次要组织相容性抗原在异基因造血干细胞移植中应用的研究进展

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是目前治愈血液系统恶性疾病的有效手段。由于次要组织相容性抗原(minor histocompatibility antigens,mHags)本身的特性及其免疫学效应,在allo-HSCT后的移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)和移植物抗白血病效应(graft versus leukemia effect,GVL)中都发挥了重要的作用。研究发现,一些mHags分布广泛,在各种细胞中均有表达,如HA-3、HA-4等;另外一些则限制性表达在造血细胞起源的细胞表面,如HA-1、HA-2等。目前正在研究利用mHags分布的差异应用于allo-HSCT中,以达到加强GVL和减少GVHD的目的。

肝细胞内人类次要组织相容性抗原-HA8蛋白反式激活基因的筛选

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术及生物信息学技术筛选肝细胞内人类次要组织相容性抗原-HA8（HLA-HA8）的反式激活基因。方法以HLA-HA8基因表达质粒pcDNA3.1（-）-HLA-HA8和空载体pcDNA3.1（-）转染HepG2细胞,提取mRNA并反转录合成双链cDNA（dscDNA）,分别标记为Tester和Driver;经RsaI酶切后,将Tester cDNA分成两组,分别与两种不同的接头adapter 1和adapter 2衔接,再与Driver cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将产物与pGEM-T easy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建HLA-HA8反式激活基因差异表达cDNA消减文库。扩增后得到101个阳性克隆,菌落PCR分析均得到200~1000bp的插入片段。随机挑选其中28个阳性片段测序,同源分析结果显示,共获得16种编码基因,其中4个功能未知。结论 HLA-HA8基因反式调节基因与细胞结构和生长、物质及能量代谢、物质转运和信号转导密切相关,为HLA-HA8的功能以及HBV感染慢性化机制研究提供了新的思路。

次要组织相容性抗原及其在GVHD与GVL中的作用

排斥反应已成为目前器官移植亟待解决的问题。很多情况下在主要组织相容性抗原达标的下还会出现明显移植物抗宿主反应（GVHR），而目前尚无特效针对方案，因此对于次要组织相容性抗原的研究有其意义所在。

移植物抗宿主病中次要组织相容性抗原作用的研究

移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植(HSCT)的主要并发症之一。近年的临床研究表明,GVHD与次要组织相容性抗原(mHAgs)有重要关系。本文综述mHAgs及其相关的研究进展。

次要组织相容性抗原

次要组织相容性抗原是一组由ＭＨＣ限制、Ｔ细胞特异性识别的细胞膜表面同种抗原。它们参与免疫应答，并且在骨髓移植中，与移植物被排斥及移植物抗宿主病有密切的关系。同时，在移植物抗白血病及移植物抗肿瘤（ＧＶＴ）效应中发挥重要作用。深入研究ＭｉＨＡｓ，对ＢＭＴ中供受体间的组织配型有重要意义，对防治肿瘤的发生、发展也起到一定的作用。

什么是次要组织相容性位点?——旧问题新看法

作者将次要组织相容性(H)位点的传统观念和对组织排斥过程的新理解以及次要组织相容性抗原的分子特征联系起来,认为应按激活不同T细胞亚群的能力把次要H位点分类,并就其起源、作用及在肿瘤免疫和自身免疫方面的应用进行了讨论.

次要组织相容性抗原

次要组织相容性抗原同主要组织相容性抗原(MHC)共同参与免疫反应,被 T 细胞所识别,并受 MHC 限制。目前已经确认次要组织相容性抗原是一种来源于细胞蛋白质的16个氨基酸的短肽。本文就其分子确认、识别、性质、遗传学和移植排斥反应等问题进行了综述。

次要组织相容性抗原13在胃癌中的表达及其与侵袭转移的关系

目的探讨次要组织相容性抗原13（ minor histocompatibility antigen 13, HM13 ）蛋白在胃癌组织中的表达情况及其与患者临床病理指标和预后的关系。方法应用免疫组化法检测90例胃癌及癌旁组织中HM13蛋白的表达，并分析其与胃癌患者临床病理指标及预后的相关性：qRT—PCR检测HM13干扰后下游基因血红素氧化酶1的表达改变。结果胃癌组织中HMl3的表达比癌旁正常组织中的表达降低，二者的高表达率分别为47％和61％，但差异无统计学意义（疋。=3．78，P=0．052）。HM13蛋白表达与胃癌TNM分期（X2＋=5．022，P=0．025）及远处转移（P=0．033）有关，而与患者年龄（X^2=0．832，P=0．362）、性别（X^2=0．779，P=0．378）、肿瘤大小（X^2=0．804，P=0．370）、分化程度（X^2=0．430，P=0．512）、大体类型（X^2=2．069，P=0．150）、浸润深度（X^2=0．167，P=0．683）及有无淋巴转移（X^2=0．396，P=0．529）无关。HM13蛋白低表达的胃癌患者比高表达胃癌患者的预后差（中位总生存期：15个月比54个月，X^2=6．456，P=0．0u；中位无进展生存期：13个月比48个月，X^2=6．742，P：0．009）。干扰HM13表达后血红素氧化酶1表达上调（0．532±0．013比0．395±0．011．t=13．93，P〈0．05）。结论HM13低表达与肿瘤的进展、转移及不良预后密切相关。

次要组织相容性抗原在介导GVL与GVHD分离中的作用及临床应用研究进展

在异基因造血干细胞移植中，次要组织相容性抗原（mHags）介导的异源性免疫反应在移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗白血病（GVL）中起重要作用。局限性表达于造血细胞起源细胞表面的mHags可以增强GVL效应而不增加GVHD风险，其是实现GVL与GVHD效应的分离理想靶抗原。随着mHags发现数量的增多，基于mHags的免疫治疗有望成为造血干细胞移植后复发白血病治疗的新方法。本文对近年来mHags在介导GVL与GVHD分离中的作用及临床应用研究进展作一综述。

非HLA抗体相关肾移植排斥反应的研究进展

人类白细胞抗原(HLA)是由HLA基因复合体所编码的产物,定位于6号染色体短臂上,是异体免疫的主要靶点,但HLA抗体阳性并不能解释所有的肾移植排斥反应。非HLA抗体是同种异体肾移植中供者基因表达的产物,术中缺血-再灌注损伤、异体和自身免疫相互作用、细胞外囊泡的介导作用等都可以触发免疫系统反应,促使非HLA抗体产生。多项研究表明非HLA抗体是诱发排斥反应、影响肾移植结局的重要因素。因此,本文就肾移植非HLA抗体类型及形成机制进行综述,总结非HLA抗体相关肾移植排斥反应的研究进展,以期为肾移植术后非HLA抗体相关排斥反应的研究提供参考。

异基因造血干细胞移植中GVHD与GVL分离策略

如何有效控制移植物抗宿主病的同时充分发挥移植物抗白血病的效应,这是造血干细胞移植领域的热点与难点问题。该文从供者淋巴细胞输注、调节性T细胞、NK细胞、DC细胞、间充质干细胞、次要组织相容性抗原、肿瘤疫苗等7个方面在这一领域的新进展作一述评。

华东地区汉族人群HB-1基因多态性的研究

目的:检测华东地区汉族人群HB-1基因的多态性,并与国外数据库进行比较。方法:采用直接测序法检测188例华东地区汉族正常个体全血标本中HB-1基因启动子、全部2个外显子及邻近的内含子区的多态性变化,所得结果与美国国立生物技术信息中心(NCBI)的SNP数据库(dbSNP)进行比较。结果:在188例正常样本中共发现6个SNPs,5个位于启动子,一个位于编码区,在dbSNP数据库中均已报道,但有6个数据库已报道的SNPs在本次研究中未能证实。结论:华东地区汉族人群HB-1基因多态性的分布与dbSNP数据库中的资料存在差异,为在华东地区汉族人群中研究HB-1基因相关疾病提供可靠数据。

检验DNA结构可改善骨髓移植供体的选择

对细胞表面抗原DNA结构的鉴别可能有助于提高骨髓移植合适供体的选择。尽管对骨髓移植的供体及受体进行了认真地匹配,但施行同胞兄弟姐妹骨髓移植的人中约30％的人发生严重的移植物抗宿主病。当供体的细胞毒素T淋巴细胞攻击宿主器官(诸如皮肤、肠和肝脏)时,这种疾病就会发生,并且可能致命。

孕妇及其子代ERAP-1基因多态性与子痫前期发生的相关性

目的:探讨孕妇及其子代内质网氨基肽酶1(ERAP-1)基因多态性与子痫前期(PE)发生的相关性。方法:采用病例对照研究方法,选择2018年10月至2021年10月于首都医科大学附属北京妇产医院住院分娩、发病孕周<34周的PE孕妇51例作为观察对象(PE组),选择同期正常分娩孕妇48例作为对照组。采集孕妇分娩前的静脉血和胎儿娩出后5 min内的脐血,采用二代测序技术检测孕妇及其子代ERAP-1基因的单核苷酸多态性(SNP)位点。使用单因素分析和多因素logistic回归分析对两组所有检测的SNP位点及基因型进行分析,筛选有意义的SNP位点及基因型。结果:(1)单因素分析筛选出孕妇ERAP-1基因的目的SNP位点共计13个,其中,96096828、96121524、96121715、96122260、96122281位点的基因型分布在PE组与对照组之间的差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,96121524位点基因型为TC的孕妇发生PE的风险是基因型为TT孕妇的2.002倍(95%CI为0.687~5.831,P=0.020)。(2)单因素分析筛选出子代ERAP-1基因的目的SNP位点共4个,4个位点的基因分布在PE组与对照组之间的差异均无统计学意义(P均>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,96121406位点基因型为AA的子代发生PE的风险是基因型为GG子代的0.236倍(95%CI为0.055~1.025,P=0.016)。结论:ERAP-1基因在孕妇96121524位点基因型为TC、在子代96121406位点基因型为GG可能是PE发生的影响因素。

内质网氨基肽酶1与子痫前期遗传易感性研究

目的探究内质网氨基肽酶1(endoplasmic reticulum aminopeptidase 1,ERAP1)是否为子痫前期发病的遗传易感基因,以及ERAP1参与子痫前期发病的分子机制。方法回顾性选择2018年9月至2021年4月在青岛大学附属医院、枣庄市妇幼保健院等6家山东省地级市三甲医院的990例子痫前期患者(病例组)和1240例健康孕妇(对照组)。收集所有孕妇的外周血样本,提取DNA,通过Taqman探针聚合酶链反应技术进行rs30187、rs27044及rs469783位点的基因分型;并在构建ERAP1野生型质粒的基础上使用点突变法构建2种错义变异质粒:rs30187(c.1583A>G)、rs27044(c.2188C>G),将不同的转染分子转染至Htr8细胞中,检测ERAP1的表达水平,并通过Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞增殖实验检测不同转染对细胞功能的影响,根据转染分子的不同,分为以下6组:敲低对照组、敲低组、过表达对照组、过表达组、变异1组及变异2组。采用两独立样本t检验、秩和检验和χ^(2)检验进行统计学分析。结果(1)rs30187位点的遗传学分布(基因型:χ^(2)=29.25;等位基因:χ^(2)=4.68)、rs27044位点的基因型分布(χ^(2)=28.95)、rs469783位点的遗传学分布(基因型:χ^(2)=7.01,等位基因:χ^(2)=6.45)在病例组和对照组间差异有统计学意义(P值均<0.05)。病例组中rs30187和rs27044位点均是隐性基因CC的频率更高(χ^(2)值分别为20.82和19.97,P值均<0.05),而rs469783位点的显性基因中CC基因型的频率更低(χ^(2)=5.82,P=0.016)。(2)细胞转染后,与敲低对照组相比,敲低组ERAP1的表达水平明显下降(mRNA:0.5±0.1与1.0±0.0,t=7.49;蛋白:0.4±0.1与0.7±0.1,t=2.81;P值均<0.05);划痕48 h后,敲低组细胞迁移率明显下降[(16.5%±1.8%)与(23.8%±2.4%),t=3.33,P=0.031];细胞培养24 h后,敲低组Transwell细胞数量明显下降(423.7±21.3与499.0±24.6,t=3.29,P=0.031)。转染变异1组和变异2组后,与过表达组相比,ERAP1的mRNA和蛋白表达也均明显下降,Transwell小室细胞穿过的数量明显下降,划痕48 h后细胞迁移率均表现出下降趋势[变异1组:P=0.004,变异2组:(21.1±4.6)%与(28.3±1.1)%,t=2.10,P=0.099]。转染过表达组至细胞后,与过表达对照组相比,ERAP1的mRNA和蛋白表达明显上升,细胞的增殖能力增强,细胞划痕48 h后迁移率升高,24 h穿过Transwell小室的细胞数量增多,细胞侵袭能力增强(P值均<0.05)。结论ERAP1基因rs30187、rs27044和rs46978与子痫前期易感性相关,rs30187和rs27044位点上子痫前期患者CC基因型携带者更多,而rs469783位点上健康孕妇CC基因型的携带者更多。ERAP1可能通过影响滋养层细胞的迁移侵袭能力参与子痫前期的发病。

产前诊断胎儿ZTTK综合征1例

本文报道了1例产前诊断的ZTTK综合征胎儿。孕妇因配偶染色体平衡易位,行胚胎植入前遗传学诊断。孕18周+取羊水细胞行染色体核型分析及基因组拷贝数变异测序均未发现异常。孕23周+5及孕26周+3超声检查显示严重胎儿生长受限、小脑发育异常、骶骨及尾骨显示欠清、脊柱裂,孕23周+6胎儿颅脑MRI显示胎儿双侧小脑半球体积小,大枕大池。对胎儿及其父母行全外显子组测序,结果显示胎儿SON 基因3号外显子存在1个杂合变异c.2092delG(p.Glu698fs*4),父母不存在该变异,为新发变异;该位点为致病性,关联疾病为ZTTK综合征。经遗传咨询,孕妇及家属选择终止妊娠。

miHA不合异基因骨髓移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立

目的 通过主要组织相容性复合物（MHC）相合,次要组织相容性抗原（miHA）不合的异基因骨髓移植,建立慢性移植物抗宿主病（cGVHD）小鼠模型,为cGVHD研究提供活体模型.方法 选择20只BALB/c（H2d）雌鼠为研究对象.将其分为空白对照组、放射对照组、移植对照组和cGVHD实验组,每组5只.除空白对照组外,其余各组小鼠均经直线加速器700 cGy的全身照射（TBI）.放射对照组照射后,经尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 mL;移植对照组输注miHA不合的B10.D2（Hc1 H2d H2-T18c）雄鼠骨髓细胞8×106个;cGVHD组输注骨髓细胞与脾细胞各8×106个.观察小鼠移植后造血重建、植入及一般状态.小鼠移植14d后每3d进行一次临床评分,50 d后处死,评估靶器官病理变化（实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准）.结果 移植对照组小鼠在移植后7d均获得造血重建,至实验结束（移植后50 d）全部存活,且染色体均为供者型.cGVHD实验组小鼠移植后20 d受累皮肤临床评分均＞0.6分;50 d时,皮肤、肝脏、肺的病理改变典型,病理评分明显高于对照组（F=88.02,P＜0.05）.结论 照射剂量为700 cGy,输注骨髓细胞数为8×106个、脾细胞数为8×106个的小鼠能成功诱导出cGVHD（造模成功）,可作为临床研究骨髓移植后cGVHD的理想模型.

HBxAg蛋白反式激活基因5的生物信息学分析及真核表达载体的构建

目的对HBxAg蛋白反式激活基因5(XTP5)进行生物信息学分析,并构建其真核表达载体。方法利用生物信息学软件对XTP5基因进行CpG岛、启动子活性、转录终止信号和氨基酸的一、二级结构以及信号肽、跨膜特性和功能基序进行预测。构建XTP5基因的真核表达载体pcDNA3.1-XTP5和pGBKT7-XTP5。结果生物信息学分析发现XTP5基因有200bp左右的CpG岛,有高启动子活性序列、转录终止信号位点,二级结构以Helix为主,存在信号肽的概率为0.0000A,无跨膜区域信号,存在数个功能基序。成功构建了XTP5基因的真核表达载体pcDNA3.1-XTP5和pGBKT7-XTP5。结论为深入研究XTP5结构和功能、进一步探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)发病机制创造了条件。

APOBEC3B介导的p53突变在NSCLC转移中的作用

目的 APOBEC3B(A3B)是载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(APOBEC)家族的重要成员,本课题旨在研究其在非小细胞肺癌(NSCLC)转移的重要作用。方法分析249例NSCLC组织中A3B表达与临床病理资料的统计学关系,Sanger测序法检测其中74例肺癌组织中p53第5、6、7、8号外显子突变情况,并在人肺腺癌细胞HCC827细胞中构建A3B过表达细胞系,观察细胞迁移能力的改变。结果与正常肺组织比较,A3B在NSCLC组织中高表达(P <0. 01),其表达与NSCLC淋巴结转移密切相关,且p53突变率与A3B表达呈正相关。体外实验发现,过表达A3B后细胞迁移能力增强,转移潜能增加。结论 A3B介导的p53突变可能在NSCLC转移中具有关键作用。