正向和反向重复RNA介导的抗马铃薯Y病毒基因工程比较研究

RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)5'端反向重复cDNA序列和正向重复cDNA序列(DR),分别构建植物表达载体pROK-IR和pROK-DR,利用农杆菌介导方法转化烟草NC89,比较这2种转基因烟草在RNA介导抗病性方面的差异。抗病性检测表明,转化IR和DR的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,但转化IR序列可大大提高抗病植株在转基因植株中的比例。分析结果表明所获得的抗病性为RNA介导的抗病性,是RNA沉默的结果。这一研究结果为利用IR策略进行抗病毒遗传育种提供了理论依据,并为讲一步开展RNA介导抗病性的机制研究奠宗了基础。

一例9p正向重复伴末端缺失综合征胎儿的遗传学分析

目的应用下一代测序（next generation sequencing,NGS）技术鉴定1例G显带核型分析无法完全辨别的胎儿9号衍生染色体，探讨其重排的机制以及基因型与表型的对应关系。方法采集1例超声提示胎儿异常的孕妇的羊水样本进行G显带染色体核型分析，同时分析其亲代外周血的染色体核型。通过脐血穿刺术获取胎儿脐血样本进行NGS检测。结果胎儿羊水细胞的染色体核型为46，XX，der（9）（？：：p21→qter），其父母染色体核型均未见异常。胎儿脐血的NGS检测发现9p21．3p24．2（4454279—25126275）重复和9p24．2p24．3（10001—4442364）缺失，长度分别为20．67Mb和4．43Mb。前者覆盖9p重复综合征的致病区域，后者与9p缺失综合征致病区域部分重叠，并覆盖了46，XY sex reversal 4的致病区域。将测序数据通过数据库进行比对分析，提示9p21．3p24．2重复为正向重复。回顾分析9p21．3p24．2片段重复的形态特征，也证实9p21．3p24．2重复为正向重复。因此，胎儿的核型最终被确定为46，XX，der（9）dirdup（9）（p21．3p24．2），del（9）（p24．2p24．3）。结论将G显带染色体核型分析与NGS相结合，可以有效地鉴定dir dup del（9p）。分析dir dup del（9p）的形成机制及其基因型与表型的关联，可以为临床遗传咨询和再发风险评估提供参考。

德氏乳杆菌与嗜热链球菌ISL3家族转座子的比较与分析

对存在于德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)和嗜热链球菌(Lactobacillus delbrueckii)中的3类ISL3家族转座子进行了筛选和定位,确定了各自的反向重复序列(IRs)和其外部的正向重复序列(DRs).观察到3类转座子的IRs有部分相同(5’-GGCTCTATAATTT-3’//5’-TTGACAAAGAGCC-3’),碱基A和T丰富的8 bp的DRs中保守碱基均为第5位T.3类转座子中,转座酶之间约30%的相同性,与IRs的部分相同性以及对最保守碱基的识别有关.分析结果为后续进行相关的分子实验与研究或建立简单转座子的数据库打下基础.

鸡痘病毒282E_4株2．2kbTK基因序列分析

将鸡痘病毒２８２Ｅ４弱毒株基因组中的３．７ｋｂＨｉｎｄⅢ片段克隆到ＫＳ（—）质粒中，亚克隆后，获得含ＴＫ基因正反方向插入的２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩ片段的质粒ｐＫＦＡ和ｐＫＦＢ，进而构建出正反方向的系列嵌套缺失质粒。用Ｔ７、Ｔ３引物所做的核苷酸序列分析表明，２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩＴＫ基因序列长为２１５９ｂｐ，含有两个完整的读码框架（ＯＲＦ）Ｘ和ＴＫ，并确证了ＴＫ基因内存在单一酶切点ＮｃｏＩ。由该片段内的重复序列分析发现，在Ｘ和ＴＫ两个ＯＲＦ侧翼存在１５ｂｐ的正向重复序列。

鳙小卫星pBC174的序列结构特性分析

用双脱氧DNA测序法对鳙 (Aristichthysnobilis)小卫星 pBC174进行序列测定。其长度为 1873bp。在这段序列中 ,A T含量高达 6 4 % ,从 15 11碱基处开始 ,含有多聚腺嘌呤 多聚胞嘧啶 ,即 (AC) 13 的短重复序列的隐蔽微卫星。序列中含有 2 0种限制性内切酶的 5 7个酶切位点 ,97个不同的正向重复序列 ,其中 71个 8bp、10个 9bp、10个 10bp、2个 11bp和 4个 17bp。根据序列分析 ,认为小卫星 pBC174是由富含A的重复序列TAAAGAAA和富含T的重复序列TTTTTACA等 2个不同的核心序列组成。

玉米两个功能未知转录因子基因的转录后加工

ZmBH、ZmWD是玉米中分别具有转录因子bHLH和WD重复蛋白结构的两个功能未知基因,在不同组织中及各种胁迫诱导条件下,这两个基因均发生不同程度的剪接,产生大小各异的转录本.序列分析发现其剪接方式与经典的mRNA剪接不同,即剪接位点的选择不符合GT-AG或AT-AC规则,而是在剪接位点具有短正向重复序列SDR(Short-direct repeats).ZmBH的转录后加工导致序列发生移码而提前终止,而ZmWD则缺失了大部分结构域序列,经由这种方式产生的转录后加工产物可影响蛋白编码,因而可能是对这两个基因功能进行调控的一种方式.

9p重复伴8p末端缺失胎儿的遗传学分析并文献复习

目的对1例产前异常胎儿及其双亲行细胞遗传学及分子遗传学研究,以明确胎儿异常遗传物质的来源及其发生机制。探讨染色体微阵列分析(Chromosomal Microarray Analysis,CMA)在临床产前诊断中的临床价值。方法对患儿脐血及其双亲外周血进行常规G显带分析,进一步应用CMA对患儿进行全基因组拷贝数分析。结果 G显带核型分析提示胎儿脐血染色体核型结果为46,XX,der(8)(?::p23→qter),其母亲外周血核型结果为46,XX,t(8,9)(p23,p22),父亲核型未见异常。胎儿衍生8号染色体来源于携带平衡易位染色体的母亲。CMA检测提示胎儿存在9p21.3-p24.3区域22.666Mb的重复片段及8p23.2-p23.3末端4.413Mb的缺失片段。胎儿核型最终修正确定为46,XX,der(8)t(8,9)(p23.2,p21.3)mat。结论胎儿染色体9p重复伴8p末端缺失可能造成出生后的严重异常表型,本文对该患胎进行了产前诊断及遗传学分析,为临床产前诊断和遗传咨询提供了有力依据。