端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用

目的 探讨端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用 .方法 脂质体介导端粒酶正义、反义及无义寡核苷酸转染鼻咽癌 CNE1和 CNE2 Z细胞 ,MTT法检测细胞增殖能力 ,流式细胞仪检测细胞周期 .结果 端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样可抑制鼻咽癌 CNE1和 CNE2 Z细胞的生长 ,且呈剂量和时间依赖性 .1.5 μm ol· L- 1正义寡核苷酸与 CNE1细胞共培养 6 ,12 ,2 4和 4 8h时抑制率分别为16 .3% ,15 .6 % ,2 0 .2 %和 2 6 .3% ,浓度为 4 .5 μmol· L- 1时抑制率分别为 2 2 .5 % ,2 1.5 % ,32 .4 %和 39.9% ;在 CNE2 Z细胞 ,浓度为 1.5μmol· L- 1 时抑制率分别为 7.7% ,2 5 .2 % ,2 7.0 %和 2 8.8% ,浓度为 4 .5 μmol· L- 1时抑制率分别为18.1% ,30 .1% ,32 .8%和 32 .9% ;同时流式细胞仪检测到凋亡峰 ,含量分别为 2 5 .3%和 19.3% .无义寡核苷酸无此作用 .

端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响

背景与目的:近年研究表明,端粒及端粒酶与肿瘤发生密切相关。端粒酶反义寡核苷酸直接作用于端粒酶或诱导肿瘤细胞分化均可使端粒酶活性下降,抑制肿瘤生长。而用端粒酶反义寡核苷酸直接抑制端粒酶活性是否可引起肿瘤细胞再分化,尚不清楚。由于端粒DNA重复序列是以端粒酶RNA为模板合成的,因此端粒DNA可以和端粒酶正义寡核苷酸互补结合。这种结合是否也能影响肿瘤细胞的生长,值得研究。本研究正是要探讨端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的作用。方法:脂质体介导正、反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测细胞角蛋白表达,同时观察细胞形态学变化。结果:端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样可抑制CNE1和CNE2Z细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性。1.5、3.0、4.5、6.0μmol/L正义寡核苷酸处理CNE1细胞,6h抑制率分别为16.28%、19.38%、22.48%和23.26%,48h分别达26.26%、38.89%、39.90%和38.89%;CNE2Z细胞6h抑制率分别为7.69%、8.24%、18.13%和20.32%,48h分别为28.84%、28.88%、32.89%和31.54%。正、反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞形态趋向分化成熟。结论:端粒酶正、反义寡核苷酸均可抑制鼻咽癌细胞的生长,并促进细胞分化。

硫代修饰bFGF寡核苷酸对B16细胞和L1210细胞增殖的影响

目的研究bFGF寡核苷酸被硫代修饰后对肿瘤细胞增殖的影响。方法设计、合成bFGF寡核苷酸,用聚乙烯亚胺(jetPEI)介导bFGF寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞和白血病L1210细胞,MTT法检测细胞增殖;微分干涉荧光显微镜观察硫代寡核苷酸在细胞中的定位;流式细胞仪分析寡核苷酸转染效率。结果正/反义硫代寡核苷酸被jetPEI介导成功转染入B16细胞和L1210细胞,在B16细胞均主要分布于细胞核,在L1210细胞分别主要分布于细胞核和细胞质。反义硫代寡核苷酸呈剂量依赖地抑制B16与L1210细胞增殖,且核苷酸突变能降低其对2种肿瘤细胞的增殖抑制。相应非修饰反义寡核苷酸也能显著抑制2种细胞增殖。正义硫代寡核苷酸能呈剂量依赖效应显著影响B16细胞增殖,显著高于非修饰正义寡核苷酸,且其抑制作用并未因核苷酸突变而降低。正义硫代寡核苷酸并不显著L1210细胞增殖,与非修饰正义寡核苷酸的效应基本一致。结论硫代修饰并未明显影响bFGF反义寡核苷酸在细胞内特异性结合核酸的性质,硫代反义寡核苷酸仍能以反义机制抑制肿瘤细胞增殖,但硫代修饰可能改变了bFGF正义寡核苷酸的某些性质,致使其于细胞内以一种非核酸特异性机制影响肿瘤细胞增殖。

端粒酶11-聚体寡核苷酸联合依托泊苷对肺癌细胞的作用

目的:探讨依托泊苷(VP 16 )单独或联合端粒酶11 聚体寡核苷酸对肺腺癌细胞的作用。方法:VP 16单独或联合脂质体介导的端粒酶11 聚体寡核苷酸与肺腺癌细胞株共培养,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;以TRAP ELISA法半定量测定细胞端粒酶活性。结果:VP 16抑制肺腺癌细胞株SPC A1细胞生长,抑制率18.9% ,下调端粒酶活性,与未加VP 16比较均有明显不同(P <0 .0 1) ,可诱导细胞凋亡。VP 16联合反义寡核苷酸(ASODN)与联合正义寡核苷酸(SODN)对SPC A1细胞的抑制率分别为4 3.5 %和4 1.0 % ,两者差异无显著性(P >0 .0 5 ) ;联合用药效果明显优于单用VP 16 ,差异有显著性(P <0 .0 1)。结论:化疗药联合短链正、反义核苷酸可抑制肺癌细胞生长,较二者单独应用可提高疗效。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制甲状腺癌血管生成的效应

目的探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制甲状腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达及内皮细胞生长的效应。方法设计合成靶向VEGF的ASODN转染人髓状甲状腺癌细胞系(TT)细胞,并制备相应条件培养基作用内皮细胞ECV304,设正义寡核苷酸(SODN)和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态,RT PCR、免疫细胞化学法检测TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达,四氮唑蓝法检测TT和ECV304细胞生长抑制率(IR),流式细胞仪、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测ECV304细胞凋亡状态。结果ASODN组TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达显著低于SODN和对照组(P<0.01),但IR差异无统计学意义(P>0.05);各转染组ECV304细胞IR差异亦无统计学意义(P>0.05);而经各ASODN组TT细胞条件培养基作用的ECV304细胞生长明显受抑,IR(分别为0.21±0.03、0.31±0.01、0.42±0.22)显著高于SODN组(0.05±0.03,P<0.01),并伴明显细胞凋亡,上述效应呈浓度依赖性。结论ASODN可通过特异性封闭甲状腺癌细胞VEGF表达,抑制内皮细胞生长,干扰肿瘤血管生成。

反义寡核苷酸阻遏角蛋白14的表达

目 的 研 究 脂 质 体 介 导 角 蛋 白 K14 反 义 寡 核 苷 酸 (ASODN )阻 遏 人 角 质 形 成 细 胞 K14 基因 和 蛋 白 的 表 达 及 抑 制 体 外 增 殖 活 性 的 效 果 。 方 法 人 表 皮 角 质 形 成 细 胞 原 代 培 养 ,3 ￣ 10 代 用 于 实验 ,利 用 脂 质 体 将 人 工 合 成 的 正 义 、反 义 及 错 配 K14 寡 核 苷 酸 基 因 片 段 导 入 角 质 形 成 细 胞 ,应 用 流 式 细胞 仪 、逆 转 录 聚 合 酶 链 反 应 (RT-PCR )和 免 疫 组 化 (SABC )方 法 检 测 反 义 寡 核 苷 酸 对 角 质 形 成 细 胞 的 细胞 周 期 、K14 基 因 和 蛋 白 表 达 的 影 响 。结 果 脂 质 体 介 导 的 K14 反 义 寡 核 苷 酸 转 染 角 质 形 成 细 胞 后 ,能有 效 地 抑 制 角 质 形 成 细 胞 中 K14 基 因 的 表 达 ;48 h 后 可 阻 遏 K14 蛋 白 表 达 ;流 式 细 胞 仪 检 测 见 反 义 寡核 苷 酸 处 理 组 细 胞 周 期 发 生 明 显 改 变 ,G 期 细 胞 百 分 率 上 升 ,S 期 细 胞 百 分 率 下 降 。 而 正 义 寡 核 苷 酸 1组 、错 义 寡 核 苷 酸 组 及 空 白 对 照 组 均 无 此 变 化 。 结

COX-2反义寡核苷酸抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的研究

目的通过研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用并分析其抑制原理,探讨COX-2反义寡核苷酸对乳腺癌的作用意义。方法 MDA-MB-231细胞分为3组培养:对照组、正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸组。MTT实验检测细胞的增殖情况;转染48 h后,Western blot检测COX-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果与对照组、正义寡核苷酸组比较,COX-2反义寡核苷酸转染的细胞增殖受到明显抑制;蛋白表达明显下调;G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞所占比例显著降低(P均<0.05)。结论COX-2反义寡核苷酸可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖;下调COX-2蛋白的表达;并调节细胞周期的分布。