苦参止痢颗粒的药效作用研究

通过小鼠胃肠蠕动试验、小鼠腹泻试验、抗炎试验和镇痛试验,考察苦参止痢颗粒的药效作用。结果表明,与空白对照组相比,苦参止痢颗粒可显著降低蓖麻油所致小鼠的腹泻次数(P<0.01),对正常小鼠胃排空作用有显著的抑制作用(P<0.01),可显著降低二甲苯所致小鼠耳廓的肿胀率(P<0.01),显著提高小鼠耐热痛阈值(P<0.01)。说明苦参止痢颗粒具有止泻、调节胃肠蠕动、抗炎、镇痛等作用。

四黄止痢颗粒中几种有效成分的薄层鉴别研究

为建立和完善四黄止痢颗粒的质量标准,本试验采用薄层色谱法对四黄止痢颗粒中的黄连、黄柏、大黄、黄芩、板蓝根进行鉴别,对展开剂、展开温度、展开湿度、薄层板来源、薄层板批号、显色条件等因素进行考察。试验以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1)为展开剂,置氨蒸气预饱和的展开缸内展开,置紫外光灯(365nm)下检视鉴别黄连、黄柏;以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂展开,喷以2%三氯化铁乙醇溶液检测黄芩的存在;以正丁醇-冰醋酸-水(19∶5∶5)为展开剂展开,热风吹干后喷以茚三酮试液,在105℃加热检视鉴别板蓝根。试验结果表明,在考察条件下,目标物斑点清晰、无拖尾,阴性对照无干扰,方法专属性强,重现性好。

四黄止痢颗粒中六味中药相互配伍对鸡大肠杆菌的作用研究

为了探讨四黄止痢颗粒中六味中药体外相互配伍抗菌活性,采用微管-平板法测定试验药物抗鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),肉汤稀释棋盘法测定四黄止痢颗粒中六味中药相互配伍15个药对抗鸡大肠杆菌的协同指数(SI)及呈现协同作用时组方中各味中药的配比。结果表明:六味中药水提物中,黄连抗鸡大肠杆菌的活性最强,MIC为125 mg/mL;配伍呈现协同作用的药对有4对,其中黄芩与黄柏配伍的SI为0.27,配比为8:1,MIC为31.3 mg/mL;黄芩与黄连配伍,SI为0.63,配比为1:2,MIC为62.5 mg/mL;黄芩与甘草配伍的SI为0.25,配比为1:4,MIC为125 mg/mL;黄芩与大黄配伍的SI为0.38,配比为1:2,MIC为125 mg/mL。本试验依据体外联合抗菌活性获得4对中药配比,为四黄止痢颗粒复方的拆方研究奠定基础。

“止痢颗粒”治疗小儿急性细菌性腹泻的临床疗效观察

目的:探讨"止痢颗粒"治疗小儿急性细菌性腹泻的临床疗效和安全性。方法:收集2015年2月至2015年7月期间来我院治疗的急性细菌性腹泻患儿共120例,随机分为对照组和治疗组,每组60例,2组患儿均根据病情给予口服微生态制剂、蒙脱石散剂、补充多种维生素等措施在内的常规治疗,治疗组在常规治疗基础上给予"止痢颗粒",连续治疗3 d,比较2组患儿止泻时间、体温恢复正常时间、症状体征消失时间及临床疗效、不良反应情况。结果:治疗组腹泻患儿止泻时间、体温恢复正常时间、症状体征消失时间均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组显效率为70.00%,总有效率为93.33%,对照组为31.67%、70.00%,治疗组显效率、总有效率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),2组均无严重不良反应发生。结论:急性细菌性腹泻患儿在常规治疗的基础上给予"止痢颗粒"治疗疗效确切,止泻、退热及症状体征消失时间更短,不增加不良反应,安全有效,可在临床推广应用。

基于网络药理学的苦参止痢颗粒治疗仔猪腹泻机理探究

探究苦参止痢颗粒治疗仔猪腹泻的作用机理。通过BATMAN数据库检索苦参止痢颗粒中化学成分与作用靶点,利用STRING 11.0、DAVID数据库和Cytoscape 3.7.2软件从苦参止痢颗粒中筛选出丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、TP53、ESR1、PPP2CB、PRKCA、PRKCD、PGR和AR等关键靶点;GO富集发现1条细胞组成条目,2条分子功能条目以及5条生物过程条目;6条KEGG通路,包括心肌细胞中肾上腺素能信号、血管平滑肌收缩、钙信号通路、精氨酸生物合成、唾液分泌和cGMP-PKG信号通路。说明苦参止痢颗粒可通过壬酸、月桂酸、殷金醇棕榈酸酯、22,23-二氢豆甾醇、白桦脂醇以及没食子酸等成分调控基因靶点,并通过信号转导、神经调节、酶活性调节以及内分泌调节等生物过程来调控仔猪腹泻。

HPLC波长切换法同时测定四黄止痢颗粒中5种成分的含量

为了建立和完善四黄止痢颗粒的质量标准,建立HPLC波长切换法同时测定四黄止痢颗粒中大黄素、大黄酸、黄芩苷、甘草酸铵、(R,S)-告依春5个成分的含量方法。采用WondaSil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,变换波长检测[0~10 min,245 nm测定(R,S)-告依春;10~25 min,278 nm测定黄芩苷;25-45 min,254 nm测定甘草酸铵、大黄酸、大黄素]。各待测组分分离度良好;(R,S)-告依春、黄芩苷、甘草酸铵、大黄酸、大黄素5个成分的进样量分别在0.0475~0.475μg(r=0.9993)、0.0678~0.678μg(r=0.9990)、0.2290~2.2900μg(r=0.9994)、0.0165~0.1650μg(r=0.9998)、0.0152~0.1520μg(r=0.9995)与峰面积呈良好的线性关系;加样回收率分别为98.2%(RSD=1.6%)、100.7%(RSD=1.0%)、99.5%(RSD=1.1%)、100.5%(RSD=0.8%)、99.3%(RSD=1.0%)。说明该方法可用于四黄止痢颗粒中多指标成分的质量控制。

基于网络药理学和分子对接探究连参止痢颗粒治疗猪腹泻的作用机制

【目的】利用网络药理学和分子对接方法研究连参止痢颗粒治疗猪腹泻的作用机制。【方法】运用中药系统药理学分析平台(TCMSP)、中医药百科全书(ETCM)平台搜索连参止痢颗粒中黄连、白头翁、苦参、诃子、甘草的有效活性成分和作用靶点,利用Cytoscape 3.7.2软件绘制药物有效成分-靶点网络图;从NCBI、OMIM、GeneCards、MalaCards平台获取猪腹泻靶点,将疾病和药物交集蛋白靶点上传至STRING 11.5数据库,利用Cytoscape 3.7.2软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络图,并利用微生信平台对核心靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。通过分子对接技术对关键有效活性成分和核心靶点进行对接验证。【结果】经筛选获得连参止痢颗粒药物的有效活性成分96个,药物作用靶点208个,疾病靶点1 785个。PPI结果显示,连参止痢颗粒作用于猪腹泻的关键靶点为Jun原癌基因(JUN)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、MYC原癌基因(MYC)、NFKB抑制剂α(NFKBIA)、原癌基因RELA(RELA)、胱天蛋白酶3(CASP3)、肿瘤坏死因子(TNF)、MAPK1、白细胞介素6(IL6)、雌激素受体1(ESR1)等。GO功能筛选得到生物过程6个条目,细胞组分和分子功能各2个条目。生物过程主要富集在RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控、正调控IL8的产生、正调控序列特异性DNA结合转录因子活性、细胞对脂多糖的反应、凋亡过程的负调控和RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控;细胞组分主要富集在细胞核和细胞质;分子功能主要富集在RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端区域序列特异性DNA结合和DNA结合。KEGG通路富集分析获得53条通路,其中2条信号通路与猪腹泻密切相关。分子对接结果显示,连参止痢颗粒的关键有效活性成分与猪腹泻靶点具有良好的结合活性。【结论】连参止痢颗粒可能主要通过芒柄花黄素、芳香膜菊素、3,3′-二甲基槲皮素、松香素、硫酸奎尼丁、高丽槐素、1-甲氧基菜豆素、异甘草素等有效成分靶向JUN、RELA、MYC、NFKBIA、MAPK14、CASP3、TNF、MAPK1、IL6等靶点分子,调控沙门氏菌感染和IL17等信号通路,从而达到治疗猪腹泻的目的。

止痢颗粒质量控制

目的初步建立止痢颗粒质量控制方法。方法采用薄层色谱法(TLC)鉴别黄柏,高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸含量。选用HypersilODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;甲醇-0.02%磷酸溶液(5:95)为流动相;流速1.0mL·min-1;检测波长274nm,柱温30℃。结果TLC能检出黄柏及其所含盐酸小檗碱;没食子酸在0.02496～0.9984μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率98.13%,RSD=1.72%。结论通过初步研究建立的定性、定量方法,简便,准确,可用于该制剂的质量控制。

黄白止痢颗粒质量标准的研究

采用薄层色谱法鉴别黄芩和白头翁,采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量.色谱条件：XBridge C18（5μm,4.6×150 mm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2％磷酸溶液（53∶47）,检测波长280 nm,柱温为30℃,进样量为10μl.线性回归方程为y=33146x＋4089,相关系数r=0.99997,即在1～100 μg/ml范围内,黄芩苷峰面积与浓度有良好的线性关系,回收率为97.6％.该方法简便、准确,可以很好地控制黄白止痢颗粒的质量.

＂止痢颗粒＂治疗溃疡性结肠炎的临床疗效观察

目的 探讨＂止痢颗粒＂治疗溃疡性结肠炎的临床疗效.方法 选取2015年8月至2016年8月本院消化内科就诊的溃疡性结肠炎患者80例为研究对象,随机分为对照组40例,观察组40例;对照组患者给予溃疡性结肠炎常规治疗,观察组患者在常规治疗的基础上加用＂止痢颗粒＂3d.观察两组患者的临床疗效,并比较分析.结果 观察组总有效率明显高于对照组总有效率,差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组症状改善情况明显优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 溃疡性结肠炎患者在常规治疗的基础上给予＂止痢颗粒＂治疗,疗效确切,能够显著改善腹痛、腹泻及黏液血便等症状,可以在临床上推广使用.

葛芩止痢颗粒药效学试验

为了探究葛芩止痢颗粒的抗菌、抗炎、止泻作用,采用微量肉汤稀释法测定葛芩止痢颗粒对猪源病原菌的体外抑菌作用;构建大肠埃希菌的腹腔感染模型,观测葛芩止痢颗粒对小鼠的体内保护作用;构建二甲苯致小鼠耳肿胀模型,检测葛芩止痢颗粒的抗炎作用;构建蓖麻油致小鼠腹泻模型,检测葛芩止痢颗粒的止泻作用。结果显示:葛芩止痢颗粒对3种常见猪病原菌具有体外抑制作用,其最小抑菌浓度(MIC)分别为大肠埃希菌MIC=14.37 mg/mL,猪霍乱沙门菌MIC=28.75 mg/mL,金黄色葡萄球菌MIC=14.37 mg/mL;对感染致病性大肠埃希菌的小鼠具有明显的保护作用,高剂量组与感染对照组比较差异极显著(P<0.01),中剂量组与感染对照组比较差异显著(P<0.05),但其对小鼠的保护效率略弱于硫酸多黏菌素组;对二甲苯所致的小鼠耳肿胀具有明显抑制作用(P<0.01),低剂量组、中剂量组、高剂量组的肿胀度和肿胀抑制率分别(8.62±2.18)mg、34.79%,(7.48±1.93)mg、43.42%,(6.50±2.20)mg、50.83%;对蓖麻油引起的小鼠腹泻也表现出明显的止泻作用,高、中剂量组的止痢效果与盐酸小檗碱的效果基本一致且均极显著高于感染对照组(P<0.01),低剂量组的效果要弱于盐酸小檗碱的止痢效果,但其止痢效果仍然显著高于感染对照组(P<0.05)。表明葛芩止痢颗粒具有明显的体外、体内抗菌作用及体内抗炎、止泻作用。

基于生物网络功能模块整合组方规律分析四黄止痢颗粒治疗仔猪腹泻的作用机制

从功能模块水平研究中药复方四黄止痢颗粒治疗仔猪腹泻的分子作用机制,并阐释其配伍规律。使用TCMSP、TCMID、HERB数据库筛选方中黄连、黄柏、大黄、黄芩、板蓝根、甘草6味中药的有效成分,收集相关药物靶点;使用GeneCards、NCBI、OMIM数据库获取仔猪腹泻的疾病靶点;比较分析药物靶点和疾病靶点的交集并用韦恩图表示,将其上传至STRING数据库进行蛋白相互作用分析;采用Cytoscape软件绘制靶点蛋白相互作用网络图(protein-protein interaction network,PPI);应用MCODE插件对PPI网络进行功能模块识别;运用David数据库对功能模块进行KEGG通路富集分析。结果表明:1)网络分析筛选活性成分180个,主要包括生物碱、黄酮、蒽醌、苷类成分;药物靶点蛋白88个,猪腹泻相关靶点470个,二者的交集靶点35个。2)蛋白互作网络分析表明,由17个靶点蛋白组成的模块1是中药复方四黄止痢颗粒的功能模块。3)KEGG富集分析表明,模块1主要涉及的通路包括TNF、IL-17以及NF-κB等17个信号通路。4)归经分析表明,四黄止痢颗粒主要作用于脾、胃等11个脏腑经络。综上所述,生物碱、黄酮、蒽醌、苷类成分是四黄止痢颗粒的物质基础,主要通过作用于功能模块1调控TNF、IL-17、NF-κB等信号通路,调节脾、胃等脏腑经络,从蛋白靶点、信号通路以及经络等多个水平上发挥治疗仔猪腹泻的作用。

四黄止痢颗粒质量标准研究

为了提高和完善《中华人民共和国兽药典》二○一○年版中四黄止痢颗粒的质量标准,改进四黄止痢颗粒项下黄连、黄柏的薄层鉴别方法,增加黄芩的定性鉴别。采用HPLC法测定黄芩苷含量。薄层色谱斑点清晰,阴性无干扰。黄芩苷对照品浓度在3.122~124.88μg/m L（r=0.9991,n=6）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率为101.4%,RSD为1.6%。该方法简便、准确、重现性好、精密度高,可作为四黄止痢颗粒的质量控制方法。

四黄止痢颗粒不同组分联合对多杀性巴氏杆菌的体外抑制作用研究

探究四黄止痢颗粒及其组分联合对多杀性巴氏杆菌的体外抑菌效果。通过二倍稀释法测定单药、3种中药联合、4种中药联合以及6种中药联合(自配四黄止痢颗粒)、市售四黄止痢颗粒对多杀性巴氏杆菌的MIC和MBC。结果表明,四黄止痢颗粒方剂的6种中药中对多杀性巴氏杆菌的抗菌活性最强是黄连,MIC、MBC均为1.563 mg/mL;板蓝根的MBC大于200 mg/mL,对多杀性巴氏杆菌的抑菌效果最差。3种药物联合应用,其中黄柏+黄连+大黄对多杀性巴氏杆菌的抗菌效果最好,其MIC、MBC均为0.781 mg/mL;4种药物联合应用,其中板蓝根+大黄+黄柏+黄连、黄芩+大黄+黄柏+黄连、黄芩+板蓝根+黄柏+黄连等3组中药联合的抗菌效果最好,其MIC、MBC均为0.781 mg/mL。自配四黄止痢颗粒的MIC和MBC为50 mg/mL;市售四黄止痢颗粒方剂MIC均为200 mg/mL。3种中药联合、4种中药联合应用的抗菌活性明显优于单味中药,且都比自配四黄止痢颗粒和市售四黄止痢颗粒对多杀性巴氏杆菌的抗菌效果好,其中精简的组方中,黄柏+黄连+大黄对多杀性巴杆菌的抗菌效果最好。

HPLC波长切换法结合化学计量学对不同厂家四黄止痢颗粒中5种成分的比较分析

建立一种四黄止痢颗粒中(R,S)-告依春、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草酸铵、大黄素5个指标性成分的HPLC测定方法,同时结合化学计量学评价四黄止痢颗粒的质量。采用Inertsil ODS-3-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%三氟乙酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1 mL·min^(-1),柱温30℃;采用波长切换检测(0~10 min,245 nm测定(R,S)-告依春;10~22 min,278 nm测定黄芩苷;22~25 min,266 nm测定盐酸小檗碱;25~30 min,249 nm测定甘草酸铵;30~45 min,254 nm测定大黄素)。采用聚类分析、偏最小二乘判别分析等方法对不同厂家的四黄止痢颗粒进行质量评价。(R,S)-告依春、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草酸铵、大黄素5个指标性成分在45 min内能够达到完全分离,进样浓度分别在0.071~0.71μg·mL^(-1)、14.03~140.3μg·mL^(-1)、3.11~31.1μg·mL^(-1)、0.116~1.16μg·mL^(-1)、0.0049~0.049μg·mL^(-1)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为102.7%、99.3%、101.1%、98.0%、97.3%。20批四黄止痢颗粒聚为4类;小檗碱、(R,S)-告依春和大黄素是影响不同厂家四黄止痢颗粒质量贡献较大的3种成分。该方法稳定性好,重复性好,精密度高,可用于四黄止痢颗粒中5种指标成分的同时测定。

HPLC-DAD法同时测定四黄止痢颗粒中5种成分

建立同时测定四黄止痢颗粒中小檗碱、大黄素、(R,S)-告依春、黄芩苷、甘草苷5种成分的HPLC-DAD法。采用HPLC-DAD法,使用SunFire C_(18)色谱柱(6 mm×150 mm,5μm);以0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;柱温30℃;检测波长:小檗碱为345 nm,大黄素为254 nm,(R,S)-告依春为245 nm,黄芩苷、甘草苷为276 nm;进样体积为10μL。被测定的5种成分色谱峰均有良好的分离度,各组分具有良好的线性关系(r≥0.9995),精密度、稳定性、重复性良好,RSD均小于1.10%;平均加样回收率为98.57%~102.41%,RSD均小于1.40%。结果提示,该方法快速、简便、定量结果准确、灵敏度高,且通过方法学研究验证后,可将此方法作为四黄止痢颗粒质量标准中的质量控制方法。

金翁止痢颗粒对免疫低下小鼠的免疫调节作用

为探讨金翁止痢颗粒对免疫低下小鼠的免疫调节作用,将72只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、金翁止痢颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组,其中空白组小鼠给予生理盐水,模型组与各药物组小鼠腹腔注射环磷酰胺构建免疫低下模型.造模成功后,模型组给予生理盐水,阳性药物组给予2g/kg黄芪多糖液,金翁止痢颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组分别灌胃20g/kg,16g/kg,12.8g/kg的金翁止痢颗粒提取液,1次/d,连续治疗7d后,检测小鼠碳粒廓清指数、免疫器官指数,T/B淋巴细胞转化等指标.结果表明,金翁止痢颗粒能显著提高免疫低下小鼠碳粒廓清指数、免疫器官指数,促进T/B淋巴细胞转化,与模型组相比差异极具有统计学意义(p<0.01),表明金翁止痢颗粒具有增强免疫低下小鼠免疫功能的作用.

金翁止痢颗粒急性毒性和反复给药毒性试验研究

为了探讨金翁止痢颗粒急性毒性、微核率和反复给药的毒性,急性毒性试验采用灌胃法观测小鼠最大耐受量(MTD)和给药后小鼠毒性反应;微核试验采用给药后观察小鼠是否有致突变作用,检测其微核率;反复给药毒性试验采用灌胃的方法对大鼠进行连续给药30 d,观察其一般状况、血常规和血液生化指标以及主要脏器的病理变化。结果表明:金翁止痢颗粒的LD50>20 g/kg;微核率均低于4‰,与生理盐水组相比较,差异不显著(P>0.05);连续给药后,大鼠一般情况良好,体重、脏器指数均无异常改变,血常规及生化指标均在正常范围内,各脏器组织学检查均未见明显病理改变。说明金翁止痢颗粒对大鼠、小鼠无急性毒性、致突变性和反复给药毒性。

止痢颗粒抗菌作用及急性毒性实验的研究

目的:研究止痢颗粒对大肠杆菌和痢疾杆菌感染小鼠的抗菌作用及对小鼠的急性毒性实验。方法:将小鼠随机分为阴性对照、阳性对照、止痢颗粒(2.5g.kg-1、5.0g.kg-1、10.0g.kg-1)5组,各组小鼠均腹腔注射(ip)一定量菌液,半小时后灌胃给药,每日1次,连续7天,记录各组小鼠死亡数。结果:止痢颗粒在5.8g.kg-1剂量时对大肠杆菌感染小鼠有明显的保护作用;在10.0g.kg-1剂量时对痢疾杆菌感染小鼠有明显的保护作用。急性毒性实验表明小鼠口服最大给药量相当于临床用量(15g/袋)104倍,口服安全。结论:止痢颗粒具有明显抗菌作用,口服安全无毒。