正交直观分析法和新复极差法优化苦瓜SRAP反应体系研究

以苦瓜为试材,采用正交直观分析法和新复极差法相结合的方法,对影响苦瓜SRAP反应体系的5种因素(dNTP浓度、模板DNA、引物浓度、Mg2+浓度及Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化筛选,以期优化苦瓜SRAP的PCR反应体系。结果表明:苦瓜SRAP分析的优化反应体系为20μL PCR反应体系中含有1×PCR buffer,250μmol/L dNTP,50ng模板DNA,1.2μmol/L引物,1.5mmol/L Mg2+,1.5UTaq DNA聚合酶。

桃SSR反应体系的优化

以‘新大久保’桃为试材,利用正交设计直观分析法和2因素完全随机试验优化了桃SSR技术中PCR反应体系.试验结果表明,适宜桃遗传分析的SSR技术体系为:在25 μL反应体系中Taq DNA聚合酶和DNA最适用量分别为1 U和50～100 ng;Mg2+ 、dNTP和引物最适终浓度分别为1.5～2.0 mmol/L、0.20～0.28 mmol/L和0.2～0.6 μmol/L.利用30个桃品种验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在100～300 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好.

松散体灌浆加固试验研究

由于软岩巷道围岩松散、强度低、胶结程度差,已严重影响矿山的正常生产。针对此问题,采用自制的试验装置对松散体试件进行了室内灌浆试验研究,对比了不同浆液配比的灌浆效果。试验结果表明灌浆后松散体试件的强度及力学参数都有了显著的提高,而浆液的配比不仅对浆液渗透范围有影响,而且对灌浆结石体的力学特性也影响显著。最后,通过正交直观分析法计算得到了影响灌浆量和浆液扩散半径的主次因素依次为浆液水灰比、灌浆压力、介质析水率,并给出了灌浆量及渗透半径与各影响因素的数学回归模型。

梨属野生种质资源SRAP-PCR反应体系优化研究

采用正交直观分析法和新复极差法对影响梨属野生种质资源SRAP-PCR反应的5种因素(Mg2+浓度、d NTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶、模板DNA)4个水平进行优化筛选。结果表明,优化后的梨属SRAP-PCR反应体系为25μL,包括10×PCR buffer 2.5μL,2.0 mmol/L Mg2+,200μmol/L d NTPs,0.4μmol/L引物,1.5 U Taq酶,60 ng模板DNA。