外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13在神经梅毒患者中的检测意义

目的分析外周血T淋巴细胞、白介素-4(IL-4)及趋化因子CXC配体13(CXCL13)水平检测在神经梅毒患者中的临床意义。方法选取2020年9月至2023年1月四川大学华西医院收治的188例梅毒患者作为研究对象,其中包括62例血清固定患者(血清固定组)及126例神经梅毒患者(神经梅毒组)(包括无症状型31例,早期58例,晚期37例)。另选取同时期于本院门诊和体检就诊的正常健康者(对照组)80名。比较不同人群、梅毒不同病情程度患者外周血T淋巴细胞、IL-4及化因子CXCL13水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13联合检测对早期神经梅毒识别的诊断价值。结果CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)值:神经梅毒组<血清固定组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-4、CXCL13水平:神经梅毒组>血清固定组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)值:晚期组<早期组<无症状组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-4、CXCL13水平:晚期组>早期组>无症状组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC分析显示,外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13联合检查灵敏度为89.68%,特异度为91.11%,AUC=0.862(95%CI:0.806-0.933),均高于三指标单一检查(P<0.05)。结论外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13水平变化与神经梅毒患者病情密切联系,三者联合检测度对神经梅毒的早期识别诊断具有更好的灵敏度、特异度,在神经梅毒病情进展评估及临床指导上具有更好的应用价值。

淋巴细胞亚群联合趋化因子对儿童原发免疫性血小板减少症诊断价值研究

目的探讨淋巴细胞亚群联合趋化因子对儿童原发免疫性血小板减少症(ITP)的诊断价值。方法收集拟诊为ITP的132例患儿,根据ITP相关的临床诊断标准诊断结果将患儿分为ITP组与非ITP组。抽取外周静脉血6 ml,以流式细胞仪对CD4^(+)、CD8^(+)及CD3^(+)水平进行检测,以酶联免疫吸附法检测CC类趋化因子配体5(CCL5)、CC类趋化因子配体11(CXCL11)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,以全自动细胞分析仪对血小板计数(PLT)进行检测。比较2组患儿淋巴细胞亚群及趋化因子水平,并对淋巴细胞亚群及趋化因子水平与PLT进行相关性分析;采用ROC法评估各指标单独检测与联合检测对ITP的诊断效能。结果ITP组患者CD4^(+)和CD3^(+)水平低于非ITP组,CD8^(+)水平高于非ITP组(P<0.05);ITP组患者CCL5、CXCL11和MCP-1水平均高于非ITP组(P<0.05);相关性分析结果显示ITP组患者CD4^(+)和CD3^(+)与PLT呈正相关(P<0.05),CD8^(+)、CCL5、CXCL11、MCP-1与血小板计数呈负相关(P<0.05);ROC分析结果显示,CD4^(+)、CD8^(+)、CD3^(+)、CCL5、CXCL11和MCP-1对儿童ITP诊断的截断值值分别为27.13%、24.02%、59.88%、41.02 ng/L、30.18 ng/L和188.27 ng/L,AUC分别为0.893、0.880、0.629、0.801、0.892和0.751,六者并联诊断(指并联检测时CD4^(+)、CD3^(+)中的一项及以上低于截断值和/或CD8^(+)、CCL5、CXCL11和MCP-1中的一项及以上高于截断值)的AUC为0.967,其诊断效能高于各指标单独检测(P<0.05)。结论儿童ITP患者与非ITP患者淋巴细胞亚群及趋化因子均具有差异,CD4^(+)、CD8^(+)、CD3^(+)、CCL5、CXCL11和MCP-1可用于儿童ITP的诊断,各指标联合检测可提高检测效能。

超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子在急性淋巴细胞白血病中的表达水平及临床意义

目的:探讨超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子在急性淋巴细胞白血病中的表达水平及临床意义。方法:选取2018年5月—2020年5月河南科技大学第一附属医院收治的100例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组,另选取同期100例健康体检者作为对照组,根据不同预后结局将急性淋巴细胞白血病患者分为缓解组67例和未缓解组33例。比较观察组和对照组、缓解组和未缓解组血清超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子水平,应用ROC曲线分析血清超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子患者预后的判断价值。结果:观察组血清超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子水平分别为(21.34±7.95)mg/L、(38.62±10.79)pg/mL,均高于对照组的(4.86±2.17)mg/L、(7.91±1.94)pg/mL,差异有统计学意义(t=19.998、28.012,P<0.05);缓解组血清超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子水平分别为(19.47±4.15)mg/L、(24.68±5.13)pg/mL,均低于未缓解组的(34.58±4.79)mg/L、(42.51±12.74)pg/mL,差异有统计学意义(t=23.841、12.982,P<0.05);血清超敏C反应蛋白[AUC:72.70,SE:0.053,Sig:<0.001,95%CI:(0.623,0.832)]和淋巴细胞趋化因子[AUC:76.30,SE:0.061,Sig:<0.001,95%CI:(0.643,0.883)]对急性淋巴细胞白血病患者预后预测价值低于联合检测预测价值[AUC:89.80,SE:0.043,Sig:<0.001,95%CI:(0.815,0.982)]。结论:急性淋巴细胞白血病患者血清超敏C反应蛋白和淋巴细胞趋化因子水平较健康者高,与患者预后密切相关,二者联合检测评估患者的预后具有较好的预测价值。

C-C趋化因子配体5通过诱导帕金森病模型小鼠外周Th17细胞比例增加、Treg细胞比例减少及促进Th17细胞表达淋巴细胞功能相关抗原1而加重神经炎症的研究

目的探讨帕金森病(PD)中C-C趋化因子配体5(CCL5)对外周CD4^(+)T细胞激活与分化的影响,以及CCL5对Th17细胞与Treg细胞向黑质(SN)迁移介导神经免疫炎症的影响。方法C57B6/J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)构建PD动物模型,并进行CCL5腹腔注射干预。利用转棒实验和爬杆实验检测小鼠行为能力,利用流式细胞染色检测小鼠外周CD4^(+)T细胞比例及相关表型,利用Western blotting法检测小鼠SN中酪氨酸羟化酶(TH)和α-突触核蛋白的表达,利用免疫荧光染色检测小鼠SN中多巴胺能(DA)神经元数量和Th17/Treg细胞的浸润数量。结果MPTP小鼠与对照组小鼠相比运动功能显著降低,而干预CCL5进一步加重MPTP小鼠的运动功能障碍。MPTP小鼠较对照组小鼠表现为外周Th17细胞比例增加而Treg细胞比例减少;而CCL5干预不仅诱导MPTP小鼠外周Th17细胞比例进一步增加和Treg细胞比例进一步减少,还能够增加淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)在Th17细胞上的表达但不影响其在Treg细胞中的表达。在中枢,MPTP小鼠SN中DA神经元数量减少、Th17细胞浸润数量增加而Treg细胞浸润数量减少;MPTP小鼠经CCL5干预后,SN中DA神经元数量进一步减少、Th17细胞浸润数量显著增加和Treg细胞浸润数量显著减少。结论CCL5能够诱导MPTP小鼠外周Th17细胞比例增加和Treg细胞比例减少以及诱导Th17细胞表达LFA-1,导致MPTP小鼠SN中Th17细胞数量增加而Treg细胞数量减少,从而加重中枢神经炎症和DA神经元损伤。

丙卡特罗联合雾化吸入布地奈德治疗哮喘患儿的临床疗效及对T淋巴细胞趋化因子受体3水平的影响

目的探讨丙卡特罗联合雾化吸入布地奈德治疗哮喘患儿的临床疗效及对T淋巴细胞趋化因子受体3(CXCR3)水平的影响。方法选取2019年1月至2021年6月深圳大学总医院收治的61例哮喘患儿作为研究对象,采用随机摸球法分为观察组(n=31)与对照组(n=30)。对照组给予常规治疗联合丙卡特罗治疗,观察组在对照组基础上联合雾化吸入布地奈德治疗,比较两组治疗前后肺功能指标、血清炎症因子及CXCR3表达水平。结果治疗后,两组达峰时间比(TPEF/TE)、达峰容积比(VPEF/VE)均高于治疗前,每公斤体质量潮气量均大于治疗前,且观察组TPTEF/TE、VPEF/VE均高于对照组,每公斤体质量潮气量大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清白细胞介素-8(IL-8)及白细胞介素-4(IL-4)水平均低于治疗前,干扰素-γ(IFN-γ)水平均高于治疗前,且观察组IL-8及IL-4水平低于对照组,IFN-γ水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组CXCR3水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丙卡特罗联合雾化吸入布地奈德可明显改善哮喘患儿的肺功能,减轻炎症反应,降低CXCR3水平。

次级淋巴组织趋化因子基因转染对小鼠黑色素瘤细胞生物学特性的影响

目的研究次级淋巴组织趋化因子(SLC)基因转染对小鼠恶性黑色素瘤细胞生物学特性的影响。方法采用脂质体法将小鼠SLC基因转染至小鼠恶性黑色素瘤细胞中,并通过G418筛选出转基因细胞克隆。体外检测SLC基因转染恶性黑色素瘤细胞的增殖,并通过趋化小室法检测细胞培养基上清液中SLC的趋化活性。检测野生型和基因转染的恶性黑色素瘤细胞在体内的致瘤性,并病理检测肿瘤组织中免疫细胞的浸润。结果SLC基因转染的恶性黑色素瘤细胞和野生型恶性黑色素瘤细胞在体外的增殖没有明显差别。分泌于细胞培养基上清液中的SLC表现出了趋化活性。SLC基因转染并没有降低细胞的致瘤性,但是移植瘤的生长明显慢于野生型恶性黑色素瘤细胞移植瘤的生长,并且病理证实SLC基因转染的肿瘤细胞移植瘤内呈现明显的淋巴细胞浸润。结论SLC基因转染在小鼠黑色素瘤能诱导抗肿瘤免疫,有可能被应用于恶性肿瘤的免疫治疗。

次级淋巴组织趋化因子和甲胎蛋白共修饰的树突状细胞诱导特异性抗肝癌免疫作用的研究

背景与目的:树突状细胞(dendritic cell,DC)是迄今发现的抗原呈递功能最强的专职抗原呈递细胞,近年来以DC为基础的肿瘤基因免疫治疗研究倍受瞩目。病毒载体介导的基因转移以其高效和良好的靶向性已被广泛应用于肿瘤基因治疗。本实验拟制备携带人AFP和SLC基因的慢病毒表达载体,并于体外感染CD34+造血干细胞来源的DC,诱导DC产生特异性抗肝癌细胞免疫作用,观察其对肝癌细胞株的杀伤作用。方法:采用化疗和集落刺激因子动员的肝癌患者外周血造血干细胞,血细胞分离机采集CD34+造血干细胞,IL-4、GM-CSF联合TNF-α刺激CD34+细胞分化为DC。并检测经Lenti-AFP/Lenti-SLC转染致敏后的DC对CTL增殖的影响,并检测其对人肝癌细胞HepG2的作用。结果:经细胞因子刺激诱导培养的DC具有典型的分枝状突起,高表达CD1a、CD11c、CD80和CD86。MTT法检测Lenti-AFP/Lenti-SLC抗原冲击的DC能明显诱导CTL增殖。此CTL对表达AFP的肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著性高于未转染DC组和无DC组(P<0.05和P<0.01),效靶比为50:1时杀伤效应达到最高峰(P<0.01)。结论:Lenti-AFP/Lenti-SLC抗原转染的DC在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对AFP阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗奠定了基础。

不同浓度的次级淋巴组织趋化因子对外周血单个核细胞生物学功能的影响

目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对外周血单个核细胞(PBMC)生物学功能的影响。方法根据SLC浓度,实验分为6组,通过趋化实验检测PBMC的趋化,并通过流式细胞术检测PBMC凋亡及增殖能力,ELISA检测PBMC培养上清中IL-10和IFN-γ的表达。结果一定浓度范围内,SLC可增强PBMC的迁移、抗凋亡、增殖及IFN-γ表达能力。降低IL-10的表达水平,证明上述作用具有浓度依赖性。结论SLC可通过促进PBMC迁移,增强其增殖,诱导Th1类细胞分化,提高了机体的免疫应答。

趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达及其意义

目的研究趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞各亚群的表达,并与健康人进行比较,探讨其与临床病理分期之间的相关性。方法分别收集健康人组、胃癌患者术前和术后外周血,进行荧光标记和红细胞裂解后,流式细胞仪检测CCR7在外周血淋巴细胞各亚群的表达,并分析其与临床病理分期之间的相关性。结果与健康人组相比,术前胃癌患者外周血T细胞各亚群中CCR7的表达明显下降,术后CCR7在外周血T细胞各亚群的表达明显升高。CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达与临床病理分期密切相关,Ⅰ、Ⅱ期患者外周血淋巴细胞中CCR7的表达率明显高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者(P<0.05)。结论趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达明显降低,其表达水平与胃癌的临床病理分期相关。

CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理研究

本研究以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因与小鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)基因体内联合转染,观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理.小鼠皮下接种结肠腺癌CT26细胞后3天,肿瘤局部注射表达Ltn的重组腺病毒AdLtn和表达CD的重组腺病毒AdCD,然后连续10天给予5一氟胞嘧啶(5-FC)300mg/kg进行治疗,结果表明,联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制,小鼠存活期明显长于单用AdLtn治疗组或单用AdCD/5-FC治疗组.经联合治疗后小鼠脾细胞的NK活性和对(37结肠腺癌细胞的CTL杀伤活性明显增强.瘤体细胞FACS分析结果表明,经联合基因治疗后,肿瘤组织CD4^+、CD8^+细胞浸润增加,结肠腺癌细胞表达H-2Kd和B7-1分子明显增加.提示经CD自杀基因和Ltn基因联合治疗后,肿瘤细胞免疫原性增加.本研究结果表明联合应用自杀基因和Ltn基因治疗可以提高机体对肿瘤细胞免疫的应答,增加机体的抗肿瘤作用,是肿瘤基因治疗中一条新的途径.

银屑病患者淋巴细胞与中性粒细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA的表达

目的:了解银屑病患者外周血淋巴细胞与中性粒细胞中CXC型趋化因子受体CXCR3 mRNA的表达水平及其与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)之间的关系.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测进行期斑块型银屑病患者33例及其中16例患者治疗后外周血淋巴细胞及中性粒细胞中CXCR3 mRNA的表达水平,设30例健康人作为正常对照,并将检测结果与PASI进行了相关性分析.结果:斑块型银屑病患者外周血淋巴细胞中CXCR3 mRNA表达水平为1.12±0.81,明显高于健康对照组(0.28±0.28,P<0.01)与治疗后患者(0.57±0.61,P<0.05),并与PASI之间呈明显正相关(r=0.516,P<0.05);而中性粒细胞中CXCR3 mRNA表达水平为1.72±1.68,与健康对照组(1.27±1.17)及同一组患者治疗后(1.27±1.01)相比均无明显差异(P>0.05).结论:CXCR3可能主要通过活化与趋化外周血淋巴细胞而参与了银屑病的发病机制.

小鼠淋巴细胞趋化因子重组腺病毒载体的构建及其在骨髓树突状细胞中的表达

经ＲＴ－ＰＣＲ克隆小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ，Ｌｔｎ）的全长编码ｃＤＮＡ，将其置于ＣＭＶ启动子下游，插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ。Ｌｔｎ重组腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ．ＣＩｍＬｔｎ与经ＥｃｏＴ２２Ｉ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＡ－末端肽复合物共转染２９３细胞，制备Ｌｔｎ重组腺病毒，扩增到的病毒滴度为３．６×１０９ｐｆｕ／ｍｌ。用重组ＧＭ－ＣＳＦ从小鼠骨髓中扩增到的树突状细胞本身并不表达Ｌｔｎ；体外感染Ｌｔｎ重组腺病毒后４ｈ即可经ＲＴ－ＰＣＲ检测到Ｌｔｎ的表达，其２４ｈ的细胞培养上清体外对ＣＤ４＋Ｔ细胞和ＣＤ８＋细胞具有显著的趋化活性，表明所制备的Ｌｔｎ重组腺病毒能有效介导Ｌｔｎ在树突状细胞中的表达，为研究Ｌｔｎ基因修饰的树突状细胞诱导Ｔ细胞免疫应答奠定基础。

肾结核病灶中淋巴细胞趋化因子的表达

目的:探讨淋巴细胞趋化因子在正常肾脏和肾结核中的表达以及淋巴细胞趋化因子和浸润CD4+、D8+T细胞在肾脏结核病灶中的分布特点。方法:6例正常肾脏和10例肾结核病变组织,经匀浆后,采用RT-PCR法扩增人淋巴细胞趋化因子(hLptn)的含编码区序列的cDNA;扩增cDNA的克隆至pGM-TEasy T载体,测序;应用免疫组织化学方法检测正常肾脏和肾结核中的hLptn的表达和结核病灶中的CD4、CD8分子的表达。结果:正常肾脏和肾结核组织均表达hLptnmRNA,应用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列一致;hLptn在正常的肾小球、肾小管中和结核病变中残存的肾小球、肾小管中均有表达;结核病变中有散在的CD4和CD8分子阳性细胞,与hLptn的分布无重叠。结论:淋巴细胞趋化因子在肾脏的肾小球和肾小管中呈结构性表达,肾结核肉芽肿中淋巴细胞的募集可能非依赖于hLptn的作用。

胎盘细胞嗜酸性粒细胞趋化因子和T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S表达与自然流产的相关性

目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子(RANTES)在正常妊娠免疫耐受及反复性自然流产中的作用。方法构建正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c(正常妊娠组)和反复性自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2J(自然流产组);采用免疫组织化学方法检测胎盘细胞趋化因子Eotaxin、RANTES的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胎盘细胞培养上清液的白细胞介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ水平,分析胎盘细胞趋化因子Eotaxin、RANTES与细胞因子IL-4、IFN-γ水平的相关性。结果自然流产组的胚胎丢失率为18.3%,显著高于正常妊娠组的3.6%(P<0.05)。正常妊娠组的胎盘细胞Eotaxin的表达阳性率为53.6%,显著高于自然流产组的40.8%(P<0.05);而正常妊娠组的胎盘细胞RANTES的表达阳性率为44.3%,显著低于自然流产组的62.3%(P<0.05)。正常妊娠组的IL-4水平为(1.33±0.43)ng/L,显著高于自然流产组的(0.78±0.41)ng/L(P=0.002);正常妊娠组的IFN-γ水平为(1.24±0.57)ng/L,显著低于自然流产组的(1.67±0.44)ng/L(P=0.038)。自然流产组中,胎盘细胞Eotaxin的表达与IL-4水平呈正相关(r=0.752,P=0.003),RANTES的表达与IFN-γ水平亦呈正相关(r=0.658,P=0.014);正常妊娠组中,RANTES的表达与IFN-γ水平呈正相关(r=0.649,P=0.012),IL-4水平随Eotaxin表达阳性率的上升而显示出增加趋势。结论Eotaxin、RANTES在妊娠免疫耐受形成和自然流产的发病机制中可能发挥重要作用。

淋巴细胞趋化因子增强肝癌树突状细胞融合瘤苗体外免疫作用

目的:观察淋巴细胞趋化因子(lymphotactin ,Lptn)基因修饰的肝癌树突状细胞(dendriticcells,DC)融合瘤苗的体外生物学特征和免疫作用。方法:以重组Lptn基因修饰小鼠骨髓来源的DC ,在聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)作用下与H2 2小鼠肝癌细胞融合,分别以RT -PCR及ELISA方法检测LptnmRNA及蛋白水平表达,流式细胞仪分析细胞表面免疫分子表达。MTT法检测Lptn基因修饰的肝癌树突状细胞融合瘤苗(DCLptn/H2 2 )对同种异体T淋巴细胞的体外刺激作用。LDH法检测DCLptn/H2 2融合瘤苗诱导产生的杀伤性T淋巴细胞活性。结果:Lptn基因修饰的DC能分泌较高浓度的淋巴细胞趋化因子,并且具有明显的趋化淋巴细胞功能。DCLptn/H2 2不但增强融合瘤苗刺激同种异体T淋巴细胞增殖,而且能增强杀伤性T淋巴细胞活性。结论:淋巴细胞趋化因子基因修饰能增强融合瘤苗体外免疫刺激作用。

人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及其在细胞中的表达(英文)

目的构建人淋巴细胞趋化因子(humanlymphotactin,hLptn)真核表达质粒,并在膀胱肿瘤细胞株BIU-87中的表达重组质粒。方法用RT-PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增hLptn的含编码区序列的cDNA,克隆至pGM-TEasyT载体,测序正确后,将目的片段插入pcDNA3.1(+)载体,获得阳性克隆pcD-NA3.1(+)-hLptn,用脂质体将其转染BIU-87细胞,经G418筛选稳定表达克隆,用免疫荧光染色技术鉴定经筛选的克隆。结果克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第225位碱基不同,系同义突变;构建了真核重组表达载体pcDNA3.1(+)-hLptn;筛选获得了稳定表达转染hLptn的BIU-87细胞株。结论成功构建的hLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU-87中稳定表达,为研究hLptn基因介导的人膀胱肿瘤特异性主动免疫治疗奠定了基础。

CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子RANTES的影响

目的:探讨CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子RANTES的影响与意义,以及免疫抑制剂环孢素(CsA)对RANTES产生的抑制作用。方法:分离健康人外周静脉血中的淋巴细胞,实验分为4组;①抗CK3单克隆抗体(mAb)刺激组;②抗CD28mAb刺激组;③抗CD3mAb+抗CD28mAb共刺激组,即CD28共刺激组;④未加任何刺激作为对照组。吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)和CsA以不同终浓度干预CD28共刺激组。采用ELISA 法测定培养上清中RANTES含量,流式细胞术检测淋巴细胞CD25和RANTES受体CCR5表达率。结果:培养48h后,CD28共刺激组RANTES产生显著增加(P<0.05);不同剂量PDTC和CsA对CD28共刺激后淋巴细胞产生RANTES均具有抑制作用;CD28共刺激后淋巴细胞CD25表达率显著增高(P<0.05),而CCR5表达率显著降低(P<O.O5)。结论:CD28通路共刺激后淋巴细胞产生RANTES显著增加。淋巴细胞产生RANTES及其对RANTES的反应均受到CD28共刺激信号调控。核因子(NF)-κB的特异性抑制剂 PDTC和免疫抑制剂CsA均可抑制淋巴细胞产生RANTES。

人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及体外转染的生物学活性测定

目的: 构建人淋巴细胞趋化因子(HLptn)真核表达质粒,在膀胱肿瘤细胞株BIU -87中表达重组质粒,并检测趋化活性。 方法: 用RT- PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增HLptn含编码区序列的cDNA,克隆至pGM TEasyT载体,测序正确后,将目的片段插入pcDNA3. 1( +)载体,获得阳性克隆pcDNA3. 1( +) HLptn;用脂质体介导其转染BIU- 87细胞,用Western -blot检测转染后细胞中HLptn的表达;取转染后的上清液,采用Boyden小室法检测表达的HLptn趋化CD4+、CD8+T淋巴细胞的生物学活性。 结果: 克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第 225位碱基不同,系同义突变,构建了真核重组表达载体pcDNA3. 1 ( +) -HLptn;转染的BIU-87细胞表达HLptn,其培养上清对CD4+、CD8+T淋巴细胞具有趋化活性。 结论: 成功构建的HLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU- 87中表达。

次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸

目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。