L-3-正丁苯酞对实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及其机制

目的 基于RhoA/ROCK信号通路探讨L-3-正丁苯酞(L-3-n-butylphthalide, NBP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠的疗效及潜在机制。方法 32只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、EAE组、NBP低剂量组(L-NBP)和NBP高剂量组(H-NBP),每组8只。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55, MOG35-55)作为抗原乳剂免疫诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型。EAE模型制作成功后,L-NBP组和H-NBP组分别以3.25,6.5 mg/(kg·d)NBP腹腔注射,连续28 d。免疫当日起,每7 d记录各组小鼠的体质量,每天进行神经功能障碍评分;对脊髓组织进行HE染色和劳克坚牢蓝(Luxol fast blue, LFB)染色,观察病理改变;使用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测外周血白细胞介素-10(IL-10)、IL-1β、IL-6和IL-18含量;real time-PCR检测脊髓组织炎症相关因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF受体1(TNFR1)、IL-1β的表达;Western blot检测RhoA、ROCKⅠ及ROCKⅡ蛋白表达情况。结果 与对照组相比,EAE组小鼠体质量下降,神经功能障碍评分、组织病理学评分升高,IL-10含量降低,IL-18、IL-6和IL-1β含量增加,TNF-α、TNFR1及IL-1β mRNA表达升高,RhoA、ROCKⅠ及ROCKⅡ蛋白表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与EAE组相比,L-NBP和H-NBP组小鼠体质量增加,发病潜伏期延长,高峰期延迟,神经功能障碍评分、组织病理学评分降低,IL-10含量增高,IL-1β、IL-6和IL-18含量降低,TNF-α、TNFR1及IL-1β mRNA表达降低,RhoA、ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与L-NBP组相比,H-NBP组小鼠体质量增加,发病潜伏期延长,高峰期延迟,神经功能障碍评分、组织病理学评分降低,IL-10含量增高,IL-1β、IL-6和IL-18含量降低,TNF-α、TNFR1和IL-1β mRNA表达降低,RhoA和ROCKⅡ蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NBP能够减轻EAE小鼠外周及中枢炎症反应,进而改善EAE的神经障碍症状,其作用机制可能是通过抑制RhoA/ROCK信号通路来实现的。

氯代正丁苯酞在大鼠肝微粒体中的代谢研究

用大鼠肝微粒体体外温孵方法进行了氯代正丁苯酞（ＣＢＰ）代谢转化研究，优化了温孵体系的组成，建立了反相ＨＰＬＣ－ＤＡＤ在线同时分离检测ＣＢＰ及其４个体外代谢产物的分析方法，并比较了在苯巴比妥（ＰＢ）与３－甲基胆蒽（３－ＭＣ）诱导的微粒体中代谢差别。利用ＴＬＣ、柱色谱与制备ＨＰＬＣ分离纯化了３个主要代谢产物，并进行了ＮＭＲ，ＭＳ，ＵＶ等光谱鉴定，确定了其主要代谢产物为γ－羟基氯代正丁苯酞与β－羟基氯代正丁苯酞及它们的立体异构体。

正丁苯酞-聚乳酸聚羟基乙酸微球的制备及性能评价

目的优选正丁苯酞-聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)微球的制备工艺,并对制备微球的性能进行检测。方法使用O/W型乳化溶剂挥发法制备正丁苯酞-PLGA微球,以载药量、包封率为观察指标,通过单因素实验优选制备工艺,并观察体外释药性能。采用生物显微镜观察微球的表面形态并测量粒径。结果最佳制备工艺为投药量15mg,PLGA 50mg,聚乙烯醇质量分数为2%,搅拌转速为700rpm。正丁苯酞的载药量(14.49±0.56),包封率(82.89±1.46)。所制备的微球光滑圆整、粒径均一,平均粒径约为(23.6±0.87)nm。体外释药实验表现为突释。结论采用O/W型乳化溶剂挥发法初步制备了正丁苯酞-PLGA微球,优选的制备工艺条件稳定,制备方法重现性良好。

6－甲氧基正丁苯酞在大鼠肝微粒体中的代谢研究

报道了用ＧＣ／ＭＳ方法及衍生化技术研究６甲氧基正丁苯酞（ＭＢＰ）在大鼠肝微粒体中的代谢转化结果。６甲氧基正丁苯酞在苯巴比妥（ＰＢ）诱导的大鼠肝微粒体中主要转化为３羟基、γ羟基取代物。

6－甲氧基正丁苯酞的体内代谢转化研究

大鼠用６－甲氧基正丁苯酞（ＭＢＰ）灌胃，收集０～２４ｈ尿液，经酶水解、提取浓缩、衍生化处理后用ＧＣ／ＭＳ分析。在大鼠０～２４ｈ尿液中，６－甲氧基正丁苯酞原药含量很低，主要以代谢物形式存在，依次为Ｃ－６脱甲基产物、Ｃ３－Ｃα环氧化物、γ－羟化物、β－羟化物以及两个次级代谢产物。６－甲氧基正丁苯酞体内代谢结果与其在肝微粒体中代谢结果基本一致。

正-丁苯酞在大鼠和人体内、外代谢产物的初步鉴定及与肝CYP450同工酶的相互作用

目的：对正-丁苯酞（n-Butylphthalide，NBP）进行系统的药物代谢和与药酶相互作用的研究。方法：采用稳定同位素示踪和LC-MS／MS相结合的技术，研究NBP在大鼠、人体外和体内的代谢产物，利用体外肝微粒体法配合体内实验鉴定了参与NBP代谢的CYP450同工酶类型，探讨其与CYP450主要同工酶之间的代谢性相互作用。结果：初步鉴定了NBP在人体外肝微粒体孵育液、尿液和血浆中的9种I相代谢产物及相关Ⅱ相结合产物，新发现NBP在大鼠体外肝微粒体孵育液、尿液和粪便中的7种I相代谢产物。大鼠和人体参与NBP代谢的主要CYP450同工酶是CYP2E、3A和2C；发现NBP在大鼠和人体内各产物的生成均由多个同工酶催化完成，同一种同工酶也参与了多个NBP产物的生成，但参与各个产物生成的同工酶的种类和比例略有不同。当大鼠体外NBP浓度达到50μM时对CYP2C有一定抑制作用，达到200μM时对CYP1A、2C和2D有一定抑制作用；人体外NBP浓度达到15μM时对CYP2C19有一定抑制作用；大鼠NBP灌胃给药160mg·kg-1（连续5日）和静脉给药20mg·kg-1（连续4日）对肝脏CYP450主要同工酶不存在具有临床意义的诱导和抑制效应。结论：本研究较全面地获得了NBP在大鼠和人体内的代谢途径信息，为安全、合理用药、预测药物代谢性相互作用，以及新药的进一步开发提供了有价值的参考依据。