准噶尔乌头中4种生物碱在炮制过程中的含量变化

目的通过HPLC法测定准噶尔乌头Aconitum soongaricum Stapf.中4种生物碱的含有量,并研究其随炮制时间的变化。方法准噶尔乌头乙醚提取液的分析采用XBridge TM C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;以甲醇-水-氯仿-三乙胺（67∶33∶2∶0.1）为流动相,等度洗脱;体积流量0.8 m L/min;检测波长235 nm;柱温40℃。加热水煮法炮制该药材,比较各生物碱含有量随炮制时间（0~255 min）的变化。结果准噶尔乌头碱、12-表-欧乌头碱、乌头碱、脱氧乌头碱平均含有量分别为1.111 3、1.980 2、6.562 6、0.270 9 mg/g。随着炮制时间增加,乌头碱相对峰高变化最显著,脱氧乌头碱逐渐消失,准噶尔乌头碱以和12-表-欧乌头碱较稳定。在18 min和25 min出现了新色谱峰,无明显变化规律。结论准噶尔乌头中上述4种生物碱经过加热水煮炮制后均发生了水解,可达到减毒效果。

准噶尔乌头中3种生物碱对H9c2细胞的毒性研究

目的研究准噶尔乌头中3种生物碱(乌头碱、准噶尔乌碱、12-表-欧乌碱)对H9c2细胞的毒性作用。方法将H9c2细胞分为空白对照组、乌头碱组、准噶尔乌碱组、12-表-欧乌碱组,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测准噶尔乌头中3种生物碱对体外对数生长期H9c2细胞的抑制作用,计算细胞增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50);乳酸脱氢酶(LDH)漏出率对H9c2细胞的毒性作用;流式细胞术检测准噶尔乌头3种生物碱对H9c2细胞的总凋亡率。结果与空白组比较,乌头碱组、准噶尔乌头碱组、12-表-欧乌头碱组,细胞增殖抑制率指标升高,LDH漏出率指标升高,凋亡率指标升高,差异有统计学意义(P <0.05);对H9c2细胞的毒性作用(乌头碱>准噶尔乌碱>12-表-欧乌碱),IC50值分别为562.06、726.80、766.11μg/mL。结论乌头碱、准噶尔乌碱、12-表-欧乌碱3种生物碱对H9c2细胞具有毒性作用。

多裂乌头抗生育活性成分

多裂乌头为毛茛科乌头属植物Aconitum polysclhistum Hand-Ma22的块根,别名一枝蒿、三转半,本省西北地区也作铁棒锤使用。陕西西部部分地区民间,将原生药消毒后用以引产。我国学者从根中得到三种二萜类生物碱,定名为Polyschistine A、B、C,但未见其他化学成分和抗生育作用的研究报道。对采自本省甘孜藏族自治州的多裂乌头,证明对实验动物有抗生育活性后,采用提取分离与动物试验相结合,追踪得到有活性的两种生物碱,经元素分析、IR、UV、MS和~1H-NMR测定,分别定为准葛尔乌头碱(songorine,Ⅰ)和欧乌头碱(napeline,Ⅱ)。将Ⅰ、Ⅱ分别制成盐酸盐。

基于指纹图谱结合化学计量法对乌头属藏药材榜那的多指标成分分析

目的建立常用乌头属藏药材榜那的指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为多基原药材的质量标准制定和临床安全用药提供参考。方法采用HPLC建立榜那药材的指纹图谱并进行相似度评价;测定30批榜那药材中7种生物碱成分含量,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)评价榜那药材的2种不同基原植物的生物碱成分的差异。结果建立的指纹图谱确认17个共有峰,指认出12-表-欧乌头碱、雪上一枝蒿庚素、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、3-乙酰乌头碱7个色谱峰。基于相似度分析,铁棒锤和伏毛铁棒锤种内化学指纹图谱均一,种间指纹图谱存在一定差异。PCA和OPLS-DA结果表明铁棒锤和伏毛铁棒锤2种基原物种在这7种化学成分含量上存在一定差异;且依据OPLS-DA和t检验分析结果可确定伏毛铁棒锤中主要差异成分12-表-欧乌头碱和乌头碱含量显著高于铁棒锤(P<0.01)。结论本实验所建立的指纹图谱和多组分定量分析方法简便、易操作、信息量大,可用于榜那药材的质量和临床用药安全性控制;有必要建立和完善榜那的双酯型生物碱限度测定。

藏族药榜那生物碱成分对骨关节炎大鼠的治疗作用及其机制探究

该研究主要探讨了藏族药榜那生物碱成分体外和体内对骨关节炎(OA)大鼠的治疗作用及其相关机制。从2~3周SD雄性大鼠中分离软骨细胞,通过脂多糖(LPS)诱导软骨细胞构建体外关节炎损伤模型,采用MTT实验考察榜那7种生物碱(12-表-欧乌头碱、宋果灵、苯甲酰乌头原碱、乌头碱、3-乙酰乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头碱)对软骨细胞的毒性影响,后将实验分为对照组、模型组(LPS 5μg·mL^(-1)诱导12 h)和给药组(LPS 5μg·mL^(-1)诱导12 h后给药孵育24 h)。通过Western blot分别检测各组细胞中炎症因子环氧合酶2 (COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的蛋白表达情况,采用免疫荧光染色分别检测各组细胞中基质金属蛋白酶13 (MMP-13)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原(collagenⅡ)、成纤维细胞生长因子2 (FGF2)的蛋白表达情况。体内实验利用碘乙酸钠制备了大鼠骨关节炎模型,通过免疫组化检测各组大鼠软骨组织中MMP-13、TNF-α及FGF2的表达情况。结果显示,榜那中的7种生物碱成分在一定剂量范围内可使软骨细胞的存活率达到90%以上;Western blot结果显示,与模型组相比,乌头碱、12-表-欧乌头碱、宋果灵、3-乙酰乌头碱、新乌头碱可降低炎症因子COX-2、iNOS、TNF-α、IL-1β的蛋白表达;免疫荧光结果显示乌头碱、12-表-欧乌头碱、新乌头碱可抑制MMP-13的表达,上调aggrecan、collagenⅡ的表达;此外,与模型组及其他榜那生物碱成分组相比,唯有12-表-欧乌头碱可显著上调FGF2的蛋白表达。因此,选用12-表-欧乌头碱进行体内动物实验,免疫组化结果显示,与模型组相比,12-表-欧乌头碱可明显降低软骨组织中MMP-13和TNF-α的表达,上调FGF2的表达。该研究结果表明,在7种榜那生物碱成分中,12-表-欧乌头碱可通过下调MMP-13和TNF-α的表达,并上调FGF2的表达促进了大鼠骨关节炎损伤的修复。