饲料中添加胆汁酸对欧洲鳗鲡幼鱼肝脏脂肪代谢的影响

文章旨在研究饲料中添加胆汁酸对欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)幼鱼肝脏脂肪代谢的影响。将养殖欧洲鳗鲡幼鱼的9口水泥池[初始规格(141.5±1.9)g/尾;初始鱼重(682±23)kg/池]随机分为3个处理组,每组3口池,分别投喂基础饲料(对照组)、基础饲料添加500 mg/kg胆汁酸(BA1组)、基础饲料添加1000 mg/kg胆汁酸(BA2组)的饲料。实验期为15周。实验结果表明,BA组比对照组欧洲鳗鲡幼鱼肝脏组织中脂肪空泡数量明显减少,肝脏粗脂肪水平显著降低(P<0.05)。BA组欧洲鳗鲡幼鱼肝脏脂肪酸合成酶水平显著降低(P<0.05),仅BA1组乙酰辅酶A羧化酶水平显著降低(P<0.05),BA组肝脂酶、脂蛋白酯酶和总脂酶活性均显著升高(P<0.05);BA组间上述酶活性或水平均无显著差异(P>0.05)。BA1组欧洲鳗鲡幼鱼肝脏磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱水平上调,主要是甘油磷脂代谢和甘油酯代谢增强。由此可见,欧洲鳗鲡幼鱼饲料中添加胆汁酸可通过降低脂肪合成有关酶水平及增加脂肪分解有关酶活性,主要增强甘油磷脂代谢和甘油酯代谢,从而可减少肝脏脂肪蓄积。

欧洲鳗鲡寄生鳗鲡肤孢虫的超微结构和组织病理特征

为了完善鳗鲡肤孢虫(Dermocystidium anguillae Spangenberg,1975)形态学和组织病理学信息,进行扫描电镜和透射电镜观察,并研究该寄生虫对欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla Linnaeus,1758)鳃组织的病理损伤。扫描电镜观察显示:鳗鲡肤孢虫孢子呈球形,大小均一;大部分孢子处于同一发育时期,个别孢子处于二分裂阶段;孢子被表面一层网状物质包裹;部分孢子可观察到分裂时形成的芽痕,芽痕上有多个不规则的凹陷。透射电镜观察显示:鳗鲡肤孢虫具有电子疏松的细胞壁;孢子内有较大的遮光体,液泡、细胞核、脂质空泡等细胞器位于遮光体一侧。组织病理分析显示:鳗鲡肤孢虫在宿主鳃丝中形成大量孢囊,孢囊挤压周围鳃组织,导致鳃丝融合、鳃小片脱落;孢囊具有一层嗜酸性孢囊壁;孢囊周围可见明显的炎性细胞浸润。

恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在欧洲鳗鲡体内的代谢动力学

采用高效液相色谱法,研究药饵口灌给药途径下,恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)体内的药代动力学。欧洲鳗鲡口灌给药恩诺沙星10 mg/kg后,其血浆、肌肉和肝脏中药物时量曲线关系符合一级吸收的二室开放动力学模型。恩诺沙星在欧洲鳗鲡不同组织中分布较广,血浆、肌肉和肝脏的Vd分别为6.362 L/kg、8.081 L/kg和15.870 L/kg;恩诺沙星在鳗鲡体内消除较慢,在血浆、肌肉和肝脏中的消除半衰期(tβ1/2)分别为161.10 h、333.21 h和611.26 h,总体清除率(CLs)分别为27.4 mL/(kg.h)、16.8 g/(kg.h)和18.0 g/(kg.h)。代谢物环丙沙星在鳗鲡血浆、肌肉和肝脏中药物水平的变化趋势与恩诺沙星基本相似,呈现出多峰现象,但3种组织中环丙沙星出现第一个药峰时间分别为给药后第24小时、24小时和12小时,3种组织中环丙沙星峰值水平肝脏中最高、肌肉中次之、血浆中最低,环丙沙星在肌肉和肝脏中的消除速率比较缓慢。鉴于恩诺沙星和其代谢物环丙沙星在欧洲鳗鲡体内消除较慢,建议养成阶段使用其他药物。

欧洲鳗鲡“狂游病”血液生化指标研究

近年来,欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla L.)的养殖过程中常发生“狂游病”。发病前,出现食欲极为旺盛,异常抢食现象。数日后离群、不摄食、旋转式游动、侧游或在水面上挣扎状急游,数秒后沉入水底。

孔雀石绿及其主要代谢产物在欧洲鳗鲡肌肉中的蓄积及消除规律

为了解孔雀石绿及其有毒代谢产物无色孔雀石绿在鱼体中的蓄积与消除规律,达到对孔雀石绿的禁用监控,本试验对初始体重为(12.42±2.18)g的欧洲鳗鲡进行0.1 mg.L-1和0.2 mg.L-1浓度(P1和P2组)孔雀石绿药浴24 h,再转移到清水中养殖120 d,采用高效液相色谱法测定肌肉组织中孔雀石绿及无色孔雀石绿的残留。在药浴过程中,鳗鲡肌肉组织中孔雀石绿平均含量不断升高,P1和P2组分别于药浴12 h和24 h达到最高值(720.5±192.6)μg.kg-1和(1404.8±421.9)μg.kg-1;在清水养殖过程中,孔雀石绿在鳗鲡肌肉中含量波动式下降,并于水浴2160 h(90 d)时两个处理组都低于检测限度。肌肉中所含无色孔雀石绿,在药浴过程以及清水养殖的开始一段时间内不断升高,P1和P2组分别于水浴的72 h和120 h达到最高值(960.1±251.0)μg.kg-1和(1 625.8±183.2)μg.kg-1,然后呈波动式下降,至实验结束(水浴120 d)时两个实验组肌肉中还有一定残留。结果表明,无色孔雀石绿的代谢消除时间较长,可以作为检测的标志物。另外,不同浓度的孔雀石绿在鳗鲡肌肉中的代谢规律相似,只是随药浴浓度升高,肌肉中孔雀石绿和无色孔雀石绿含量最高值出现时间有所滞后,以及消除时间相对延长。

欧洲鳗鲡外周血细胞的显微和超微结构

利用光镜和透射电镜技术研究了欧洲鳗鲡 (Anguillaanguilla)外周血细胞的显微和亚显微结构。结果表明 :在外周血细胞中可区分出红细胞、单核细胞、大淋巴细胞、小淋巴细胞、嗜中性粒细胞和血栓细胞 ;嗜中性粒细胞内的特殊颗粒包括A、B、C三型 ;嗜中性粒细胞分为Ⅰ型粒细胞 (内含A、B、C三种特殊颗粒 )、Ⅱ型粒细胞 (内含A型和C型两种特殊颗粒 )和Ⅲ型粒细胞 (内含C型特殊颗粒 )。还见到幼稚的和正在分裂的红细胞和单核细胞 ,提示幼稚的红细胞能直接进入外周血流中。嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞无论在血涂片上或超薄切片上均未见到。描述了上述各种血细胞在光镜和电镜观察下的形态和细微结构。血栓细胞体积最小 ,嗜中性粒细胞体积最大 ;淋巴细胞数目最多 ,嗜中性粒细胞数目最少。

嗜水气单胞菌主要外膜蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护试验

制备出4株分属3个不同血清型嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白(MOMP)免疫刺激复合物(ISCOMs)亚单位疫苗,腹腔注射免疫欧洲鳗鲡,ELISA法测得免疫后第14d和第30d所采集的血清的平均抗体效价在1∶320—1∶1280之间。免疫印迹结果显示,在印迹膜上对应的位置均可检测到MOMP的主要蛋白条带。第40d的免疫保护试验表明,免疫欧鳗对TPS-30菌株约100倍半数致死剂量的攻击无免疫保护作用,其中的3组被测免疫欧鳗对TPS-30菌株约10倍半数致死剂量的攻击的免疫保护率皆在80%以上。上述试验结果提示,嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白是重要的保护性抗原,在制备成ISCOMs亚单位疫苗的情况下,较小的剂量免疫一次即可显示出较高的相对免疫保护率,且没有明显的血清型特异性。

欧洲鳗鲡血液某些生物化学指标的测定

以 1 1 4尾欧洲鳗鲡为材料 ,测定了血液中肌酸酐、血糖、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇、总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、乙酰胆碱脂酶、γ 谷氨酰转肽酶、钠、钾、钙、镁、氯化物、二氧化碳、无机磷等血液指标值。按统计学原理进行分析 ,并对总体正常值范围进行估计。获得了欧洲鳗鲡血液生理生化指标参考值。

欧洲鳗鲡皮肤、鳃及消化道粘液细胞的分布与类型

利用AB-PAS法(阿利新蓝过碘酸雪夫氏反应法),观察了欧洲鳗鲡皮肤、鳃及消化道粘液细胞的分布和类型。根据AB-PAS染色结果表明:欧洲鳗鲡皮肤表皮含有大量的粘液细胞,粘液细胞呈Ⅳ型细胞为主,仅见很少量的Ⅰ型细胞;鳃片、鳃丝表面粘液细胞有3种类型,即Ⅱ、Ⅲ型和Ⅳ型;食管上皮分布着大量粘液细胞,以Ⅲ型、Ⅳ型最多,Ⅱ型次之;胃贲门、胃体、胃幽门表面粘液细胞,AB-PAS染色只有Ⅰ型粘液细胞;肠道杯状细胞,肠前部主要含有Ⅰ型和Ⅳ型两种类型;肠中部含Ⅲ型和Ⅳ型两种类型,肠后部仅呈Ⅳ型。通过对各部位粘液细胞的分类和比较,可以看出粘液细胞的分布和类型与其所在部位执行的功能有密切的关系。

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析

创伤弧菌（Vibrio vulnificus）是一种革兰氏染色阴性、多形性、运动性、有荚膜的嗜盐性细菌,属于弧菌属第5群,主要生长于海水中、鱼类及贝母类等体内[1]。根据寄主范围和生化反应类型的不同,将创伤弧菌分为3个生物型：生物Ⅰ型（产吲哚）[2]、生物Ⅱ型（不产吲哚）[3]以及1999年以色列的研究人员报道的创伤弧菌生物III型。

复合酶制剂对欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)生长性能、消化酶及非特异性免疫的影响

选用540尾初重为(6.38±0.26)g的欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla),随机分为6个处理(每个处理3个重复,每个重复30尾鱼),分别投喂添加了0.05%(Diet 1)、0.10%(Diet 2)、0.15%(Diet 3)、0.20%(Diet 4)、0.25%(Diet 5)的复合酶制剂饲料,另增设基础饲料为对照组(Diet 0),研究复合酶制剂对欧鳗生长性能、消化酶活性及非特异性免疫的影响。6周投喂结果表明:随着复合酶制剂添加量的递增欧鳗增重率和特定生长率呈先增后降趋势,其中Diet 3组增重率和特定生长率分别比对照组提高了34.22%和26.36%(P<0.05),肝体指数及肥满度各组之间差异不显著(P>0.05);复合酶制剂降低了鱼体粗灰分含量,对鱼体含水量、粗脂肪及粗蛋白含量影响较小,均无显著差异(P>0.05);相比对照组各添加组鳗鱼肠道胰蛋白酶活性显著提高(P<0.05),淀粉酶活性则随酶制剂浓度的增高呈先升后降趋势,脂肪酶活性受酶制剂影响较小,组间无显著差异(P>0.05);各添加组鳗鱼血清中超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活性相比对照组均有不同程度的提高,所有添加组鳗鱼血清总蛋白含量(TP)均显著高于对照组,Diet 3组(0.15%)相比对照提高了38.86%。综上所述,饲料中添加适量的复合酶制剂具有促进鳗鲡生长、提高肠道消化酶活性和非特异性免疫的功能,本试验条件下酶制剂最适添加浓度为0.15%。

嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡体内的免疫组织化学定位与病理观察

采用从鳗鲡分离的嗜水气单胞菌进行人工感染试验,以探讨感染后不同时期嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡肝脏、肾脏和肠道内的定位和由此引起的组织病理学变化。将细菌分2次对鳗鲡进行肌肉注射。第1次采用每克体质量10^3-10^7cfu的不同剂量注射以确定该菌的半数致死量,结果表明其半数致死量为5×10^4cfu/g。第2次以每尾鱼1×10^7cfu的剂量注射欧洲鳗鲡,此后分别在注射后6、24、48 h采集鳗鲡的肝脏、肾脏、肠道进行组织病理学和免疫组织化学定位研究。结果表明：3个时期的临床症状和病理变化存在一定的差别,鳗鲡早期无明显病理变化,而后期主要表现为败血症症状;鳗鲡肾脏组织的病理变化较其他脏器明显,主要表现为肾小管上皮细胞肿胀和肾小球坏死脱落;鳗鲡肝脏则主要表现为严重充血,肠道偶见肠粘膜脱落。免疫组织化学定位结果表明,感染细菌主要分布在鳗鲡肾脏内,肝脏和肠道也有感染细菌分布。

欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗鲡免疫球蛋白(Ig),并对欧鳗Ig的结构和抗原性进行分析。层析结果表明:Ig蛋白呈现一个锐形曲线,蛋白峰与抗原活性峰高度重叠。SDS-PAGE分析表明:欧鳗Ig重链分子量为68kD,轻链有3条,分子量分别为21kD、23kD和26kD。凝胶电泳结果显示:在非变性非还原条件下,欧鳗Ig有790kD和350kD2条蛋白带,在变性非还原条件下有790kD、593kD和350kD3条蛋白带。Western-blotting试验证实:兔抗欧鳗Ig能识别欧鳗Ig的多种不同聚合体和Ig的重链,但不能识别Ig的轻链。结论:欧鳗Ig在自然条件下可能以四聚体和二聚体的形式存在,这与其它硬骨鱼的Ig形式有差异。欧鳗Ig链间二硫键不健全,在SDS作用下可解聚产生多种不同分子量的聚合体,首次揭示欧鳗Ig的轻链有3种异型。

欧洲鳗鲡红头病病原的研究

我国南方各省欧洲鳗鲡养殖过程中，在黑仔及幼鳗期易发生一种以头部充血发红为主要特征的严重疾病，被称为“红头病”。本文描述了欧鳗红头病的症状，从病鳗血液中分离到３株菌，肌注和口服人工感染试验出现与自然发病相似的症状，死亡率分别为８３％和６７％，从病鳗身上重新分离到性状相同的菌株。４株分离菌的特性完全一致。均为革兰氏阴性杆菌，以周鞭毛运动，兼性厌氧，发酵葡萄糖产酸，氧化酶阴性，过氧化氢酶阳性，还原硝酸盐，ＶＰ和柠檬酸盐阴性，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性，发酵麦芽糖和甘露糖等，该菌除葡萄糖产酸不产气外，其余生理生化特性完全与《伯捷细菌鉴定手册》第九版中迟钝爱德华氏菌吻合，因此鉴定为迟钝爱德华氏菌。

欧洲鳗鲡MyD88基因的克隆及其免疫功能分析

髓样分化因子（myeloid differentiation factor88，MyD88）是TLR（toll-like receptor）信号通路的关键接头蛋白，在先天性免疫中发挥重要作用。实验首次克隆了欧洲鳗鲡MyD88基因cDNA全长序列，命名为AaMyD88，其全长为1539bp，开放阅读框为846bp，编码282个氨基酸。该蛋白三维丝带空间结构图与人类的MyD88十分相似，具有MyD88家族典型的死亡结构域和TIR（toll-1ike／IL-1receptor）结构域，其中TIR结构域中含有3个序列高度保守的boxl、box2和box3。同源性分析显示，欧洲鳗鲡MyD88氨基酸序列与斑点叉尾鲴相似性最高，为76．3％，与其他鱼类相似性为67．5％～73．2％，与哺乳动物相似性较低，为61．6％～62．6％。欧洲鳗鲡MyD88在系统进化树中与其他鱼类MyD88聚为一支，哺乳类以及两栖类MyD88分别聚为一支。实时荧光定量PCR检测发现，AaMyD88基因在欧洲鳗鲡各组织器官中均有表达，其中在肝脏中的表达量最高，心脏、肠、脾脏以及肾脏中也有较高的表达，而肌肉和鳃中的表达水平较低；欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后，肾脏AaMyD88基因在第7天表达量有显著性提高，14d后恢复至正常水平，而脾脏AaMyD88基因表达水平从第7～21天持续显著上调，于第7天达到峰值，其表达量为肾脏的1．7倍；欧洲鳗鲡鳍细胞系经polyI：C处理后，AaMyD88基因表达水平在3h显著降低，6-48h均有显著升高，于12h达到峰值。LPS处理后的欧洲鳗鲡鳍细胞系AaMyD88基因表达水平在3h显著降低，6和12h显著升高，于12h达到峰值，24h后恢复至正常水平。polyI：C处理组MyD88基因表达水平在12～48h均显著高于LPS处理组。研究表明，MyD88在欧洲鳗鲡抵御外源微生物的免疫应答反应中发挥重要作用。

反相离子对液相色谱法测定欧洲鳗鲡体中丙硫咪唑及其代谢物的残留量

建立了鳗鲡体中丙硫咪唑及其代谢物残留量测定方法。样品用乙腈提取,经正己烷净化后,液相色谱-荧光法测定,标准加入法定量。流动相为:甲醇、乙腈和乙酸铵,梯度洗脱。检测波长为:激发波长290 nm,发射波长320 nm,丙硫咪唑、2-氨基丙硫咪唑砜、丙硫咪唑亚砜、丙硫咪唑砜检出限依次为:25、5、10、1μg/kg。回收率大于95%,相对标准偏差小于8%。

氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的药代动力学

[目的]研究氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的药代动力学特征。[方法]氟苯尼考以混饲口灌方式给药,剂量为30 mg/kg,药时数据利用DAS软件进行药动学分析。[结果]日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内药动学的房室参数:吸收速率常数(Ka)分别为0.329和0.449 l/h,消除相半衰期(t1/2β)为44.266和12.690 h。非房室参数:药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为257.099和285.945 mg.h/L,平均滞留时间(MRT0-∞)为18.370和14.227 h,半衰期(t1/2)为12.341和9.919 h,达峰浓度(Cmax)为15.92和20.39μg/ml,达峰时间(Tmax)均为4 h。[结论]建议在鳗鲡中使用氟苯尼考进行治疗时可采用30 mg/kg体重的剂量,给药间隔为12 h,即每天2次。

吡喹酮和克螨特对寄生欧洲鳗鲡的拟指环虫的效果

试验结果表明,吡喹酮和克螨特是寄生在欧洲鳗鲡上的拟指环虫的有效驱除药物。新洁尔灭作为吡喹酮和克螨特复配的助溶剂,对配方的除虫效果无显著影响。驱除拟指环虫的最佳配方为吡喹酮∶克螨特∶新洁尔灭=2∶1∶1,以酒精溶解的溶液制剂能有效驱除欧洲鳗鲡寄生的拟指环虫。

孔雀石绿及其主要代谢产物在欧洲鳗鲡体内的蓄积及消除规律

为了解孔雀石绿及其有毒代谢产物无色孔雀石绿在鱼体中的蓄积与消除规律,达到对孔雀石绿的禁用监控,本试验对初始体重为12.42±2.18 g的欧洲鳗鲡进行0.1 mg/L药浴24 h,再转移到清水中养殖120d,采用高效液相色谱法测定血液、肝脏、肾脏和肌肉组织中孔雀石绿(MG)及其代谢物无色孔雀石绿(LMG)的残留。结果表明:在药浴开始阶段,肝脏、肾脏和肌肉中的MG含量迅速上升,肝脏、肾脏和血液于浸浴6 h时即达到最高平均值,分别为859.8±127.0μg/kg、589.2±40.0μg/kg和88.6±51.3μg/kg,肌肉于浸浴12h时达最高值(720.5±192.6μg/kg),随后含量下降。鳗鲡各组织中LMG高峰出现时间都晚于MG,血液、肝脏和肾脏中的LMG都是在浸浴12 h时,达到最高平均值,分别为1 135.0±376.4μg/kg、1 730.9±538.5μg/kg和238.9±105.5μg/kg;肌肉组织LMG的高峰出现时间更晚,是清水养殖3 d(72 h)时,为960.1±251.0μg/kg。血液中的MG消除最快,于清水养殖的第2天(48 h)检测不到残留。肾脏于养殖10 d(240 h)、肝脏于养殖45 d(1 080 h)时检测不到残留MG,而肌肉中的MG在养殖90 d时才检测不到。LMG在鳗鲡血液和肌肉组织中消除时间与MG相比显著延长,血液中的LMG消除时间是养殖90 d(2 160 h),而肌肉中于养殖120 d时,仍能检测到一定含量的LMG。除了肾组织在整个试验阶段和肌肉组织在浸浴过程中,所含平均MG比LMG高以外,其余情况下都是LMG平均含量明显高于MG平均值。本试验表明,可以通过对鳗鲡肌肉中的无色孔雀石绿残留的检测达到对孔雀石绿禁用的监控。