欧洲葡萄VvJAZ9基因互作蛋白的筛选与验证

【目的】探究葡萄JAZ家族基因特点及在低温胁迫下的表达情况,以期筛选出与低温胁迫相关的家族成员,并进一步筛选其互作蛋白,为后续葡萄抗寒机制研究提供理论依据。【方法】以拟南芥和葡萄基因组数据为基础,获得葡萄JAZ家族成员基因并进行同源克隆、染色体定位、理化性质以及蛋白家族聚类等分析,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术分析VvJAZ家族成员基因在低温胁迫下的表达情况,应用酵母双杂交技术进行互作蛋白筛选和验证,并通过双分子荧光互补试验验证候选互作蛋白与VvJAZ9蛋白的互作关系。【结果】葡萄中有11个JAZ家族基因,随机分布于7条染色体上,都具有JAZ家族蛋白中特有且高度保守的TIFY和Jas结构域,均属于碱性不稳定亲水蛋白;聚类分析表明,葡萄JAZ家族蛋白可分为3个亚族,其中VvJAZ9与拟南芥AtJAZ1和AtJAZ2的亲缘关系最近,VvJAZ1与VvJAZ11、VvJAZ5与VvJAZ6同源关系最近。qRT-PCR结果表明,VvJAZ9是葡萄JAZ家族成员基因中受低温诱导表达最为明显的1个基因。通过酵母双杂交试验筛选获得26个可能与VvJAZ9存在互作关系的候选蛋白;通过q RT-PCR分析候选蛋白的相关基因在低温胁迫下的表达模式,结果表明HAP5A基因受低温诱导表达趋势与筛选出的VvJAZ9基因类似,推测HAP5A可能是JAZ9候选互作蛋白中响应低温最为显著的1个蛋白;通过同源克隆获得了VvHAP5A基因序列,全长636 bp,编码211个氨基酸,进一步分析发现该基因是NF-YC类型的转录因子,通过酵母双杂交和双分子荧光互补试验也证实了JAZ9与HAP5A蛋白全长有互作关系。【结论】鉴定并克隆到了葡萄的11个VvJAZs基因,VvJAZ9和VvHAP5A基因均响应葡萄低温诱导表达,并且二者还具有蛋白互作关系,可为进一步研究葡萄JAZ基因参与低温胁迫的机制提供参考。

欧洲葡萄VvCAX基因家族的鉴定与表达分析

CAX(Ca^(2+)/H^(+)exchanger antiporter)是一类重要的阳离子转运蛋白,在植物生长发育和抵抗非生物胁迫中至关重要。通过生物信息学分析的方法,从欧洲葡萄中共鉴定出5个VvCAX基因,根据其在染色体上的位置依次命名为VvCAX1—VvCAX5,进行了包括理化性质、二级结构、三级结构、跨膜结构域、基因结构、保守基序、系统进化树等分析。结果表明,VvCAX基因家族成员均为疏水蛋白,主要定位于质膜和液泡,包含10~11个跨膜结构域和4个典型的功能域,α-螺旋和无规则卷曲在二级结构中占据主要位置,所有成员三级结构非常相似且均为单体。系统发育分析将VvCAX分为2个亚家族,同一亚家族的VvCAX结构相似,不同亚家族VvCAX的保守基序有差异,且7对VvCAX基因在进化过程中发生了基因的片段复制事件。VvCAX的互作蛋白主要与钙离子转运、钙离子通道和离子转运相关。上游调控因子和启动子顺式作用元件分析结果表明,VvCAX基因可能通过MYB、ERF等转录因子的调控参与激素和胁迫响应,这一推论经表达模式分析得到了验证。通过不同胁迫下的表达分析发现,所有VvCAX基因的表达水平均受ABA的影响,ⅠA亚家族的成员响应创伤、霜霉菌、干旱和低温,而ⅠB亚家族的成员主要与高温有关,ⅠA亚家族的VvCAX基因更有研究价值。

欧洲葡萄栽培和酿酒在中国的传播

欧洲葡萄(Vitis vinifera L．)栽培和酿酒引入中国西部的时间是在西汉以前,引入中部地区的时间是在西汉。引入的路线是从中亚到汉代西域,再至都城长安,然后逐渐向东部地区传播,先至河南、山西,之后扩散至河北、山东以及其他地区。中国古代人民培育出许多著名的葡萄品种,采用了独特的葡萄栽培方式。自然发酵的葡萄酒基本上是在西域地区生产,广大的中东部地区很少采用这种技术。自然发酵在东部广泛应用的时期是元代,中国现代葡萄栽培和酿酒技术始于1892年。目前,欧洲葡萄栽培和酿酒已成为我国新疆、山东、河北等地农业和轻工业中的重要组成部分。

欧洲葡萄的质量标准研究

目的建立欧洲葡萄中齐墩果酸的薄层色谱鉴别方法和含量测定方法。并测定不同产地的欧洲葡萄中齐墩果酸的含量。方法采用薄层色谱法(TLC)鉴别,并采用高效液相色谱(HPLC)法测定其含量。结果测得欧洲葡萄中齐墩果酸含量为0.36%以上,平均回收率为98.33%,相对标准偏差RSD为1.59%。结论该方法操作简便,结论可靠,可用于欧洲葡萄的质量控制。

欧洲葡萄花翅小卷蛾性信息素7E,9Z-十二碳二烯乙酸酯的简便合成

欧洲葡萄花翅小卷蛾的性信息素主要成分为7E,9Z-十二碳二烯乙酸酯。从1,5-二溴戊烷出发,制成格氏试剂后与甲醛发生格氏加成反应得到1,7-庚二醇,单酯化得到7-羟基庚醇乙酸酯,氧化得到7-氧代庚醇乙酸酯,与(2,2-二甲氧基乙基)三苯基溴化膦进行Wittig反应并水解得到9-氧代-7E-壬烯乙酸酯,再与正丙基三苯基溴化膦进行Wittig反应合成了7E,9Z-十二碳二烯乙酸酯,总产率13%,其结构经1H NMR和13C NMR确证。

欧洲葡萄的引种初选

2 0 0 1年由德国引入欧洲葡萄品种 46个进行繁殖选育。通过 3年的试验观察 ,初选出较有发展希望的超诺、繁荣两个中熟鲜食优良品种和孔雀蓝、孔雀白两个优良加工品种。介绍了引选过程、栽培技术及4个品种的植物学特征、果实经济性状和物候期。

奥地利：欧洲葡萄园最后的净土 行走在奥匈帝国的边境线上

奥地利的旅行版图,一分为二,西边是到阿尔卑斯山南麓sking(滑雪)的游客,东边是属于葡萄园的人文之旅。这一次,我们不走寻常路,从维也纳出发,自北向南,一次跨越了5国边境。从奥地利到捷克,从斯洛伐克到匈牙利,最后到斯洛文尼亚,我们一直行走在国境线上,踏着昔日奥匈帝国的辉煌历史,听着边境线上关于对自由的追逐和对发展的渴望与向往的故事,透过葡萄酒,我们深入了一次前所未有的旅程.

葡萄VvJAZ9蛋白原核表达与多克隆抗体制备

JAZ蛋白是茉莉酸(JA)信号调控途径中的重要组分,也是调节JA参与植物生长发育以及逆境应答的关键因子。JAZ9基因是编码TIFY家族JAZs蛋白的基因之一。为研究欧洲葡萄VvJAZ9蛋白参与低温胁迫的功能,本试验以欧洲葡萄霞多丽叶片为研究材料,通过同源克隆获得了VvJAZ9基因序列,其全长807 bp,编码268个氨基酸,定位于第11条染色体,有5个外显子和4个内含子;VvJAZ9蛋白具有JAZs家族蛋白中特有且高度保守的TIFY和CCT_2结构域,与拟南芥AtJAZ1和AtJAZ2亲缘关系最近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果表明,VvJAZ9基因在低温处理1~24 h后表达量呈上升趋势,在24 h表达量最高。亚细胞定位结果证实VvJAZ9定位于细胞核。将VvJAZ9的开放阅读框(ORF)序列克隆至原核表达载体pET28b上,在大肠杆菌(E.coli BL21)中经37℃、1.0 mmol·L^(-1)异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得VvJAZ9-His融合蛋白,再经抗原免疫,血清纯化后制备anti-VvJAZ9兔源多克隆抗体。蛋白免疫印迹(Western Blot)结果表明,anti-VvJAZ9抗体可以特异性识别葡萄内源的JAZ9蛋白、VvJAZ9-MYC融合蛋白以及VvJAZ9-GFP融合蛋白等不同形式的JAZ9蛋白;同时,10μmol·L^(-1)MeJA处理下葡萄原生质体中JAZ9蛋白表达水平呈下降趋势。综上,本研究结果为葡萄VvJAZ9基因的生物学功能研究提供了基础。

意大利:欧洲首个对阿联酋出口葡萄的国家

意大利成阿联酋主要的欧洲葡萄供应国,每年对阿鲜食葡萄出口量达1000 t有余,其中无籽葡萄越来越受到当地消费者青睐。意大利果蔬服务协会(CSO)对意大利葡萄在阿联酋的推广活动给予了大力支持,开展了相应的促销项目,旨在提升新鲜果蔬文化,提高阿联酋民众对新鲜果蔬的消费意识。此类促销项目也得到了欧盟与其他意大利民间社会组织的支持,在美国也开展了相应的活动。

葡萄亚属间(V.vinifera×V.rotundifolia)杂种胚挽救成苗的研究

利用欧洲葡萄(V.vinifera)的无核品种与圆叶葡萄(V.rotundifolia)杂交的目的是将无核性状导入抗病的圆叶葡萄中以获得抗病无核葡萄新材料。本文利用无核材料P79-101(V.vinifera)与圆叶葡萄的３个株系杂交后，共产生102个杂种胚珠，这些胚珠经培养，有44个杂种胚得以继续发育，并获得胚挽救苗20株。经同工酶鉴定及植物形态特征分析，证明这20株苗中有19株为亚属间杂种苗。其中16株苗栽植于加州大学Fresno分校的试验田里。从败育的种子痕迹大小及浆果特点来看，其中C41-5株系属假单性结实的无核类型，它的果实比汤姆逊无核(Thompson Seedless)略小，是“黑可因”(Black Corinth)及C41-7果实的两倍。C41-5种子痕迹的重量比汤姆逊无核的大，但两者无显著差异；而C41-7发育完全的种子平均重量是C41-5种子平均重量的10倍。本文对V.vinifera×V.rotundifolia亚属间杂种胚成功的挽救进行了首次报道。

中国葡萄栽培的起始及演化

对中外考古资料研究表明,我国栽培欧洲种葡萄最早的地方是新疆塔里木盆地西、南部区域,推断该地栽培葡萄历史在2300～2400年以上;我国内地引种欧洲种葡萄时间不早于公元前119年;文章概述了葡萄在我国和新疆境内的传播和演化过程。

酿酒葡萄抗寒相关基因的研究进展

低温影响酿酒葡萄的生长,限制其果实品质及种植面积。土埋、冬灌、烟熏及建造防护林等方法被广泛采取并取得成效,但浪费人力物力,可能对葡萄造成人为损害。近年来,转基因技术发展迅速,抗寒转录因子、脱水素、单锌指结合蛋白、泛素连接酶等基因可以响应低温胁迫并促进其他相关抗寒基因的表达以提高转基因植物的抗寒性,因此研究抗寒基因并通过转基因技术定向改良葡萄的抗寒能力,对推进葡萄产业绿色发展具有重要意义。

论吉林省葡萄发展问题

本刊1985年第1期曾刊登顾模同志《对吉林省发展葡萄种植业的意见》一文,本期再发表何宁和赵保章两同志的文章。这三位同志都是我省从事果树研究工作多年的专家,他们对我省葡萄种植业发展问题提出的一些看法,对发展我省葡萄生产将有所裨益,值得一读。我们欢迎各地同志对我省葡萄发展问题继续发表意见,同时也欢迎对其它作物或其它领域的科学技术问题开展学术性讨论,以繁荣科学,并促进科学技术更好地面向经济建设。

智利:鲜食葡萄出口美国或更有利

智利每年的12月至次年5月向美国出口鲜食葡萄26万t,其干旱的阿塔卡马地区约占智利鲜食葡萄种植面积的15%。智利正寻求如何改善阿塔卡马、科昆博和瓦尔帕莱索等3个地区的市场准入。不过,新的系统监管方法将改变当前的熏蒸要求,即不必使用甲基溴(MB)熏蒸来减轻欧洲葡萄蛾(EGVM)的风险,从而使主产地的鲜食葡萄受益。熏蒸会显著降低水果的质量,缩短保质期,减弱水果的市场竞争力。2022年1月底,美国外交部率大使馆代表团参观了智利阿塔卡马地区科皮亚波市附近的葡萄园、包装厂和出口设施。

植物生长调节剂在葡萄保花保果中的应用

葡萄是一种色艳味美且富有营养的水果,深受人们喜爱。在全世界其栽培面积和总产量都较大。葡萄适应性很强,在我国大部分地区均有种植。栽培葡萄中主要有欧洲葡萄和美洲葡萄两大种。近年培育的欧美杂种葡萄如“红富士”“巨峰”“白香蕉”“玫瑰露”等品种,果实品质较好,接近欧洲葡萄,而且抗病性及抗.寒性强。但葡萄栽培中普遍存在落花落果现象,造成果实品质下降,产量降低,种植收益下降。

2016年度进口葡萄酒数据解读

2016年度进口葡萄酒数据完全出炉。经历了两年沉寂的＂盘整期＂之后,2015年强势回暖,2016年1季度延续迅猛增长势头,进口总量一举创了近五年来同期增速的新高。但第二季度增速开始大幅回落,第三季度降到全年最低点,最后一季度力挽狂澜,最终全年实现进口量增长14.9%,进口额增长15.9%,中国进口葡萄酒市场开始进入理性发展阶段。

卢瓦尔河谷葡萄农

巴黎几年的记者生涯中,在法国社会结识的人真不少,诸如政界要员、工商钜子、文化名人、平民百姓乃至流浪汉各色人等,我都打过交道。这里要介绍的是一位给我留下了深刻印象的普通的葡萄园主让一路易·沙杰。1994年夏,经一位朋友的引荐,我接受他的邀请,到法国西海岸边去参观并品尝他在“海底酒窖”里酿成的葡萄酒。

我国成功创建无核葡萄胚挽救育种技术体系

由西北农林科技大学主持承担的国家948项目“胚挽救技术体系建立及抗病无核葡萄新品系培育”研究,4月4日在陕西杨凌通过了农业部、陕西省农业厅和科技厅组织的验收和鉴定。 我国拥有丰富的抗病性野生葡萄资源。