基于网络药理学探讨新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的作用机制

目的 运用网络药理学方法探索新止骨增生丸治疗膝骨关节炎(KOA)的潜在作用机制。方法 利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库筛选新止骨增生丸的活性成分及其作用靶点;利用GeneCards、OMIM和DisGeNet数据库检索KOA疾病的相关靶点;通过Venny 2.1.0在线平台对新止骨增生丸的活性成分作用靶点与KOA疾病相关靶点映射取交集,得到新止骨增生丸治疗KOA的关键靶点(共同靶点);将共同靶点导入String平台构建蛋白相互作用(PPI)网络,并将结果导入Cytoscape 3.7.1软件进行拓扑分析,提取核心靶点;运用注释、可视化和集成发现(DAVID)数据库对核心靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并利用Cytoscape 3.7.1软件构建“活性成分-关键靶点-通路”网络。结果 共获得活性成分54个,对应靶点262个,疾病靶点2459个,共同靶点142个,经过蛋白互作及拓扑分析,得到核心靶点13个, GO功能富集分析得到821个生物过程(BP), 94个细胞组分(CC), 139个分子功能(MF)和167条通路(P<0.05)。将“活性成分-核心靶点-通路”网络图进行拓扑分析,共筛选出槲皮素、β-谷甾醇、木犀草素、山柰酚等12个核心成分,以及肿瘤坏死因子(TNF)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、白细胞介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子A (VEGFA)、白细胞介素-1β(IL-1β)等16个关键靶点。结论 新止骨增生丸可能通过槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚等主要活性成分,作用于AKT1、TNF、VEGFA等核心靶点,通过高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)、TNF等信号通路,协同发挥对KOA的治疗作用。

新止骨增生丸基于miR-146a对TGF-β/SMAD信号转导通路下TGF-β1、SMAD4表达的影响及治疗骨性关节炎的作用机制研究

目的利用细胞、分子生物学技术,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(Real-time PCR,RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)检测方法,观察新止骨增生丸对大鼠膝骨关节炎软骨细胞的作用机制及细胞凋亡的影响,并讨论新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的作用机制。方法SPF级6月龄大鼠24只,随机分为两组,空白组6只;模型复制组18只。模型复制组大鼠采用前后交叉韧带离断术复制骨性关节炎大鼠模型,模型复制成功后,将改组大鼠再次随机分为3组:模型组(6只),中药组(6只),西药组(6只)。连续治疗6周后,取整个膝关节,分离软骨组织。膝关节病理切片HE染色法观察各组软骨细胞状态,采用RT-PCR法检测各组大鼠膝关节中miR-146a的表达水平,采用WB法检测各组大鼠膝关节软骨组织中SMAD4和TGF-β1表达,采用SPSS 16.0软件包对RT-PCR法和WB法检测结果进行方差分析,P<0.05有统计学意义。结果(1)膝关节病理切片结果:经新止骨增生丸治疗后KOA症状减轻。(2)RT-PCR检测结果:模型组较空白组的miR-146a表达明显上调(P<0.05);中药组较模型组的miR-146a表达明显上调(P<0.05);西药组较模型组对比无统计学意义(P>0.05)。(3)WB检测结果:模型组较空白组的SMAD4、TGF-β1表达水平明显上调(P<0.05);中药组较模型组SMAD4、TGF-β1蛋白表达水平均呈现明显上调趋势(P<0.05)。结论新止骨增生丸能够通过miR-146a对TGF-β/SMAD信号通路的调控,达到治疗膝骨性关节炎的效果。

HPLC法同时测定新止骨增生丸中麦角甾苷、柚皮苷和芒柄花素的含量

目的w建立同时测定新止骨增生丸中麦角甾苷、柚皮苷和芒柄花素含量的方法。方法w采用HPLC法。色谱柱为KromasilwC18柱（250wmm×4.6wmm,5μm）;流动相为甲醇-体积分数为0.1%的磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为1.0wmwL·min^-1;检测波长为283wnm;柱温为35℃。结果w麦角甾苷、柚皮苷和芒柄花素的质量浓度分别在36.00-360.0wmg·L^-1、14.30-143.0wmg·L^-1和13.00-130.0wmg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999w7、0.999w9和0.999w8,平均回收率分别为98.9%、98.7%和99.1%（n=9）,RSD分别为1.1%、1.9%和1.4%。结论w本方法简便、准确、重复性良好,可作为新止骨增生丸的质量控制方法之一。

新止骨增生丸治疗膝骨关节炎临床研究

目的:观察新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的临床疗效。方法:将该院收治的膝骨关节炎患者94例随机分为治疗组和对照组各47例,治疗组采用新止骨增生丸合TDP神灯照射治疗,对照组采用硫酸氨基葡萄糖胶囊合TDP神灯照射治疗,10 d为1个疗程,治疗4个疗程后观察比较两组的症状积分和临床疗效。结果:治疗组总有效率(93.62%)明显优于对照组(80.85%),P<0.05;治疗组治疗后各症状评分低于对照组治疗后评分,P<0.05;治疗组治疗后血清中IL-1β、TNF-α低于对照组治疗,P<0.05。结论:新止骨增生丸治疗膝骨关节炎疗效满意。

新止骨增生丸对膝骨关节炎软骨细胞JAK-STAT信号通路下JAK2、P-JAK2表达及SOCS1负反馈影响

目的观察新止骨增生丸含药血清对软骨细胞JAK-STAT信号通路相关调节因子的影响,探讨新止骨增生丸对骨关节炎的作用机制。方法C28/I2细胞系建立体外软骨细胞退变模型,分别采用空白血清、新止骨增生丸含药血清、抑制剂血清、抑制剂+含药血清干预24 h后,收集软骨细胞,采用ELISA检测软骨细胞分泌肿瘤细胞坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)能力的影响,Westernblot法检测JAK2、SOCS1蛋白表达水平变化,Westernblot法检测各组软骨细胞中JAK2的磷酸化水平。结果与模型组相比,ELISA结果表明新止骨增生丸含药血清可有效降低炎性因子TNF-α和IL-6含量(P<0.05);Westernblot结果与ELISA结果趋势一致,即新止骨增生丸含药血清能抑制JAK2蛋白表达(P<0.05)。SOCS1负反馈调节蛋白表达升高。结论新止骨增生丸可通过调控JAK-STAT信号通路,抑制骨关节炎炎症反应,从而起到治疗骨关节炎作用。

新止骨增生丸对膝骨关节炎软骨细胞JAK/STAT信号通路下STAT3、P-STAT3表达影响及作用机制研究

目的探讨新止骨增生丸干预膝骨关节炎的机制研究。方法人软骨细胞株c28/i2稳定传代后并用白介素-1β(IL-1β)干预制备膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型软骨细胞。将细胞分为Con组(正常c28/i2细胞+空白血清)、Mod组(KOA模型c28/i2细胞+空白血清)、XZG组(KOA模型c28/i2细胞+10%新止骨增生丸家兔血清)、Cer组(KOA模型c28/i2细胞+32 nm/L Cerdulatinib)、Cer+XZG组(KOA模型c28/i2细胞+10%新止骨增生丸家兔血清+32 nm/L Cerdulatinib);CCK-8试剂盒检测Mod组细胞和不同浓度新止骨增生丸血清干预的XZG组细胞的增殖活性;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组细胞培养上清液中血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的含量;蛋白质印迹法(Western-blot)检测各组细胞中信号转导和转录激活子3(STAT3)的磷酸化水平及增殖细胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen,PCNA)、STAT3蛋白表达水平;采用SPSS16.0软件对各组数据进行分析,以x—±s表示各组实验结果,多组间比较采用单因素方差分析。结果与Con组比较,Mod组细胞的酪氨酸蛋白激酶/信号转导子和转录激活子(janus activated kinase signal transducer/activator of transcription,JAK/STAT)信号通路明显活化,STAT3蛋白的磷酸化水平及STAT3蛋白表达显著升高。新止骨增生丸含药血清可明显抑制上述因子的磷酸化发生,与Cer组及Cer+XZG组联合比较分析,新止骨增生丸含药血清可能是通过抑制JAK/STAT信号通路而实现其对膝骨关节炎的治疗作用。结论新止骨增生丸含药血清通过抑制JAK/STAT信号通路而实现其对膝骨关节炎的治疗作用。

止骨增生丸对兔膝骨关节炎组织形态学改变实验研究

目的:探讨止骨增生丸对兔膝骨性关节炎模型组织形态学的影响。方法:选取大耳白兔24只,按照组间均衡一致的原则,将24只健康大耳兔随机分为4组,每组6只,分别为:正常组、模型组、对照组(壮骨关节丸)组、治疗组(止骨增生丸)组。采用改良的"Hulth"经典造模法复制家兔膝骨性关节炎模型。造模成功后按体型系数换算法,计算出家兔用药量。给予对照组:含壮骨关节丸0.756 g/kg的生理盐水10 mL/次,3次/d,给予治疗组:含止骨增生丸0.756 g/kg的生理盐水10 mL/次,3次/d药物灌胃,用药4周后取材,采用普通光学显微镜观察关节软骨的层次、软骨细胞及软骨下骨的变化。结果:肉眼观察见正常组关节软骨表面光滑,呈极淡蓝色。对照组(壮骨关节丸)关节软骨表面呈淡黄色。治疗组(止骨增生丸)软骨颜色淡白。模型组关节软骨表面略显粗糙,呈黄色,可见滑膜充血。治疗组(止骨增生丸组):软骨组织表面光滑,表浅层:组织细胞有部分消失。以上实验结果结果显示止骨增生丸可以维持机体软骨细胞的正常组织形态,改善骨性关节炎的滑膜充血肿胀情况以及维持软骨细胞组织的正常形态。结论:表明止骨增生丸对骨性关节炎有比较显著的防治效果,其临床效果优于壮骨关节丸。

新止骨增生丸+止痛散帖敷TDP照射+熏洗1号蒸汽浴+离子导入+玻璃酸钠关节腔注射治疗早期膝关节骨性关节炎90例临床观察

[目的]观察新止骨增生丸＋止痛散帖敷TDP照射＋熏洗1号蒸汽浴＋离子导入＋玻璃酸钠关节腔注射治疗早期膝关节骨性关节炎疗效。[方法]使用前瞻性设计方法，对90例早期膝关节骨性关节住院患者使用①新止骨增生丸（熟地黄、牛膝、杜仲、鸡血藤、骨碎补），3粒／次，三次／d。②止痛散贴敷TDP照射（苏木、路路通、木瓜、花椒、冰片、透骨草、木香、川芎、伸筋草、独活、红花、木通、制川鸟、制草鸟、荆芥、细辛、大黄、薄荷脑），调成匀浆涂于药布上，敷于膝关节上，TDP神局部照射，30min次，1～2次／d。（3）熏洗1号方蒸汽浴（伸筋草、透骨草、荆芥、花椒、红花、秦艽、大黄、当归、赤芍、川芎、延胡索、海桐皮、防风、威灵仙、少年健、羌活、苏木）蒸汽床局部熏蒸，1～2次／d。④超声离子导入。NAVA-01LD型超声电导仪，原厂止痛贴片为耦合剂，2次／d，30min/次。⑤玻璃酸钠膝关节腔注射．1次／周：膝关节腔积液明显．髌试验阳性．抽吸关节积液。连续治疗4周为1疗程。观测临床症状、膝关节疼痛及功能、不良反应。治疗1疗程．判定疗效。[结果]痊愈45例，显效27例，有效15例，无效3例，总有效率96．70％。[结论]新止骨增生丸＋止痛散帖敷TDP照射＋熏洗1号蒸汽浴＋离子导入＋玻璃酸钠关节腔注射治疗早期膝关节骨性关节炎，疗效满意，无副作用，值得推广．

新止骨增生丸的HPLC指纹图谱

目的建立中药复方制剂新止骨增生丸的HPLC指纹图谱,对制剂进行质量控制。方法采用Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇-水（含体积分数为0.08%的磷酸）为流动相进行梯度洗脱,流速：1.0 m L·min-1,检测波长：283 nm,柱温：35℃;建立新止骨增生丸HPLC指纹图谱,运用＂中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件＂对10批制剂进行相似度评价,并对特征峰进行指认。结果建立的新止骨增生丸HPLC指纹图谱的专属性、重复性和稳定性均良好;10批制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值为0.982~0.995。结论上述建立的HPLC指纹图谱可以用于制剂的质量评价,可为提高新止骨增生丸整体质量控制方法提供实验依据。

论新止骨增生丸通过抑制IL-1β对TGF-β/Smad信号通路下TGF-βR1、Smad2表达影响及作用机制研究

目的利用细胞、分子生物学技术,采用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测方法,观察新止骨增生丸对大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞的作用机制及对细胞凋亡的影响,并讨论新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的作用机制。方法SPF级6月龄大鼠24只,随机分为两组,空白对照组6只,模型复制组18只。模型复制组大鼠采用前后交叉韧带离断术复制骨性关节炎大鼠模型,模型复制成功后,将该组大鼠再次随机分为3组:模型对照组(6只)、中药组(6只)及西药对照组(6只)。连续治疗6周后,取整个膝关节,分离软骨组织。膝关节病理切片HE染色法观察各组软骨细胞状态,采用WB法检测各组大鼠膝关节软骨组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、白细胞抑制因子2(Smad2)蛋白表达,采用SPSS 16.0软件包对WB法检测结果进行方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)膝关节病理切片结果:经新止骨增生丸治疗后KOA症状减轻。(2)WB检测结果:模型对照组IL-1β、TGF-βR1、Smad2蛋白表达水平较空白对照组明显上调(均P<0.05);中药组、西药对照组IL-1β蛋白表达水平较模型对照组呈现明显下调(均P<0.05),且中药组变化最为显著;中药组、西药对照组TGF-βR1、Smad2蛋白表达水平较模型对照组呈现明显上调趋势(均P<0.05)。结论新止骨增生丸能够抑制IL-1β表达,激活TGF-β/Smad信号通路以上调TGF-βR1、Smad2蛋白表达,且中药组变化最为显著,达到治疗膝骨性关节炎的效果。

新止骨增生丸治疗腰椎骨性关节炎疗效观察

目的探讨新止骨增生丸治疗腰椎骨性关节炎的临床效果。方法将40例腰椎骨性关节炎患者随机分为治疗组和对照组各20例,治疗组予新止骨增生丸治疗,对照组予美洛昔康胶囊治疗,疗程均为2周。比较2组疗效。结果治疗组总有效率95.0%明显优于对照组的65.0%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论新止骨增生丸治疗腰椎骨性关节炎效果显著,值得临床推广应用。

新止骨增生丸与薰洗方熏蒸联合膝关节镜清理术治疗早中期膝关节骨性关节炎46例临床观察

[目的]观察新止骨增生丸与薰洗方熏蒸联合膝关节镜清理术治疗膝关节骨性关节炎疗效。[方法]使用前瞻性设计方法,将46例患者行膝关节镜清理术,术后1周患膝关节腔内注射透明质酸钠2mL,1次/周,4周为1个疗程。术后第二天开始,新止骨增生丸（辽宁中医药大学附属医院骨伤二科协定方,熟地黄、骨碎补、肉苁蓉、鸡血藤、牛膝等）,1剂/d,水煎300mL,早晚温服,7d为1个疗程,连续6个疗程。术后切口愈合拆线后1周开始,患膝薰洗方（辽宁中医药大学附属医院骨伤二科协定方,熟地黄、附子、威灵仙、桂枝、杜仲、枸杞子、鹿角、菟丝子、山茱萸、当归、牛膝等）熏蒸治疗,将上述中药装袋,放入薰洗方熏蒸多功能治疗机中,加水1.5∽2L煎煮,待药液煮沸后,将患者膝部置于熏蒸治疗机上进行熏蒸,根据患者的耐受程度调整熏蒸治疗机的温度,25min/次,2次/d,7d为1个疗程,连续3疗程。观测临床症状、不良反应。注射透明质酸钠治疗1疗程（4周）,新止骨增生丸连续治疗6疗程（42d）,薰洗方熏蒸治疗3疗程（21d）,判定疗效。[结果]临床控制6例,显效15例,有效23例,无效2例,总有效率95.65%[结论]新止骨增生丸与薰洗方熏蒸联合膝关节镜清理术治疗膝关节骨性关节炎疗效显著,值得推广。

止骨增生丸联合艾叶散熏洗治疗膝关节骨性关节炎随机平行对照研究

[目的]观察止骨增生丸联合艾叶散熏洗治疗膝关节骨性关节炎疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将98例门诊患者按就诊顺序编号方法随机分为两组。对照组50例艾叶散(艾叶,花椒,透骨草,红花,防风,麻黄,威灵仙,荆芥,桂枝,独活,海桐皮,白芷),袋药放入适当容器内,加适量水,煮沸,趁热熏洗膝关节,1袋/次,3次/d。治疗组48例止骨增生丸(熟地黄,肉苁蓉,鹿角胶,红参,阿胶,鸡血藤,淫羊藿,骨碎补,莱菔子),4g/次,2次/d;艾叶散熏洗同对照组。连续治疗4周为1疗程。观测临床症状、不良反应。连续治疗3疗程,判定疗效。[结果]治疗组临床控制20例,有效17例,显效7例,无效4例,总有效率91.67%。对照组临床控制19例,有效15例,显效4例,无效12例,总有效率76.00%。治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。[结论]止骨增生丸联合艾叶散熏洗治疗膝关节骨性关节炎,疗效满意,无严重不良反应,值得推广。

新止骨增生丸联合TDP神灯照射治疗老年膝关节骨关节炎随机平行对照研究

[目的]观察新止骨增生丸联合TDP神灯照射治疗老年膝关节骨关节炎疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将108例门诊患者按抽签随机分为两组。对照组54例TDP神灯照射,时间/次,2次/d。治疗组54例新止骨增生丸,6粒/次,3次/d;TDP神灯照射同对照组。连续治疗4周为1疗程。观测临床症状、X线指标、不良反应。连续治疗3疗程,判定疗效。[结果]治疗组临床控制24例,有效18例,无效12例,总有效率77.80%。对照组临床控制19例,有效16例,无效19例,总有效率64.80%。治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。[结论]新止骨增生丸联合TDP神灯照射治疗老年膝关节骨关节炎疗效满意,无副作用,值得推广。

中西医结合治疗膝骨关节炎

目的观察中西医结合治疗膝骨关节炎的临床效果及安全性。方法选取膝骨关节炎患者80例,随机分为观察组与对照组,各40例,观察组采用透明质酸钠注射液关节腔内注射联合止骨增生丸口服治疗,对照组仅行透明质酸钠注射液关节腔内注射治疗,连续治疗5周,对比2组治疗前、后膝关节功能改善、临床疗效及不良反应发生情况。结果 2组治疗前Lysholm膝关节各项评分比较无统计学意义(P>0.05),治疗后各项评分均较治疗前显著下降(P<0.05);观察组治疗后Lysholm膝关节各评分均显著低于对照组(P<0.05);观察组总有效率92.5%,高于对照组的55.0%(P<0.05);2组治疗过程中均未发生明显不良反应。结论透明质酸钠注射液关节腔内注射联合止骨增生丸口服治疗,可有效缓解膝骨关节炎患者疼痛症状,改善其膝关节功能,且无明显不良反应。

中药内服外用治疗骨性关节炎380例疗效观察

目的:研究中医方法治疗骨性关节炎,提高患者的生活质量,减少疼痛与畸形发生。方法:通过总结、分析2000年6月-2006年6月本院采用中药方法治疗骨性关节炎380例,方法均以口服本院自制止骨增生丸,外敷止痛敷药(本院研制),配以中药熏洗进行康复治疗。结果:所有患者均门诊治疗,380例中优200例,良134例,差46例。结论:采用中药口服后多病人的自我感觉症状减轻。疗效满意,可最大限度的提高患者的生活质量。