欧亚旋覆花总黄酮提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:研究欧亚旋覆花总黄酮提取物(TFIB)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:实验分为6组,即假手术、模型、金纳多及TFIB高、中、低剂量组。对各组大鼠进行神经功能评分,采用TTC染色法测定脑梗死体积、HE染色法观察脑组织形态学变化、黄嘌呤氧化酶法测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥法测定丙二醛(MDA)含量、双波长荧光分光光度法检测大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化。结果:与模型组比较,TFIB高、中剂量组神经功能评分显著降低(P<0.01);TFIB高、中剂量组缺血再灌注损伤后脑梗死体积显著减小(P<0.01);TFIB高、中剂量组神经细胞变性坏死的病理变化显著改善;TFIB高、中剂量组大鼠血清SOD活力显著增强,MDA含量显著降低(P<0.01);TFIB高、中剂量组胞浆Ca2+浓度显著降低(P<0.01)。结论:TFIB对脑缺血再灌注损伤有显著的保护作用,其作用机制与抑制并减少体内脂质过氧化物的产生、增强机体抗氧化活性有关。

高效液相色谱-质谱联用鉴定黄芩总苷元提取物中黄酮类成分

目的:使用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF/MS)技术,分离鉴定黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分,并总结其裂解规律。方法:采用岛津LX-20210330-01 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸为流动相A,甲醇-乙腈(50∶50)为流动相B进行梯度洗脱,对黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分进行分离,利用电喷雾离子化-四极杆-飞行时间串联质谱高分辨测定各成分母离子及其子离子的准确质量,结合电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱信息和色谱保留时间进行结构鉴定。结果及结论:除了黄芩素和汉黄芩素两个已知成分外,从黄芩总苷元提取物中共鉴定出31种黄酮类成分,包括12种苷类与19种苷元,其中有3个化合物为本研究首次鉴定,并分析归纳了黄酮类成分在电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱碎片裂解规律。

欧亚旋覆花不同溶剂提取物总多酚、总黄酮含量及还原能力测定

目的测定欧亚旋覆花4种不同溶剂提取物的总多酚含量、总黄酮含量和体外抗氧化活性。方法以没食子酸为对照品采用福林-酚试剂法测定欧亚旋覆花提取物中总多酚的含量,采用可见-紫外分光光度法以芦丁为对照品测定欧亚旋覆花提取物中总黄酮的含量,通过测定DPPH自由基清除率、氢氧基清除率和还原能力来评价欧亚旋覆花提取物的抗氧化活性。结果在4种欧亚旋覆花不同溶剂提取物中,总黄酮含量从高到低的顺序为乙酸乙酯提取物(IAEE)>正丁醇提取物(IBE)>石油醚提取物(IPEE)>氯仿提取物(ICE);总多酚含量从高到低的顺序为IBE>IAEE>IPEE>ICE。欧亚旋覆花提取物还原能力从高到低的顺序为IAEE>IBE>IPEE>ICE,与总黄酮含量顺序一致。结论欧亚旋覆花正丁醇提取物总多酚含量最高,欧亚旋覆花乙酸乙酯提取物总黄酮含量最高且具有很强的还原能力。

欧亚旋覆花总黄酮提取与富集工艺研究

为研究欧亚旋覆花总黄酮的最佳提取与大孔吸附树脂富集工艺,采用不同溶剂、多种提取方法、L9(34)正交实验优化及AB-8大孔吸附树脂富集,结果表明其最佳提取工艺为用10倍量水为溶剂回流提取3次,每次1h,再结合AB-8大孔吸附树脂富集,以70%乙醇洗脱效果最佳,总黄酮回收率达90%,总黄酮含量达50%以上。此工艺简便可行,符合工业化生产要求。

基于自噬抑制剂3-MA介导的大叶蛇葡萄总黄酮提取物对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝细胞L-02,采用MTT法优选敏感细胞株;通过TFE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)联合运用,采用MTT法检测其对敏感细胞增殖的抑制作用;透射电子显微镜及Hoechst 33258单染法观察细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和通路蛋白(死亡受体途径、线粒体途径、内质网应激途径)的表达水平;免疫荧光法检测线粒体途径关键蛋白Cyt-c表达,并选择自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RA)进行反向验证。结果TFE可浓度依赖性抑制人乳腺癌细胞增殖,MCF-7细胞为敏感细胞株,与TFE组相比,TFE+3-MA组在24、48、72 h对MCF-7细胞的抑制率均明显增加(P<0.01),细胞数量减少、间隙增大,凋亡小体增多,凋亡率升高(P<0.01),Bax/Bcl-2(P<0.01)、cleaved caspase-3(P<0.01)、Cyt-c(P<0.05)、FADD、cleaved caspase-12的表达量均升高,核内凋亡蛋白Cyt-c表达增加;TFE+RA组荧光减弱,逆转了TFE诱导的线粒体途径凋亡。结论TFE能明显抑制人乳腺癌细胞的增殖,抑制自噬时可能通过线粒体途径促进MCF-7细胞凋亡,激活自噬可逆转细胞凋亡。

基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

黄桷树叶总黄酮提取物对脓毒症小鼠肝、肺的保护作用研究

目的:了解不同浓度黄桷树叶总黄酮提取物(FLA)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠肝、肺损伤的保护作用。方法:将SPF级C57/6J雄性小鼠随机分成对照组(CON组)、LPS模型组(LPS组)、LPS + 40 mg/kg FLA组(LPS + FLA-L组)和LPS + 80 mg/kg FLA组(LPS + FLA-H组),每组6只。适应性喂养一周,再分别灌胃生理盐水和不同浓度FLA一周后,CON组腹腔注射PBS缓冲液,其余组均腹腔注射10 mg/kg LPS诱导建立脓毒症小鼠模型,腹腔注射12小时后进行血清和肝、肺组织的收集。ELISA检测血清中炎症因子IL-6和TNF-α的含量;HE染色观察肝、肺组织的病理情况;试剂盒检测血清ALT和AST水平;RT-qPCR检测肝、肺组织中炎症因子水平。结果:LPS + FLA-L组和LPS + FLA-H组均能逆转LPS导致的血清促炎因子IL-6 (从507.00 ± 121.43降至348.46 ± 87.65和310.13 ± 68.62 pg/ml)和TNF-α (从364.60 ± 68.60降至245.22 ± 58.94和192.14 ± 35.85 pg/ml)的升高(n = 4, P 0.05)。结论:黄桷树叶总黄酮提取物能有效改善LPS诱导的脓毒症小鼠炎症失衡和肝、肺损伤。

气相色谱法测定葛根和淫羊藿总黄酮提取物中大孔树脂有机残留物

目的:建立葛根和淫羊藿总黄酮提取物中大孔吸附树脂7种有机残留物的含量测定方法。方法:采用气相色谱法,DB-1毛细管柱(柱长为60 m,内径为0.25 mm,膜厚度为1.0μm),柱温为程序升温,起始温度为40℃,再以4℃/min升温至175℃,保持12 min,用氢火焰离子化检测器检测,检测器温度250℃,进样口温度200℃;载气为氮气,流速为0.8 mL/min,分流比为20∶1,顶空进样,顶空瓶平衡温度为90℃,平衡时间为50 min。结果:7种有机溶剂残留物的峰面积与浓度呈良好线性关系,正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、1,2-二乙基苯的平均回收率分别为101%、90%、87%、85%、84%、76%、79%。结论:该方法测定准确度高、精密度重复性好。

正交设计研究杭白菊总提取物及总黄酮提取工艺

目的 :确定杭白菊总提物、总黄酮的提取工艺条件。方法 :采用正交试验法 ,以浸膏得率和总黄酮含量为考察指标 ,对杭白菊的超声提取条件进行优选。结果 :所考察的因素中 ,杭白菊的提取工艺影响程度为 :提取次数 >溶剂浓度 >超声时间 >溶剂量。结论 :超声提取的最佳条件为 :A2 B3 C3 D3 。与常规的提取方法相比 ,具有提取时间短、简单、收率稳定。

近红外漫反射光谱法直接测定银杏叶提取物粉末中总黄酮的含量

目的:应用近红外漫反射光谱技术和化学计量学方法,直接测定银杏叶提取物粉末中总黄酮的含量。方法:收集不同含量分布的银杏叶提取物粉末样品,以HPLC法测定其总黄酮的含量,并采集其近红外漫反射光谱数据。应用主成分分析法(PCR)、偏最小二乘法(PLS)、改进偏最小二乘法(MPLS)等回归模型对HPLC测定的结果与近红外漫反射光谱数据进行回归,经内部交叉验证,建立校正模型,进而对预测集样品进行分析。结果:MPLS建立的校正模型的准确性最佳,其预测决定系数(RQS)为0.977。对预测集样品进行外部验证,预测值与真值的相关系数(r2)达0.973,样品回收率为96.15%～102.0%,RSD为1.1%。结论:建立了一个利用近红外漫反射光谱法直接测定银杏叶提取物粉末中总黄酮含量的新方法。该方法具有快速方便、结果准确的特点,可以应用于银杏提取过程的中间控制和大批量产品的检测。

黄芩总黄酮提取物的HPLC-MS/MS分析

目的:探讨应用液相色谱-质谱联用技术鉴定黄芩总黄酮提取物各组分的方法。方法:选用Discovery C_(18)柱,以甲醇-水-甲酸(40:60:0.025)为流动相,经紫外(波长为335 nm)检测后,在电喷雾串联质谱负离子扫描方式下,对HPLC-UV图谱中各色谱峰进行一级和二级质谱分析。结果:经与对照品相比较,鉴定了提取物中4个已知的黄酮类化合物,推断了3个未知黄酮苷类化合物可能的结构。结论:该方法可用于快速分析鉴别天然产物提取物中已知和未知化合物的结构。

枳实总黄酮提取物中柚皮苷和新橙皮苷的大鼠药代动力学

研究大鼠灌胃给予含相同剂量枳实总黄酮提取物、柚皮苷、新橙皮苷和柚皮苷-新橙皮苷后柚皮苷与新橙皮苷在大鼠体内的药代动力学。将SD大鼠随机分为4组,分别灌胃给予枳实总黄酮提取物(80 mg/kg)、柚皮苷(32 mg/kg)、新橙皮苷(27.2 mg/kg)、柚皮苷-新橙皮苷(柚皮苷32 mg/kg和新橙皮苷27.2 mg/kg),利用葡萄糖醛酸酶对血样进行预处理,采用LC-MS/MS法测定血浆中总苷元柚皮素及橙皮素,间接比较4组中柚皮苷和新橙皮苷的药代动力学。结果表明,枳实总黄酮提取物组中柚皮素和橙皮素的AUC0-t、cmax显著性高于柚皮苷单体组、新橙皮苷单体组,与柚皮苷-新橙皮苷组的主要药代动力学参数无显著性差异;柚皮苷-新橙皮苷组中柚皮素和橙皮素的AUC0-t、cmax较柚皮苷单体组、新橙皮苷单体组均有所增加,但增加程度低于枳实总黄酮提取物组。大鼠灌胃给药后,枳实总黄酮提取物中柚皮苷与新橙皮苷存在相互促进吸收的作用,而枳实总黄酮提取物中其他成分协同促进两者的吸收。

银杏叶提取物中总黄酮测定方法的研究

研究了银杏叶黄酮醇甙灌注色谱（ Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）测定方法。该方法采用外标定量法，使用ＹＷＧ－Ｃ１８反相柱，确定了较好的测定条件为：流动相甲醇－０．５％磷酸水溶液（６０／４０，ｖ／ｖ），流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长３６０ｎｍ。槲皮素浓度与峰面积呈线性关系的范围为１０～１８０μｇ／ｍｌ。平均回收率为９７．５％，ＲＳＤ为０．６７％。实验表明，黄酮醇甙水解经放置后，槲皮素含量下降，山奈酚含量上升，异鼠李素含量变化不明显，总黄酮醇甙含量呈下降趋势。

黄芪提取物与红花总黄酮配伍对急性血瘀大鼠血液流变学的改善作用

目的观察黄芪提取物(EAM)与红花总黄酮(ECT)配伍对急性血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响。方法大鼠随机分为正常对照、急性血瘀模型、阳性对照阿司匹林100 mg·kg-1,EAM400 mg·kg-1,ECT 200 mg·kg-1,EAM 400 mg·kg-1+ECT 200 mg·kg-1组。每天早晚各给药1次,共7次。第5次给药后,大鼠sc给予肾上腺素加冰浴制备急性血瘀模型。锥板法测定全血黏度和血浆黏度;微量毛细管法测定血细胞比容(Hct);光电比浊法测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集;光电电磁法测定凝血参数。结果与正常对照组相比,模型组大鼠全血黏度和血浆黏度升高,红细胞聚集指数和血小板最大聚集率显著增加,Hct显著升高,纤维蛋白原(Fib)含量显著增加,凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)均显著缩短(P<0.01)。与模型组相比,单独应用EAM和ECT均能显著降低全血黏度及血浆黏度,明显降低Hct、红细胞聚集指数和血小板最大聚集率,其中EAM还能显著降低Fib含量,延长APTT和TT;ECT还能显著延长PT。与单独应用EAM或ECT相比,EAM与ECT配伍能进一步改善血液流变学指标,在延长TT上优于单用ECT(P<0.05),对血小板最大聚集率的抑制作用优于单用EAM或ECT(P<0.05)。与阿司匹林相比,单用EAM或ECT抑制血小板聚集的作用不及阿司匹林,但EAM降低Fib的作用较好,ECT延长PT的作用较好;EAM与ECT配伍对血液流变学的改善作用与阿司匹林相似。结论 EAM和ECT单用能显著改善血瘀模型大鼠血液流变学指数,且二者配伍后能增强对血瘀模型大鼠血液流变学的改善作用。

青天葵4种提取物抗氧化活性与其总黄酮和总酚含量的相关性

目的考察青天葵Nervilia fordii(Hance)Schltr.氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇提取物抗氧化活性与其总黄酮和总酚含有量的相关性。方法 Al Cl3-HAc-Na Ac显色法和福林-酚比色法分别测定青天葵4种提取物中总黄酮和总酚含有量,通过测定DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、还原能力评价提取物抗氧化活性,SPSS17.0软件分析抗氧化活性与2种成分含有量的相关性。结果青天葵4种提取物的抗氧化活性均呈量效关系,乙酸乙酯提取物最强,而乙醇提取物最弱。其与总黄酮含有量有一定相关性(0.604<r<0.638),与总酚含有量相关性显著(r>0.977)。结论青天葵乙酸乙酯提取物可用于天然抗氧化剂开发,总酚含有量是影响其抗氧化活性的主要因素。

银杏叶提取物总黄酮紫外分光光度法含量测定的适应性研究

目的建立适应银杏叶提取物总黄酮含量的紫外分光光度测定法。方法比较亚硝酸钠–硝酸铝–氢氧化钠、三氯化铝、盐酸-镁粉、硼酸–柠檬酸、三乙胺5种显色法在350～700 nm波长扫描图谱,分析不同显色方法对银杏叶提取物总黄酮含量测定的适应性。结果三氯化铝显色法在0.0898～0.9878 mg/mL范围内与吸光度(A)线性关系良好,回归方程为y=903.81x+9.6181,r=0.9991,加样回收率为99.3%,RSD=1.5%。样品中总黄酮含量为199.8 mg/g。结论该方法简便、快速、可靠、重复性好,可以适用于银杏叶提取物总黄酮含量测定。

罗布麻叶总黄酮提取物促进小鼠抗抑郁基因CREB、BDNF的表达

罗布麻是中国药典收录的传统中药,本研究提取它的主要有效成分罗布麻总黄酮,采用经典抗抑郁评价模型小鼠强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮进行抗抑郁活性评价。试验中给小鼠罗布麻叶总黄酮提取物25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg后,观察罗布麻叶总黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的影响,结果显示罗布麻总黄酮提取物能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间(P<0.05),药效与氟西汀相似,表明罗布麻具有明显的抗抑郁活性。在此基础上,应用皮质酮损伤的PC12细胞模型,采用荧光相对定量RT-PCR法检测罗布麻对皮质酮损伤的PC12细胞中脑内脑源性神经营养因子(BDNF)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达水平的影响。结果表明,皮质酮处理后PC12细胞中BDNF、CREB基因的表达量最低,罗布麻处理后,表达量显著增加,较处理前增加了近十倍,且呈剂量依赖性。本研究结果提示罗布麻抗抑郁机制可能是通过(AC-cAMP-CREB)信号通路促进BDNF、CREB的基因表达而发挥的。

芹菜提取物中总黄酮含量测定

目的 检测芹菜提取物中总黄酮含量 ,为以芹菜提取物为原料的保健食品质量控制提供依据。方法 分别用芦丁和槲皮素作为标准品 ,分别采用比色法检测芹菜提取物中的总黄酮含量 ,并比较了两种方法的回收率。结果 以芦丁为标准品时 ,芹菜提取物中总黄酮含量为 1 0 5 % ,回收率为 10 2 % ,以槲皮素为标准品时总黄酮含量为 1 11% ,回收率为 99 5 6 %。结论 测定芹菜提取物总黄酮的两种方法均简便可行 ,重现性好。

欧亚旋覆花总黄酮通过抗氧化作用降低衰老大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的改善效果及其机制。方法用D-半乳糖(D-galactose)诱导大鼠BMSC建立衰老细胞模型,采用(12.5、25、50)μg/m L IBFTF处理BMSC。CCK-8法检测细胞增殖,试剂盒测定过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测BAX、Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平。结果衰老组细胞的增殖率、SOD和CAT活性较对照组明显降低,而不同剂量的IBFTF促进D-Gal诱导的衰老细胞的增殖、增加SOD和CAT活性。衰老组的凋亡细胞比例、ROS含量、MDA水平、BAX/Bcl-2比值和c-caspase-3的蛋白表达量增加,而用不同浓度IBFTF治疗可显著降低衰老大鼠BMSC的凋亡、ROS的生成、MDA水平、BAX/Bcl2比值和c-caspase-3的蛋白水平。结论 IBFTF通过增强抗氧化作用减少衰老大鼠BMSC的凋亡。