免疫亲和层析法分离纯化含次黄嘌呤核苷mRNA

采用免疫亲和层析法分离纯化含次黄嘌呤核苷的mRNA(I-mRNA)。将Poly-I与BSA交联,并用Poly-I-BSA交联体免疫家兔,获取抗次黄嘌呤核苷抗血清,斑点印迹法检测到该抗体滴度高、选择性强。将抗次黄嘌呤核苷抗体与蛋白ASapharose交联,并制备抗体亲和层析柱。将小鼠肺mRNA上样于层析柱,淋洗层析柱后,用洗脱液洗脱I-mRNA,并以斑点印迹法在洗脱液中检测到很强的I-mRNA阳性信号;淋洗液中I-mRNA阳性信号的强度则随淋洗液体积的增加而减弱。以上结果表明,应用本方法可以有效分离得到含次黄嘌呤核苷的mRNA。

HPLC 同时测定半夏药材中次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷的含量

目的:研究以 HPLC 同时测定半夏药材中次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷含量的方法。方法:采用 Kromasil C_(18)柱(4.6mm×150mm,10μm),以甲醇-水(1∶99)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),λ_1=248nm(检次黄嘌呤核苷),λ_2=254nm(检鸟嘌呤核苷),柱温30℃。结果:次黄嘌呤核苷在20-421ng 范围内线性关系良好,r=0.9999,鸟嘌呤核苷在40-339ng 范围内线性关系良好,r=0.9996。平均加样回收率(n=9):次黄嘌呤核苷为99.2%;鸟嘌呤核苷为99.7%。结论:本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为半夏药材质量控制的方法。

次黄嘌呤核苷酸和胶原蛋白与猪肉品质的关系研究

综合多个试验的资料 ,分析了不同猪的品种和杂交组合及不同营养水平下猪肉IMP和胶原蛋白含量及其与常规肉质性状的相关性。结果表明 ,约克猪的肌肉IMP含量极显著低于长荣猪、荣昌猪和长白猪 ,而胶原蛋白含量极显著高于长荣猪、荣昌猪和长白猪 ;荣昌猪和及其杂交猪的IMP含量明显高于长白猪 ;提高营养水平有提高猪肉IMP含量的趋势。提高瘦肉产量会极显著降低IMP含量 ,提高肌肉胶原蛋白含量 ;肌肉IMP含量与肉色呈显著正相关 ,与失水率呈极显著负相关 ;胶原蛋白与失水率呈极显著正相关 ,与IMP呈极显著的负相关。由此结论 ,提高肌肉IMP含量、降低胶原蛋白含量可改善猪肉品质 ;

山羊、藏系绵羊和黄牛肉中次黄嘌呤核苷酸含量比较

采用高效液相色谱法测定了乐至黑山羊、藏系绵羊和黄牛的背最长肌中次黄嘌呤核苷酸(Ionsine monophosphate,IMP,又名肌苷酸)的含量。结果显示,山羊和藏系绵羊的背最长肌中的IMP含量极显著高于黄牛(P<0.01),山羊的背最长肌中IMP含量不同程度地低于藏系绵羊(P<0.05),但用75%蚕沙或100%蚕沙替代精料的试验组与藏系绵羊差异不显著。初步研究表明,用蚕沙替代精料可能有助于山羊肌肉中IMP的合成。

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶对猪链球菌2型GN061215生物学特性及蛋白质表达的影响

为了了解次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)对猪链球菌2型GN061215致病力的影响机制,利用同源重组技术,敲除猪链球菌2型GN061215的impdh基因,重组后的GN061215命名为GN061215(△IMPDH),比较GN061215与GN061215(△IMPDH)培养特性、生化特性、致病力以及基因转录水平差异。结果显示impdh基因敲除后,引起GN061215生长曲线迟缓期延长,降低了GN061215生长曲线平台期OD600峰值,同时截短了GN061215菌株成链长度;GN061215、GN061215(△IMPDH)对46种代谢底物利用能力一致,对2种代谢底物利用存在差异;GN061215(△IMPDH)对Balb/c小鼠的致病力较GN061215菌株有一定程度的下降。SDS-PAGE显示GN061215(△IMPDH)菌体的粗提蛋白质条带较GN061215有显著减少;基因芯片比较GN061215、GN061215(△IMPDH)基因转录差异发现,下调基因中存在36个关联核糖体大、小亚基合成的基因,而在上调基因中不存在该类基因,表明impdh基因的丢失影响了GN061215菌株核糖体大、小亚基的合成,进而显著减少了GN061215菌株菌体蛋白质的表达,这可能与GN061215菌株毒力的下降有关。

次黄嘌呤核苷对S180荷瘤小鼠营养支持的调节作用

以要素膳做营养支持的S180小鼠40只,完全随机法分成用药组(次黄嘌呤核苷50mg·kg^(-1)/d)和对照组(等量安慰剂),观察以下各指标并倣统计学处理:荷瘤生存期限;肿瘤生长速度;血乳酸值及乳酸/丙酮酸比值;血氨基酸谱分析;瘤细胞匀浆中c-AMP值以及c-AMP/c-GMP比值等。结果提示次黄嘌呤核苷能提高营养支持的荷瘤机体对肿瘤竞争摄取营养的能力,从营养支持调节的角度产生抑瘤作用。

夏秋采收荆半夏中鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷的含量比较

目的建立RP-HPLC含量测定方法 ,比较夏、秋两季采收荆半夏有效成分鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷含量,为荆半夏药材选择最佳采收季节提供参考依据。方法选择HypersilC18色谱柱(250×4.6mm,5μm),以甲醇-水-0.4%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速0.5mL/min,检测波长λ=254nm,柱温30℃等色谱条件,测定荆半夏中鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷含量。结果鸟嘌呤核苷在3.84～30.72μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999;次黄嘌呤核苷在3.6～28.8μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999;平均加样回收率(n=9):鸟嘌呤核苷为103.71%,次黄嘌呤核苷为98.19%,表明该方法可靠性强。结论夏季采收荆半夏所含鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷的含量明显高于秋季采收荆半夏。

次黄嘌呤核苷酸二钠盐纯度标准物质的研制

采用市售次黄嘌呤核苷酸二钠盐为原料,经重结晶纯化后研制呈味核苷酸标准物质,用红外光谱法和质谱法对纯化后的次黄嘌呤核苷酸二钠盐样品进行定性鉴定,用高效液相色谱法对纯化的核苷酸进行定量分析。探讨了高效液相色谱法分析次黄嘌呤核苷酸二钠盐的分离和检测条件。试验发现有机溶剂可以显著改善次黄嘌呤核苷酸二钠盐的出峰时间,酸度和盐离子浓度可以显著改善色谱的分离度。采用多家实验室联合分析的方法对标准物质进行定值,研制的次黄嘌呤核苷酸二钠盐标准物质的纯度为99.75%,定值结果不确定度为0.32%(k=2)。

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布

参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列，设计引物，对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外，其他29个血清型都为阳性，其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％，所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶对猪链球菌2型ZY05719基因转录谱的影响

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)是猪链球菌2型的毒力相关因子,该基因的丢失降低了猪链球菌2型菌株ZY05719黏附HEp-2、PK15细胞的能力。为全面掌握IMPDH对ZY05719致病力的影响机制,采用定制的Agilent猪链球菌2型基因表达谱芯片,比较了亲本菌株ZY05719(ZY)和impdh敲除菌株(ΔZY)的基因转录情况。结果显示,impdh的丢失影响了254个基因的转录,其中包括impdh的下调基因177个,上调基因77个。对差异基因进行同类群聚类(Clusters of Orthologous Groups,COG)分析,显示差异基因主要集中于氨基酸、碳水化合物的转运代谢,以及核糖体、细胞壁、细胞膜的生物合成和防御机制。本研究较为全面地分析了impdh对猪链球菌2型基因转录谱的影响,为解释impdh在猪链球菌致病中发挥的作用提供了数据支持。

腹腔注射次黄嘌呤核苷酸对牙鲆非特异性免疫力的影响

为了研究腹腔注射不同浓度次黄嘌呤核苷酸对牙鲆(Paralichthys olivaceus)非特异性免疫力的影响,选取初始体重为22.4±3.6g的牙鲆幼鱼,用PBS配制浓度分别为0、0.05、0.1、0.5和1mg/mL的次黄嘌呤核苷酸注射液,每尾鱼腹腔注射0.1mL不同浓度的溶液,次黄嘌呤核苷酸的注射量为0、0.005、0.01、0.05和0.1mg/尾鱼。注射后第1周和第2周分离牙鲆头肾巨噬细胞测定非特异性免疫指标。试验结果表明,腹腔注射0.05mg/mL次黄嘌呤核苷酸显著增强了牙鲆巨噬细胞的呼吸爆发活力和吞噬活性(p<0.05),而腹腔注射次黄嘌呤核苷酸对牙鲆巨噬细胞增殖的影响差异不显著(p>0.05)。

霉酚酸酯对器官移植受者次黄嘌呤核苷酸脱氢酶活性的影响

霉酚酸酯（mycophenolate mofetil，MMF）作为一种高特异性的淋巴细胞抑制剂已广泛应用于各种实体器官的移植。MMF经胃肠道吸收入血并迅速水解为活性成分霉酚酸（mycophenolic acid，MPA），大部分MPA和血浆蛋白结合，少量以游离形式发挥免疫抑制作用。

以次黄嘌呤核苷酸脱氢酶为靶点的药物研发

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（ inosine 5＇-monophosphatedehydrogenase, IMPDH）是嘌呤生物合成的关键酶，它将次黄嘌呤核苷酸（IMP）氧化为黄嘌呤核苷酸（XMP），XMP在GMP合成酶的催化下生成GMP（图1）。

以次黄嘌呤核苷酸脱氢酶为靶点的抗病毒药物研究进展

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（ inosine monophosphatedehydrogenase, IMPDH）在1983年首次由Weber在增殖的癌细胞中发现，后续研究表明，IMPDH在细胞增殖中发挥着重要作用，它可以催化细胞内次黄嘌呤核苷酸（IMP）氧化生成黄嘌呤核苷酸（XMP），是细胞内鸟嘌呤核苷酸（GMP）从头合成途径的限速酶（图1）。

次黄嘌呤核苷合灯盏细辛注射液治疗眩晕症

笔者用次黄嘌呤核苷合灯盏细辛注射液治疗眩晕症40例，并与同期单用灯盏细辛注射液治疗40例患者对比观察，结果总结如下：

次黄嘌呤核苷对BGC-823人胃癌细胞株糖代谢调整作用观察

肿瘤细胞内酵解酶的活性增强，是造成其异常代谢和出现恶病质的主要原因，降低肿瘤细胞的酵解酶活性对纠正肿瘤细胞的异常代谢具有重要意义。本实验应用次黄嘌呤核苷对ＢＧＣ－８２３人胃癌细胞株作用，结果显示：次黄嘌呤核苷作用后，培养肿瘤细胞内的乳酸脱氢酶反应颗粒较对照组明显减少或消失，细胞数目减少，细胞结构改变。大剂量药物作用时，出现细胞变小及萎缩现象。结果表明，次黄嘌呤核苷可抑制ＢＧＣ－８２３人胃癌细胞株酵解酶的活性，阻断肿瘤细胞主要的能量来源，调整其异常糖代谢过程，并促进机体竞争代谢底物，从而改善肿瘤患者的恶病质状况。

多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸诱导下人外周血树突细胞的体外培养和快速成熟

目的:寻求一种快速稳定的方法从人外周血中诱导培养出成熟的树突细胞(DC)。方法:用密度梯度离心法从正常人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞,在0 h加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4),随后分四组继续培养:第一组在24 h加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I∶C)],继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h Poly(I∶C)组;第二组在24 h加入肿瘤坏死因子α(TNF-α),继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h TNF-α组;第三组在36 h加入Poly(I∶C),继续培养36 h,在72 h时收获DC细胞,即72 h Poly(I∶C)组;第四组在36 h加入TNF-α,继续培养36 h,于72 h收集DC细胞,即72 hTNF-α组。同时设立对照组,仅加GM-CSF和IL-4。结果:经流式细胞仪检测72 h Poly(I∶C)组获得的成熟DC细胞的百分比含量最高;混合淋巴细胞培养(MLC)表明72 h Poly(I∶C)组获得的DC细胞具有较强的刺激淋巴细胞增殖的能力。结论:Poly(I∶C)诱导下人外周血DC的体外培养与成熟的方法是具有快速、稳定、经济、简便的特点,为DC的深入研究和临床应用奠定了基础。

高强度运动对人体骨骼肌嘌呤核苷酸代谢的影响

高强度运动时腺嘌呤核苷酸代谢起着重要作用。高强度运动造成腺苷酸从肌肉中丢失，机体如何回补？运动员是否需要从食物中补充？这正是当前学者们研究的一个重要课题。

抗癌核苷类似物

综述了近年来核苷类抗癌药物的最新研究进展 ,分别介绍了具有抗癌活性的核苷类似物的作用机制和药物代谢机理、各种核苷类似物抗癌剂的分类、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶 (IMPDH)抑制剂以及核苷氨基磷酸酯前药的结构与抗癌活性关系 .