止得咳颗粒在大鼠体内的代谢产物研究

目的分析止得咳颗粒在大鼠体内的代谢产物并推测其代谢途径。方法将雄性SD大鼠随机分为空白组、给药组(止得咳颗粒,9.45 g/kg),每组灌胃超纯水或相应药液,每天2次,每次灌胃间隔6~8 h,连续3 d。收集各组大鼠血清、粪便、尿液样品,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)技术鉴定大鼠灌胃止得咳颗粒后上述生物样品中的代谢产物,并推测其代谢途径。结果大鼠灌胃止得咳颗粒后,在其血清、尿液、粪便样品中共鉴定出16个原型成分(如野鸢尾黄素、黄芩素、绿原酸等)和11个代谢产物(如山柰酚或木犀草素水合产物、绿原酸甲基化产物、黄芩苷羟基化产物)。其中,血清样品中鉴定出8个原型成分和4个代谢产物;尿液样品中鉴定出10个原型成分和7个代谢产物;粪便样品中鉴定出8个原型成分和5个代谢产物。结论止得咳颗粒在大鼠体内的代谢成分主要包括黄芩苷、野鸢尾黄素、绿原酸,主要涉及甲基化、羟基化、葡萄糖醛酸化等代谢途径。

止得咳颗粒联合西药治疗风热犯肺型社区获得性肺炎临床观察

[目的]观察止得咳颗粒联合西药治疗社区获得性肺炎(风热犯肺型)的临床疗效。[方法]将60例患者随机分成观察组和对照组各30例。对照组根据入院时的临床和实验室检查结果给予抗感染、止咳化痰等治疗,观察组在对照组治疗的基础上予止得咳颗粒口服,两组疗程均为7 d。比较两组的疗效以及治疗前后白细胞介素-6(IL-6)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、C反应蛋白(CRP)等水平变化。[结果]观察组总有效率为93.3%,对照组总有效率为73.3%,观察组疗效优于对照组(P<0.05)。两组治疗后咳嗽、咳痰、发热、口干等中医证候积分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组较对照组降低更显著(P<0.05)。两组治疗后SAA、NLR、CRP、IL-6水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组较对照组降低更显著(P<0.05)。[结论]止得咳颗粒联合西药治疗风热犯肺型社区获得性肺炎能有效缓解临床症状,降低炎症因子水平,改善预后。

止得咳颗粒治疗慢性支气管炎和急性支气管炎-肺炎药效学及作用机制研究

目的:研究止得咳颗粒治疗慢性支气管炎和急性支气管炎-肺炎的药效学评价。方法:建立大鼠慢性支气管炎急性发作模型,观察大鼠首次咳嗽时间(潜伏期)及3 min内的咳嗽次数、排痰量、痰液中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)含量、肺功能(FVC、FEV_(0.5)、MMEF、FEV_(0.5)/FVC),HE染色观察气管和肺脏组织病理学改变。建立小鼠细菌性急性支气管炎-肺炎模型,观察小鼠的首次咳嗽时间(潜伏期)及3 min内的咳嗽次数、酚红排泌量、HE染色观察气管和肺脏组织病理学改变。并通过小鼠气管酚红排泌实验、二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、醋酸致小鼠扭体实验对止得咳颗粒进行药效学评价。结果:在大鼠慢性支气管炎模型中,与模型组比较,止得咳颗粒3.9、7.8 g/kg组咳嗽潜伏期显著延长,排痰量显著增加,FEV_(0.5)显著升高(P<0.01),气管及肺脏病理改变明显改善。止得咳颗粒1.95、3.9、7.8 g/kg组咳嗽次数及痰液中IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低,FVC、MMEF显著升高(P<0.05或P<0.01)。在小鼠细菌性急性支气管炎-肺炎模型中,与模型组比较,止得咳颗粒5.6、11.2 g/kg组咳嗽潜伏期显著延长,气管酚红排泌量显著增加,止得咳颗粒2.8、5.6、11.2 g/kg组咳嗽次数显著减少(P<0.05或P<0.01),气管及肺脏病理改变明显改善。止得咳颗粒5.6、11.2 g/kg能显著增加小鼠气管酚红排泌量,抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀度(P<0.05或P<0.01),止得咳颗粒2.8、5.6、11.2 g/kg能显著延长小鼠扭体潜伏期,减少扭体次数(P<0.05或P<0.01)。结论:止得咳颗粒能显著改善急慢性支气管炎、肺炎引起的咳嗽症状,其作用机制可能与下调炎症因子水平有关。

基于网络药理学及实验验证分析止得咳颗粒治疗咳嗽的作用机制

目的基于网络药理学预测止得咳颗粒治疗咳嗽的作用机制,并对其进行体内外实验验证。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)与相关文献获取止得咳颗粒的活性成分及对应靶点;利用人类基因数据库(GeneCards)和比较毒物遗传学数据库(CTD)搜索咳嗽相关靶点;利用STRING数据库和Cytoscape软件构建止得咳颗粒与咳嗽交集靶点的蛋白质互作网络(PPI)网络;利用Cytoscape软件构建止得咳颗粒的“成分-靶点”网络和“成分-靶点-信号通路”网络;通过DAVID数据库对交集靶点进行通路注释和分析;运用SYBYL-X 2.0和Discovery Studio软件对止得咳颗粒排名靠前的活性成分和关键靶点进行分子对接,验证其生物活性;验证实验通过构建LPS致RAW264.7细胞炎症模型,CCK8法检测细胞增殖抑制率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot)检测炎症因子及相关蛋白表达,以及建立小鼠棉球肉芽肿模型,ELISA法检测棉球肉芽肿小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达情况。结果研究共筛选出止得咳颗粒的活性成分59个,关键靶点11个,包括白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)等靶点;功能分析和信号通路分析结果显示,止得咳颗粒主要涉及一氧化氮生物合成过程的正调控、氧化还原过程等生物过程,通过调节肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、百日咳信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路等信号通路产生作用。分子对接结果显示,鸢尾甲黄素A和PTGS2、异鼠李素和EGFR、柚皮素和MAPK3有比较高的结合活性。实验验证结果表明,止得咳颗粒浓度为12.5μg·mL^(-1)、25μg·mL^(-1)、50μg·mL^(-1)时对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)没有毒性,不同浓度的止得咳颗粒可降低脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6的释放,对环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白的表达也有抑制作用;止得咳颗粒能够减轻小鼠棉球肉芽肿的增生,降低小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达。结论本研究创新性的采用网络药理学方法结合实验验证初步探究止得咳颗粒治疗咳嗽的作用及作用机制,为后续深入研究其具体机制提供了理论基础。

止得咳颗粒质量标准的研究

目的建立止得咳颗粒的质量标准研究方法。方法采用薄层色谱法(TLC)对白前、射干进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)C_(18)色谱柱测定黄芩苷和次野鸢尾黄素的含量:流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(49∶51);流速为1 mL/min;检测波长为266 nm。结果 TLC斑点清晰,阴性无干扰。HPLC定量测定中,黄芩苷和次野鸢尾黄素分别在947.1～7577.0 ng(r=0.9998)、18.03～180.30 ng(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.6%(RSD=0.4%)、93.1%(RSD=0.6%)。结论该方法简便、可行、灵敏、准确,可作为止得咳颗粒的质量控制方法。

止得咳颗粒治疗风热犯肺型急性支气管炎临床研究

目的:观察止得咳颗粒对急性支气管炎临床症状及炎症相关指标的改善情况。方法:将我院符合纳入标准的急性支气管炎患者200例随机分为观察组与对照组。观察组采用止得咳颗粒联合常规西医治疗,对照组采用常规西医治疗。观察症状积分及炎症相关指标的改善情况。结果:观察组总有效率(97%)明显高于对照组总有效率(85%)(P<0.05)。治疗后,两组患者咳嗽症状积分较治疗前均有所改善(P<0.05),观察组比对照组改善程度更明显(P<0.05)。治疗后,两组患者中性粒细胞水平、超敏C反应蛋白表达水平、血清样淀粉蛋白A表达水平均较治疗前明显改善(P<0.05),观察组比对照组改善程度更明显(P<0.05)。结论:止得咳颗粒联合常规西医治疗急性支气管炎效果较好。

止得咳颗粒止咳作用研究

目的:探讨止得咳颗粒的止咳作用。方法:将60只KM小鼠随机分为正常组、模型组、磷酸可待因组(0.011 g/kg)及止得咳颗粒高、中、低剂量组(1.137 g/kg、2.275 g/kg、4.550 g/kg),采用小鼠氨水引咳模型,评价止得咳颗粒的镇咳作用,以酶联免疫分析(ELISA)法检测小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)的含量,血清及肺组织中P物质的水平。结果:与模型组比较,止得咳颗粒中、高剂量组有明显的止咳作用(P<0.01),止得咳颗粒高剂量组可显著提高小鼠脑组织内5-HT、5-HIAA及NE含量(P<0.05),止得咳颗粒中、高剂量组可显著降低血清及肺组织中的P物质水平(P<0.05)。结论:止得咳颗粒具有止咳作用,其机制可能与促进中枢5-HT生成、提高NE含量及减少外周P物质含量有关。

基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术的止得咳颗粒化学成分研究

目的利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,分析和鉴定止得咳颗粒中的化学成分。方法使用Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9 μm)对样品进行分离,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液(含10 mmol乙酸铵)为流动相进行梯度洗脱,通过HRMS的正、负离子监测模式,全扫描及自动触发二级质谱扫描功能(Full MS/dd-MS^(2)),对止得咳颗粒中的化学成分进行快速分析及鉴定。结果 利用目标化合物的二级碎片离子信息与数据库及相关文献报道的化合物质谱信息进行比对,在止得咳颗粒中共鉴定出了30个化合物,包括12个黄酮及其苷类化合物,9个有机酸类成分,3个含氮类化合物及6个其他类组分。结论 本研究首次利用UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术对止得咳颗粒中的化学成分进行全面系统的分析,为止得咳颗粒进一步的药效物质研究及质量控制提供参考。

止得咳颗粒中连翘酯苷A成分鉴定及含量测定

目的建立止得咳颗粒成分的鉴定方法及测定相应成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法,在负离子模式下采集数据,对止得咳颗粒的成分进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定鉴定出的成分含量,色谱柱为Phenomenex Kinetex XB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为330 nm,柱温为30°C,进样量为10μL。结果根据质谱数据鉴定出连翘酯苷A成分。连翘酯苷A质量浓度在0.0237~0.2368 mg/m L范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9998,n=6);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3.0%(n=6);平均加样回收率为99.14%,RSD为2.33%(n=9)。结论所建立的方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于鉴定止得咳颗粒的成分并测定其相应成分的含量。

止得咳颗粒提取工艺的优化

目的:优化止得咳颗粒的提取工艺。方法:采用小鼠氨水引咳实验和二甲苯致耳肿胀实验初步筛选止得咳颗粒的提取方法(水提、醇提、水提醇沉法)。基于该方的制备路线,首先以吸水量为指标,考察含挥发油药材的浸泡时间;再并以挥发油得率为指标,采用单因素试验考察加水量和提取时间,筛选含挥发油药材的最优提取工艺。以次野鸢尾黄素和总黄酮含量为指标,在单因素考察的基础上,采取正交试验考察加水量、提取时间、提取次数等3个因素的影响,优化止得咳颗粒的水提工艺并验证。结果:药效学实验结果显示,水提物低、高剂量组(6.34、12.68 g/kg,以生药量计)和水提醇沉提取物高剂量组(12.68 g/kg,以生药量计)小鼠的咳嗽潜伏期均较模型组显著延长,2 min内咳嗽次数显著减少(P<0.05或P<0.01);水提物低、高剂量组(6.34、12.68 g/kg,以生药量计),醇提物高剂量组(12.68 g生药/kg,以生药量计)和水提醇沉提取物高剂量组(12.68 g/kg,以生药量计)小鼠的耳肿胀度均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01),水提物、醇提物和水提醇沉提取物低、高剂量组的肿胀抑制率分别为42.26%、55.08%、33.49%、51.56%、39.57%、44.36%,表明以水提法所得提取物的止咳、抗炎效果更优。含挥发油药材的最优提取工艺为加入5倍量水,浸泡30 min,提取3 h。最佳水提工艺为加入12倍量水,浸泡50 min后提取3次,每次1.0 h;3次验证试验结果显示,最优工艺所得提取物中次野鸢尾黄素的平均含量为76.47μg/g(RSD=2.15%,n=3),总黄酮的平均含量为92.45 mg/g(RSD=0.48%,n=3)。结论:优化的止得咳颗粒提取工艺稳定、可行。

止得咳颗粒的成型工艺研究

目的研究止得咳颗粒的成型工艺。方法通过L9(3)4正交试验优化挥发油包合工艺;考察不同辅料对颗粒成型性、溶化性、流动性和吸湿性的影响;利用综合评分法筛选制备止得咳颗粒的最优辅料,并确定辅料之间最佳配比;以颗粒相对湿度为指标对颗粒成型进行考察评价,筛选出合理生产工艺条件。结果包合物最佳工艺为物料比为8∶1,温度为40~50 ℃,搅拌时间为1 h;颗粒的最佳成型工艺条件为:糊精∶蔗糖=2∶1,以95%乙醇为润湿剂,所得颗粒剂成型率高,临界相对湿度约为 77%。结论该颗粒剂所选辅料合理,制备工艺稳定可靠,可为止得咳颗粒的工业化生产提供依据。

基于一测多评法对止得咳颗粒中7种成分的质量控制

目的建立一测多评法同时测定止得咳颗粒中黄芩苷、射干苷、野鸢尾苷、汉黄芩苷、黄芩素、次野鸢尾黄素及汉黄芩素的含量。方法采用henomenex Kinetex XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃;流动相为甲醇(A)-0.2%磷酸(B),梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),检测波长为270 nm,以黄芩苷为内参物,建立射干苷、野鸢尾苷、汉黄芩苷、黄芩素、次野鸢尾黄素和汉黄芩素的相对校正因子,并考察相对校正因子的耐用性。比较外标法和一测多评法对止得咳颗粒中7种成分含量的测定结果。结果7种成分分别在0.2390~1.1950 mg,0.0060~0.0302 mg,0.0160~0.0800 mg,0.0326~0.1630 mg,0.0055~0.0276 mg,0.0029~0.0143 mg和0.0036~0.0178 mg范围内有良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率(RSD)分别为97.11%(0.94%)、97.87%(1.33%)、97.44%(1.34%)、97.85%(0.89%)、97.24%(1.16%)、101.90%(2.24%)和99.46%(0.71%),一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著性差异。结论方法稳定可靠,可用于止得咳颗粒的质量控制。

止得咳颗粒治疗风热犯肺型咳嗽变异性哮喘合并支原体感染的临床研究

目的观察止得咳颗粒辅佐治疗风热犯肺型咳嗽变异性哮喘合并支原体感染患者的临床疗效。方法随机数字表法将60例风热犯肺型咳嗽变异性哮喘合并支原体感染患者分为治疗组30例、对照组30例。对照组口服罗红霉素、吸入沙美特罗替卡松粉治疗;治疗组在对照组的基础上,加服止得咳颗粒。疗程7d。比较两组患者治疗前后中医证候疗效;咳嗽症状总积分;咳嗽视觉模拟评分;血清炎症因IL-6、TNF-α;血嗜酸性粒细胞计数;血清免疫球蛋白Ig E水平。结果治疗组在中医证候疗效、咳嗽症状总积分、咳嗽视觉模拟评分及血清炎症因IL-6、TNF-α改善方面要优于对照组,差异有统计学意义;两组血嗜酸性粒细胞计数、血清免疫球蛋白Ig E水平差异无统计学意义。结论止得咳颗粒辅佐治疗风热犯肺型咳嗽变异性哮喘合并支原体感染患者疗效显著,值得推广。

基于化学模式识别方法分析止得咳颗粒的抗炎谱效关系

目的:研究止得咳颗粒HPLC指纹图谱与抗炎作用的谱效关系,探索其抗炎药效物质基础。方法:采用HPLC建立10批止得咳颗粒的指纹图谱并进行色谱峰归属,流动相甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长254 nm。综合应用相似度评价,聚类分析(HCA),主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)评价止得咳颗粒批间质量差异。采用偏最小二乘法(PLS)将指纹图谱共有峰与二甲苯致小鼠耳肿胀和小鼠棉球肉芽肿的抑制率进行关联性分析,筛选出对抗炎药效作用贡献较大的色谱峰。结果:止得咳颗粒HPLC指纹图谱标定了31个共有峰,10批样品相似度均≥0.992。HCA与PCA分析结果一致,均将样品分为3类;OPLS-DA结果发现15个成分是影响样品批间差异的主要标记物。不同批次止得咳颗粒样品均有不同程度的抗炎作用,PLS分析得出与抗炎作用呈正相关的色谱峰主要来自射干、黄芩,贡献较大的色谱峰为3,6,19,27~30号峰,其中28,30号峰依次为次野鸢尾黄素、汉黄芩素。结论:HPLC指纹图谱结合化学模式识别方法可为系统评价止得咳颗粒整体质量提供参考。止得咳颗粒对小鼠急、慢性炎症反应有一定的抑制作用,抗炎作用是多种成分共同作用的结果,射干、黄芩对该制剂发挥抗炎作用具有显著意义。