款冬花多糖调控miR-889-3p/TLR4对IL-6诱导的乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

[目的]探讨款冬花多糖对白细胞介素-6(IL-6)诱导的乳腺癌细胞恶性行为作用机制。[方法] IL-6诱导人乳腺癌细胞MCF-7后,不同浓度的款冬花多糖处理。转染miR-NC、miR-889-3p mimics的MCF-7细胞经IL-6处理;转染NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors的MCF-7细胞经款冬花多糖与IL-6处理;噻唑蓝(MTT)、平板克隆形成以及TranswellTM实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-889-3p、Toll样受体4(TLR4)的表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TLR4蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-889-3p与TLR4的靶向关系。[结果]款冬花多糖可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖(P<0.05)、迁移及侵袭能力(P<0.05),而提高miR-889-3p的表达(P<0.05),呈剂量依赖性;TLR4是miR-889-3p的靶基因,miR-889-3p可靶向调控TLR4的表达;转染miR-889-3p mimics可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);转染miR-889-3p-inhibitors可恢复款冬花多糖对IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭。[结论]款冬花多糖可通过调节miR-889-3p/TLR4表达而抑制IL-6诱导的乳腺癌细胞恶性行为。

款冬花多糖通过调控miR-4282表达抑制宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究

目的探讨款冬花多糖通过调控miR-4282表达抑制宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的机制。方法体外培养人宫颈癌细胞株HeLa和C-33A并以10、20、40、80、120 mg·L^(-1)的款冬花多糖处理,然后通过CCK-8实验测定各组细胞存活率并筛选款冬花多糖最佳作用浓度。将HeLa和C-33A细胞随机分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、款冬花多糖组、miR-4282 mimics组、阴性对照组、款冬花多糖+miR-4282 inhibitor组,分组处理后通过RT-PCR检测各组细胞miR-4282表达;通过CCK-8实验、EDU实验、流式细胞实验分别检测各组细胞增殖、凋亡;通过划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;通过Western blot法检测各组细胞增殖相关蛋白(Cyclin D1)、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(B-cell lymphoma-2 related X protein,Bax)]、上皮-间质转化相关蛋白[Vimentin、基质金属蛋白酶2(matrix metallo-proteinases 2,MMP-2)、E-cadherin]表达。结果与对照组相比,5-FU组、款冬花多糖组、miR-4282 mimics组细胞存活率、EDU阳性率、迁移率、迁移数、侵袭数、Cyclin D1与Bcl-2、Vimentin、MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-4282表达、凋亡率、Bax与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与款冬花多糖组相比,款冬花多糖+miR-4282 inhibitor组细胞存活率、EDU阳性率、迁移率、迁移数、侵袭数、Cyclin D1与Bcl-2、Vimentin、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05),miR-4282表达、凋亡率、Bax与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论款冬花多糖可通过上调miR-4282表达而抑制宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭并促使其凋亡,最终对其起到明显抑癌作用。

款冬花多糖磁性纳米粒的制备工艺研究

采用化学共沉淀法制备了Fe_(3)O_(4)纳米粒子,将款冬花多糖与Fe_(3)O_(4)纳米粒子超声反应制备了款冬花多糖磁性纳米粒;以款冬花多糖磁性纳米粒粒径和分散系数(PDI)为考察指标,在单因素实验的基础上,运用Box-Behnken响应面法优化了款冬花多糖磁性纳米粒的制备工艺。结果表明,在m(款冬花多糖)∶m(Fe_(3)O_(4)纳米粒子)为1∶1.0、超声时间为30 min、超声功率为400 W的最佳条件下,款冬花多糖磁性纳米粒的粒径为678.6 nm、PDI为0.554,款冬花多糖磁性纳米粒中多糖含量为16.31%、铁含量为31.31%,为款冬花多糖的进一步应用奠定了基础。

款冬花多糖的研究进展

款冬花作为一种疗效确切的传统中草药,对其有效成分的分离纯化及作用机制的深入了解是目前研究的重点。多糖是生物体内重要的生命活性物质,其不仅能够提高机体的免疫力,还有一定的抗肿瘤、抗氧化、降血脂作用。款冬花多糖为款冬花的主要活性成分之一,而蜜制后的款冬花润肺止咳的疗效大大提升,因此本文对款冬花多糖的药理作用及其提取、分离、纯化技术等方面进行系统综述,对进一步研究款冬花多糖提供帮助。其中从款冬花多糖的提取率可知微波辅助提取法和水提醇沉法的对款冬花多糖的提取率较高,约为13%。纯化多糖除蛋白时用的是LS-206型树脂吸附法,除蛋白、脱色的效果佳且多糖保留率较高。纯化后的款冬花多糖主要由Xyl,Ara,Glc,Rha,Man,Gal和GalUA糖组成。

款冬花多糖几种脱色工艺的研究与对比

目的通过对不同款冬花多糖脱色方法对比研究,寻找出一种较优的脱色方法。方法以脱色率和多糖保留率为指标,评价不同方法的脱色效果;对筛选的方法进行深入研究,确定其优化工艺条件。结果树脂法脱色效果最好,通过静态吸附实验选定LS-206树脂为理想树脂,动态吸附实验确定较优工艺条件为:体积流量1 BV/h,上样量1.5 BV,上样质量浓度6 mg/mL。结论确定LS-206树脂脱色,脱色率可达94.19%,多糖的保留率为73.02%,蛋白的脱除率为76.44%。

款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、Cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测miR-99a表达。在Eca109细胞中转染miR-99a、anti-miR-99a并使用80 mg/L款冬花多糖进行处理,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果款冬花多糖抑制Eca109细胞增殖、迁移、侵袭及MMP2、MMP9、CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P<0.05),促进miR-99a表达(P<0.05)。过表达miR-99a抑制Eca109细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达,减少细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数(P<0.05)。低表达miR-99a部分逆转款冬花多糖对细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的抑制作用。结论款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

款冬花多糖提取工艺研究

目的探索超声法提取款冬花多糖的工艺条件,为款冬花多糖的提取工业化提供理论依据。方法采用正交试验法,对甘肃款冬花多糖的提取工艺进行研究。结果最佳工艺为10倍量水,水温40℃,超声时间50min,频率为50kHz。结论此方法是一种简单、快捷、高效的提取方法。

款冬花多糖抗氧化能力测定

目的用流动注射化学发光法探讨中药款冬花多糖的体外抗氧化作用。方法将款冬花多糖提取液加入3种化学发光体系,测量其发光强度,根据系统化学发光被抑制的程度评价款冬花对活性氧自由基的清除能力,并以抗坏血酸(Vc)为阳性对照。结果款冬花多糖对.OH有很好的清除作用,对O2.、H2O2也有一定的清除作用,且在0.25～4.4 mg.L 1内清除作用随浓度的增加而增强;对自由基的清除能力大小:.OH>H2O2>O2.。结论在一定浓度范围内,款冬花多糖具有一定的抗氧化活性。

款冬花多糖提取过程的动力学模型

目的:研究建立热水浸提法提取款冬花多糖的动力学模型。方法:选择球形模型,以Fick第二定律为基础,建立得到款冬花多糖的提取动力学模型。结果:根据款冬花多糖提取动力学模型推算出了提取的速率常数、活化能、相对萃余率、半衰期等动力学函数值。结论:建立得到的款冬花多糖提取动力学模型,为款冬花多糖提取工程放大和深入理论研究提供一定的依据。