显微分离法（49.87%）之间无明显差异,但均极显著高于酶消化-机械分离法（28.31%）。从不同质量卵巢中采集的次级卵泡数量有较大差异,质量为〉3.0～≤8.0 g（（15.36±2.32）枚）的卵巢得到的次级卵泡数量较≤3.0g（（6.31±2.19）枚）和〉8.0 g（（7.83±2.71）枚）多。卵巢有无黄体与次级卵泡的采集数量无明显关系;卵巢上不同大小的可见卵泡数量和分布与腔前卵泡的采集数量相关,卵巢上可见卵泡均衡分布,中、小卵泡较多而无大卵泡,无论黄体存在与否,均可获得较多次级卵泡。【结论】针刮法是分离猪次级卵泡的一种有效方法;在分离卵泡时,要选择质量在3.0～8.0 g,且有可见中、小卵泡均衡分布而无大卵泡的卵巢。

NF-κB信号在小鼠次级卵泡向有腔卵泡转化中的作用

已有报道NF-κB信号通路是控制颗粒细胞凋亡的重要机制之一,但尚需证据揭示其中的相互作用。本研究通过建立NF-κB信号激活的转基因小鼠模型,结合HE染色、Masson染色、免疫荧光化学、免疫组织化学、Western blotting、qPCR等形态学及分子生物学方法,探讨NF-κB信号在卵巢卵泡发育中的作用。结果发现,NF-κB信号在从次级卵泡向有腔卵泡的转化过程中被激活,NF-κB信号激活的转基因小鼠有腔卵泡数量高于野生型小鼠;NF-κB信号通路的激活可以促进小鼠卵巢卵泡颗粒细胞的增殖以及抑制颗粒细胞的凋亡.

多囊卵巢综合征患者卵泡基底膜超微结构的研究

运用透射电镜观察多囊卵巢综合征(PCOS)组及正常妇女组卵泡的形态,用体视学方法测量两组各级卵泡基底膜的厚度。结果显示:两组原始卵泡的基底膜厚度相似,但随着卵泡的发育卵泡基底膜逐渐增厚,PCOS组增厚更明显,对照组初级卵泡基底膜的平均厚度是0 293±0 204μm,PCOS组是0 463±0 287μm,两组比较有统计学差异(P<0 05)。对照组次级卵泡基底膜的平均厚度为0 542±0 298μm,PCOS组为1 234±0 345μm,两组比较有统计学差异(P<0 05)。两组原始卵泡的前颗粒细胞的超微结构相似,随着卵泡的发育,PCOS组的颗粒细胞内参与蛋白质合成的细胞器明显较对照组丰富;正常组窦前卵泡的颗粒细胞出现分化现象,PCOS组却未见分化现象。结果提示:PCOS患者卵泡基底膜屏障的增厚可能使卵泡刺激素FSH进入卵泡困难,颗粒细胞不能正常分化,"FSH 颗粒细胞轴"功能低下,导致不孕症。

牛腔前卵泡的简易机械分离方法

采用两种机械法分离牛腔前卵泡。方法一 (M -1) ,皮肤移植刀切割、剪碎、过滤镜下直接捡卵法。方法二 (M -2 ) ,皮质片剪碎、离心、悬浮、过滤镜下捡卵法。M -1平均每卵巢采卵数为 46 9个± 18 2个 ,M -2为 6 8 4个± 12 5个 ;处理时间M -1为 2 5 4min± 6 7min ,M -2为 46 3min± 16 8min ,两种方法采集腔前卵泡数量及处理时间均存在显著差异。平均每小时采集卵泡数分别为 99 5和 87 2个 ,M -1多于M -2。两种方法获得腔前卵泡大小分布规律也有明显差异 ,M -1采集腔前卵泡直径为 6 0～ 15 0 μm ,绝大部分是次级卵泡 ,而M -2获取腔前卵泡则偏小。总的看来 ,M -1处理时间短 ,回收效率高 ,方法简便 ,且分离卵泡直径较大 ,适于体外培养 ,是机械分离牛腔前卵泡的一种理想方法。

小鼠窦前卵泡二维体外培养法的优化研究

目的优化小鼠窦前卵泡二维体外培养体系,探讨卵泡刺激素(FSH)对小鼠窦前卵泡体外发育的影响。方法将分离自14 d雌鼠的初级卵泡(80~100μm)和早期次级卵泡(110~130μm)分别培养在浓度为10、100 mU/ml r-FSH的培养液中,观察并记录卵泡体外生长情况和卵母细胞的成熟情况;检测并分析第10天窦卵泡的空间生长情况及不同培养液中卵泡的雌二醇(E2)分泌水平;Western blotting检测卵泡中FSH受体(FSHR)、类固醇激素合成限速酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、17α-羟化酶(CYP17)及芳香化酶(CYP19)的表达水平。结果初级卵泡在10、100 mU/ml r-FSH培养液中的成腔率(0.00%±0.00%,36.14%±4.02%)及卵母细胞成熟率(0.00%±0.00%,23.54%±7.62%)明显低于早期次级卵泡成腔率(78.63%±4.13%,92.74%±2.54%)及卵母细胞成熟率(48.55%±3.73%,80.88%±4.02%),差异有统计学意义(P<0.05);在100 mU/ml r-FSH培养液中的早期次级卵泡成腔率(92.74%±2.54%)、卵母细胞成熟率(80.88%±4.02%)明显高于在10 mU/ml r-FSH培养液中的卵泡成腔率(78.63%±4.13%)及成熟率(48.55%±3.73%),差异有统计学意义(P<0.05);早期次级卵泡在10 mU/ml r-FSH的培养液中呈平铺式生长模式,而在100 mU/ml r-FSH培养液中呈立体空间生长模式,后者更接近于体内卵泡的生长模式;早期次级卵泡中FSHR的相对表达水平明显高于初级卵泡(1.86±0.32 vs.1.19±0.28,t=4.94,P<0.05)。100 mU/ml r-FSH培养液中早期次级卵泡组卵泡3b-HSD、CYP17及CYP19的表达以及E2的分泌水平明显高于用10 mU/ml r-FSH培养液培养时。结论FSH不仅会影响窦前卵泡的体外发育率,还会改变窦前卵泡的体外发育模式。选择早期次级卵泡培养在含100 mU/ml r-FSH的二维培养液中培养可获得理想的卵泡发育率及发育模式。

如皋黄鸡不同产蛋时期卵巢卵泡变化规律分析

为探索不同产蛋时期如皋黄鸡卵巢卵泡变化规律,选取预产期(16周龄)、产蛋初期(20周龄)、产蛋高峰期(27周龄)、产蛋末期(64周龄)如皋黄鸡蛋鸡,对输卵管、卵巢重量、等级前卵泡数进行统计,同时卵巢进行组织切片HE染色后对原始、初级、次级卵泡进行了观察和测量统计,对不同阶段卵泡的数量变化进行了比较分析。结果表明:随产蛋时期的推进,卵巢、输卵管重呈上升趋势,4种等级前卵泡数量在产蛋高峰期达最高值;次级卵泡数量在预产期最高,不同直径的次级卵泡数量在产蛋期进程中变化规律有所不同;此外,初级卵泡平均直径在不同产蛋时期亦有差异。

湖羊胎儿期与生后期的卵巢发育

本试验对湖羊胎儿期与生后期卵巢的发育进行了系统观测。结果表明:45天胎儿即初步形成卵巢,胎儿期卵巢生长较稳定;75天胎龄卵巢出现大量性细胞索和性细胞团;95天时卵巢分化为皮质区和髓质区,发生大量卵母细胞和原始卵泡;130天胎龄完成卵巢主要结构,分区较清楚,皮质区厚度明显减少,开始产生次级卵泡。试验证明,湖羊生后4月龄前,卵巢发育与活重关系较大,之后无直接关系。生后至六月龄,存在卵母细胞由发生到衰退的全过程,各月龄卵母细胞数基本恒定,但在前期(幼年)卵母细胞出现时多时少的现象。卵母细胞发育与所在部位有关,与卵泡生长密切相关。生后各月龄次级卵泡生长下,卵泡直径出现时大时小的现象。成熟卵泡只有直径达最大(>4毫米)且卵泡壁变薄时才出现排卵。各时期卵泡均有闭锁现象。出生后,卵巢纤维膜明显增厚,卵巢实质部分由胎儿期两个区分化为皮质区、卵泡区和髓质区。

卵巢的神经供给

卵巢的神经供给的研究,早在十九世纪的七十年代就已经开始,Frankenhauser(1867)[1]与Waldeyer(1870)[2]描述过神经纤维由卵门进入卵巢,或伴随血管,或直接到达卵泡。此后又继以许多研究。然而除了卵巢血管有丰富的神经供给为组织学家所公认以外,卵巢基质与间质里的神经结构的研究结果却很少.