双酶偶联催化分光光度法测定血清次黄嘌呤

依据黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶催化反应的特征,研究了以黄嘌呤氧化酶-辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林为反应显色体系,建立了检测血清和组织中次黄嘌呤浓度的新方法。通过对该测定体系影响因素的考察,确定最佳反应条件为：黄嘌呤氧化酶（XO,EC1.2.3.22）0.32U·mL^-1,辣根过氧化物酶（HRP）7.0U·mL^-1,4-氨基安替比林（AAP）1mmol·L^-1,苯酚（PA）6mmol·L^-1溶于100mmol·L^-1 Tris-HCL缓冲液（pH8.3）;反应温度为37℃,保温时间为8min;检测波长为508nm。测定次黄嘌呤浓度的线性范围为0.2～3.0mmol·L^-1,线性关系良好（r=0.9979）,检测限为0.05mmol·L^-1。方法操作简单易行,测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和常规临床血液生化检测。