增生性疤痕组织与正常上皮组织FTIR光谱研究

通过对40例疤痕组织和正常皮肤组织的ETIR光谱比较分析发现,由于个体差异,其光谱均可分为三种不同类型。此外,疤痕组织中的胶原、蛋白质、核酸和脂类等生物大分子的吸收峰强度均在不同程度上高于正常皮肤组织,但两者的A_(1083)/A_(1548)并无明显差异。提示疤痕组织中的细胞仍属正常生长,治疗中不应损伤。

骨形成蛋白(BMP)-2/4,-5与IA型BMP受体在口腔正常上皮、良性病变及癌变中的表达分析

认识 BMP及其受体与口腔正常上皮及其癌变的关系 ,有助于深入了解口腔上皮癌变的机理。本文用免疫组织化学方法对 BMP- 2 / 4,- 5与 BMP受体 BMPR- IA在口腔颊部粘膜正常上皮、良性病变和癌变中的表达进行观察和半定量分析。标本包括 :9例正常上皮 (normal buccal m ucosa,NB)、 8例慢性炎症 (nonspecific chronic inflam mation,NCI)、 7例过度角化 (hyperkeratosis,HK)、 5例乳头状瘤 (squam ous cell papilloma,SCP)、 2 9例鳞癌 (squamous cell carcinoma,SCC)、10例癌旁上皮 (epithelium im mediately adjacent to carcinom a,EAC)以及 6例硬腭粘膜上皮 (norm al mucosa of hard palate,NHP)。结果显示 :BMP- 2 / 4,- 5与 BMPR- IA在口腔粘膜的正常与良性病变上皮中有弱的和不均一的阳性表达 ,NB与 NHP无明显差别。而除 3例 SCC外 ,其它 SCC几乎均有程度不一的阳性表达。在 EAC中的表达接近于 SCC,二者明显高于正常与良性组。此外 ,转移在淋巴结中的癌细胞的 BMP- 2 / 4与 BMP- 5阳性程度略高于原发灶的癌细胞。本文认为 :BMP- 2 / 4,-5与 BMPR-

Raft培养可诱导人正常上皮细胞分化

人的正常上皮细胞在一般的体外培养情况下很难分化成类似于机体的上皮样结构。为了得到上皮样结构进行相关研究 ,近年来 ,国外建立了Raft(船式 )培养方法。本文在长期从事细胞培养的工作中 ,摸索出了适合国内一般实验室条件的Raft细胞培养操作方案 ,模拟体内人皮肤结构的分化层次 ,以纤维细胞与胶原作为混合基质 (作为上皮细胞的滋养物 ) ,同时加入一些生长因子、激素和必需的蛋白等成分。将纤维细胞、胶原和添加成分做为基层过夜培养 ,次日将培养好的上皮细胞种到上面 ,过夜培养后即为“skinequivalent”(皮肤等价物 ) ,将“皮肤等价物”移到一种网状金属架上以使细胞在气—液状态下培养 ,在这种条件下 ,培养中的上皮细胞与体内上皮细胞自然生长的状态、环境非常类似 ,在体外导致上皮细胞分化成清晰可见的层次。此项技术在临床治疗烧伤以及其它皮肤损伤的疾病方面有潜在的应用价值 ,也为研究皮肤的正常生理功能以及癌症的发生、发展以及治疗提供了一种模型。

人正常上皮细胞的原代培养

传统的人正常上皮细胞原代培养方法存在培养率低、培养出的细胞活性差、操作繁琐等缺点,为了解决这些问题,近年来国内外的众多研究者对人正常上皮细胞的原代培养过程进行了大量研究和不断改进。笔者主要综述人正常上皮细胞分离纯化的一些方法(如组织块分离法、酶消化分离法、机械刷取法、红细胞裂解法、Percoll分层液密度梯度分离法等)以及培养传代中可应用到的一些方法(如无血清培养基联合低浓度血清培养基培养法、鼠尾胶原包被法、玻璃培养瓶联合塑料培养皿培养法);其次阐述了人正常上皮细胞的生物学特性及免疫细胞化学染色法、台盼蓝拒染法等生物学性状检测的方法,并且对培养中无菌操作、培养时和分离时细胞外环境的条件、差速贴壁的次数、添加剂的选择与用量等影响因素作了归纳。

阿帕替尼治疗进展期胃癌对患者血清正常上皮细胞特异性-1及免疫功能的影响

目的探讨阿帕替尼治疗进展期胃癌的临床疗效及对患者血清正常上皮细胞特异性-1(NES1)及免疫功能的影响。方法将118例进展期胃癌患者按治疗方案不同分为观察组(n=68)和对照组(n=50),观察组给予阿帕替尼^(+)替吉奥治疗,对照组给予替吉奥治疗,观察两组疗效及总生存时间,检测CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞及NES1水平。结果观察组患者疗效优于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。治疗前,两组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞比例比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);治疗后,观察组患者CD4^(+)T淋巴细胞比例明显高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞比例明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。治疗前,两组患者血清NES1水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);治疗后,两组患者血清NES1水平均升高(P﹤0.05),且观察组血清NES1水平明显高于对照组(P﹤0.01)。观察组患者中位生存时间为9个月(95%CI:8.64~9.36),明显长于对照组的5个月(95%CI:4.51~5.49),差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论阿帕替尼治疗进展期胃癌有较好的临床疗效,改善免疫功能,升高血清NES1水平。

正常上皮细胞特异性基因甲基化在胃癌发病机制中的研究

目的探讨正常上皮细胞特异性-1基因(NES1)在胃正常上皮细胞和胃癌细胞株中的表达及其受甲基化调控的影响。方法分别培养胃癌细胞株MKN-28(高分化)、SGC-7901(中分化)、AGS (中分化)、MKN-45(低分化)、HGC-27(未分化)和原代正常胃上皮细胞。提取细胞RNA,荧光定量PCR检测NES1在各细胞株中的表达。以不同浓度的DNA甲基化酶抑制剂5′杂氮-2′-脱氧胞嘧啶(5-aza- dC)处理胃癌细胞株,荧光定量PCR检测处理后NES1mRNA表达。同时提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后甲基特异性PCR(MSP)分析其CpG岛甲基化状态。结果NES1mRNA在肿瘤细胞株中的表达较胃正常上皮细胞明显降低。甲基化检测显示,NES1在胃癌细胞株中均存在不同程度的外显子3 CpG岛甲基化。NES1表达降低的胃癌细胞株经5-aza-dC去甲基化药物处理后NES1表达均有所上调。结论NES1在一些胃癌细胞株中的低表达与该基因外显子3 CpG岛甲基化有关。5-aza-dC可使NES1表达降低的胃癌细胞株重新表达NES1mRNA,再次证明了NES1基因在胃癌细胞株中的低表达与甲基化有关。

正常上皮细胞特异性-1基因超甲基化在肝癌发病机制中的作用

目的：探讨正常上皮细胞特异性-1基因在正常肝细胞和肝癌细胞株中的表达及其甲基化状态对该基因表达和细胞生物学的影响。方法用实时PCR 和实时 QPCR 方法检测NES1 mRNA在肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞L02中的表达，用MSP检测基因甲基化状态。以不同浓度DNA甲基化酶抑制剂（5-aza-dC）处理肝癌细胞株后，分别用实时QPCR检测NES1 mRNA表达量， MTT法检测细胞的存活率，蛋白印迹（ WB）检测细胞周期蛋白cyclin D1、P21和P53表达水平。结果NES1 mRNA在肝癌细胞株中的表达量较正常肝细胞明显降低。肝癌细胞株中NES1外显子3 CpG岛的甲基化程度远远高于正常肝细胞。肝癌细胞株去甲基化后，NES1 mRNA表达水平有所上调，细胞存活率明显下降，P21和P53表达水平上升，cyclinD1表达水平下调。结论 NES1在肝癌细胞株中的低表达与该基因外显子3 CpG岛甲基化有关。 NES1基因外显子3甲基化可能是肝癌细胞中NES1表达缺失的分子机制。去甲基化药物5-aza-dC可通过阻滞细胞周期而抑制肝癌细胞株的增殖。

伏马菌素B_1对人正常食管上皮细胞细胞周期相关基因mRNA表达的影响

本研究采用体外实验,分离鉴定人正常食管上皮细胞,用RT-PCR方法测定伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)对细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E、P16、P21、P27mRNA表达的影响。结果表明:FB1作用人正常食管上皮细胞后可以在转录水平上影响Cyclin D1、Cyclin E、P16、P21、P27基因的表达,导致Cyclin D1mRNA高表达,Cyclin E、P16、P21、P27基因mRNA低表达。提示,细胞周期相关基因的异常表达与癌症密切相关,该研究从体外实验进一步证实FB1可能与人类食管癌的发生有关。

Twist基因逆转录病毒载体的构建及其诱导正常乳腺上皮细胞发生上皮间质转化

目的构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响。方法酶切pcDNA3/mycTwist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-myc-Twist。通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞。通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达。免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达。Transwell^(?)法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell^(?)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.01)。结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭。

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对哈萨克族食管正常上皮细胞甲基转移酶表达及活性的影响

目的体外实验检测N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对哈萨克族食管正常上皮细胞DNA甲基转移酶的表达及活性改变,以此探讨亚硝胺类化合物致食管上皮组织发生恶变的表遗传机制。方法以0、0.75、1.50和3.00μg/ml MNNG处理哈萨克族正常食管上皮细胞24 h,采用高效液相色谱法(HPLC)和DNA甲基转移酶活性检测试剂盒检测细胞基因组DNA整体甲基化水平和DNA甲基转移酶活性的改变;并采用RT-PCR和Western Blot法检测DNA甲基转移酶mRNA及蛋白表达。结果 1.50和3.00μg/ml MNNG组与对照组比较细胞基因组DNA整体甲基化水平分别降低8.07%和17.58%,且各染毒组之间比较差异有统计学意义(F=60.342,P<0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b酶活性均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.967,P<0.01;r=0.897,P<0.01;r=0.716,P<0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA及蛋白表达水平均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.814,P<0.05;r=0.732,P<0.01;r=0.578,P<0.05;r=0.944,P<0.01;r=0.900,P<0.01;r=0.887,P<0.01)。结论 MNNG可致哈族正常食管上皮细胞基因组DNA整体甲基化水平下降,提高DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表达及活性。

不同热处理方式的α-乳白蛋白对正常人肠道上皮细胞株增殖、周期及凋亡的影响

以经过巴氏杀菌方式(63℃加热30 min、72℃加热15 s、85℃加热15 s、95℃加热10 min)处理的α-乳白蛋白(α-lactalbumin,α-LA)为对象,研究其对正常人肠道上皮细胞株(human intestinal epithelial cells,HIEC)增殖、周期及凋亡的影响,并比较不同热处理对HIEC作用效果的差异性。在通过圆二色光谱测定α-LA二级结构、分析不同热处理方式对α-LA二级结构影响的基础上,模拟婴儿肠道条件对α-LA进行体外消化,采用CCK-8法和流式细胞术检测热处理消化后α-LA作用HIEC 48 h后,对细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果显示:经不同加热处理及未经热处理的消化后α-LA均对HIEC增殖具有促进作用,且在一定范围内促进效果随α-LA质量浓度升高而加强,在α-LA质量浓度为0.10 mg/mL、72℃加热15 s时促进效果最为显著(P<0.05);经不同加热处理及未经热处理的消化后α-LA在质量浓度为0.10 mg/mL、作用HIEC 48 h后,G0/G1期细胞比例显著降低(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。综上,热处理α-LA可以明显促进HIEC增殖,其作用机制可能与分裂细胞的比例增加从而抑制细胞凋亡有关。α-LA应用于婴儿配方产品中或可提高婴儿免疫能力,推荐添加量为0.10 mg/m L,推荐热处理方式为72℃加热15 s,但仍需进一步研究。

脂多糖对正常人肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-кB通路的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞(Hi BECs)中TLR4-NF-кB通路的影响。方法 Hi BECs常规细胞培养后,加入不同浓度的LPS(0.1、1、4、8、10μg/m L),刺激不同时间(3、6、9、12、24 h),用Realtime RT-PCR分析细胞内TLR4和NF-κB mRNA表达水平。结果 LPS刺激Hi BECs后TLR4和NF-κB mRNA表达水平均增加,Hi BECs在受到LPS(4μg/m L)刺激后TLR4和NF-κB mRNA表达水平随时间延长而增加,于6小时达高峰,之后下降。以相同时间(6 h)刺激Hi BECs后,TLR4和NF-κB mRNA表达水平随LPS浓度增高而增加,LPS浓度为4μg/m L时达高峰,之后下降。结论 LPS可以激活Hi BECs中的TLR4-NF-кB通路,并且有时效和量效依赖关系。

p27^(kip1)在子宫颈正常鳞状上皮、CIN和浸润性鳞状上皮癌中的表达

为探讨细胞周期素依赖性激酶抑制因子 p27^(kip1)(p27)在宫颈上皮恶性转化中的作用,选取在 Shinshu 大学医院进行宫颈活检或子宫切除术的标本72例,进行 p27、cyclin E、cdk2和 Ki-67的免疫组化染色。包括30例正常组织(15例来自增生期,15例来自分泌期),17例宫颈上皮内瘤变(CIN):1级3例、2级7例、3级7例及25例宫颈鳞状细胞癌、(18例非角化型,7例角化型)。光镜下评价 p27、cyclin E、cdk2和

组蛋白乙酰化抑制哮喘易感基因ADRB2的表达

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)及组蛋白乙酰化转移酶(histone acetyltransferase,HAT)调控的组蛋白乙酰化修饰对β2肾上腺素受体(β2-drenergic receptor,ADRB2)基因的影响。方法将ADRB2启动子质粒(pADRB2-1918)转染到人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞后,分别加入丁酸钠(sodium butyrate,SoB)和曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA),将pADRB2-1918质粒和腺病毒E1A相关的300kDa蛋白(p300)质粒共转染到BEAS-2B细胞,使BEAS-2B细胞中组蛋白乙酰化,利用双荧光素酶报告基因检测经SoB、TSA及p300处理后BEAS-2B细胞中ADRB2启动子活性。向BEAS-2B细胞中分别加入SoB和TSA,或向BEAS-2B细胞中转染p300质粒,使BEAS-2B细胞中组蛋白乙酰化,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测BEAS-2B细胞中ADRB2mRNA的相对表达,利用Western blot法检测BEAS-2B细胞中ADRB2蛋白的表达。结果在BEAS-2B细胞中分别加入SoB、TSA和转染p300质粒,参与BEAS-2B细胞中组蛋白乙酰化,发现BEAS-2B细胞中ADRB2启动子活性、mRNA和蛋白的表达均较对照组下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论组蛋白乙酰化可下调哮喘易感基因ADRB2的表达。

DPEP1在结直肠上皮内瘤变组织中的表达及临床意义

目的:通过检测二肽酶1(dipeptidase 1,DPEP1) mRNA及其蛋白质在人结直肠上皮内瘤变组织中的表达,探讨其与临床病理特征的关系。方法:应用实时荧光定量(real-time fluorescence quantitative,RFQ)-PCR和免疫组织化学方法分别从mRNA和蛋白质水平检测DPEP1在60例结直肠上皮内瘤变(腺瘤并高级别上皮内瘤变35例,腺瘤并低级别上皮内瘤变25例)组织,结直肠正常黏膜上皮组织30例,高分化腺癌组织20例石蜡包埋标本中的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果:DPEP1 mRNA在35例高级别上皮内瘤变,25例低级别上皮内瘤变组织中的表达量分别为0.560±0.052和0.328±0.040(P=0.001),在60例结直肠上皮内瘤变组织、30例结直肠正常黏膜上皮组织及20例高分化腺癌组织中的表达量分别为0.684±0.108、0.235±0.045和0.832±0.136 (P <0.001)。DPEP1蛋白在高分化腺癌组织中的表达率为100%(20/20),明显高于结直肠上皮内瘤变83.33%(50/60)和结直肠正常黏膜上皮组织20%(6/30),弥漫性分布于细胞质中(P <0.01)。DPEP1在高级别上皮内瘤变组和低级别上皮内瘤变组的阳性表达率分别为88.57%(31/35)、76%(19/25); DPEP1表达水平与上皮内瘤变病理分级及进展相关(P <0.05),但在不同性别、年龄中的表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:DPEP1在结直肠上皮内瘤变和早期结直肠癌中表达并可影响肿瘤细胞的侵袭性,与肿瘤的进展相关。

双酚S经ERβ-MAPK信号通路介导对人正常卵巢上皮细胞的毒性作用

目的探讨模拟人体实际暴露水平的双酚S长期(7和14 d)染毒,通过ERβ-MAPK信号通路扰动,对人正常卵巢上皮细胞IOSE 80的毒性效应。方法使用基于生理的药代动力学模型结合中国长江沿岸地区女性血清双酚S水平确定给药浓度,同时设置溶剂对照和β-雌二醇(17β-estradiol,E_(2))对照,对IOSE 80细胞进行长期染毒(7和14 d),每2天更换一次相应浓度(0、6.79×10^(-6)、6.79×10^(-4)、6.79×10^(-2)、6.79μmol/L双酚S和10 nmol/L E_(2))完全培养基。通过qPCR检测雌激素受体(ERβ和GPR30)、MAPK信号通路(P38/JNK/ERK信号通路)关键基因和促性腺激素释放激素相关基因(GnRH-I、GnRH-II和GnRH-R)mRNA表达;在此基础上给予ERβ-MAPK信号通路抑制剂,采用流式细胞术检测细胞周期;同时进行剂量-反应关系分析,计算相关指标的基准剂量可信限下限值。结果与溶剂对照组相比,双酚S染毒7 d后,G_(2)/M期细胞比例显著增加(P<0.05),GnRH-I、GnRH-II和GnRH-R的mRNA表达量显著下调(P<0.05);双酚S染毒14 d后,ESR2、MAPK3、MAPK9的mRNA表达量显著上调(P<0.05),GnRH-II和GnRH-R的mRNA表达量显著下调(P<0.05)。双酚S染毒7 d的GnRH-II mRNA表达量,双酚S染毒14 d的G_(0)/G_(1)期比例、MAPK3和MAPK8 mRNA表达量,以及双酚S染毒7和14 d后的GnRH-I mRNA表达量,呈现较好的剂量-反应关系,但拟合结果较差。结论双酚S长期低剂量染毒可激活ERβ-MAPK信号通路引起IOSE 80细胞周期阻滞,也可导致IOSE 80细胞激素分泌变化。

木犀草素与叶酸对黄曲霉毒素B1致食管上皮细胞毒性及MTHFR基因高甲基化的影响

目的:研究木犀草素(luteolin,LUT)与叶酸(folic acid,FA)对黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)诱导损伤的人正常食管上皮细胞(human normal esophageal epithelial cells,HEEC)MTHFR基因甲基化的影响。方法:不同浓度(0、13、25、50、100、200μmol/L)AFB1染毒HEEC 24、48、72 h,CCK-8法检测细胞活力;将HEEC分为空白对照组、AFB1染毒组(200μmol/L)、LUT干预组(160μmol/L)、FA干预组(20、200μmol/L)以及联合干预组(160μmol/L LUT+20μmol/L FA、160μmol/L LUT+200μmol/L FA),处理24 h后CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blot检测MTHFR蛋白的表达水平,MassARRAY甲基化检测MTHFR基因启动子区甲基化的情况。结果:不同浓度的AFB1染毒HEEC 24、48、72 h均可以抑制细胞增殖,而经LUT和FA干预后,与AFB1染毒组相比,LUT及联合干预组细胞周期阻滞显著减少(P<0.05),细胞抑制率及凋亡率显著降低(P<0.05),MTHFR蛋白表达上调有所改善(P<0.05)。且LUT与FA及二者联合对MTHFR基因启动子区高甲基化水平均有降低作用(P<0.05)。结论:AFB1对HEEC有毒性作用,表现在增殖抑制、周期阻滞,促进凋亡,上调了MTHFR蛋白的表达,LUT干预可减弱这些损伤,对AFB1所致毒性起到一定的保护作用。AFB1提高了MTHFR基因启动子区甲基化水平,导致表观遗传的改变。LUT与FA及联合作用可以降低该甲基化水平,改善该表观遗传的改变。

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人正常上皮特异-1基因(NES1)及人胃癌裸鼠移植瘤的作用,探讨其抗肿瘤效应及可能机制,寻求胃癌治疗的新途径。方法建立人胃癌移植瘤裸鼠模型,用5-aza-CdR处理裸鼠,观察移植瘤生长情况,并用MSP及免疫组织化学技术检测NES1基因的甲基化状态及蛋白表达情况。结果5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,用药组与对照组相比,其抑瘤率为57.44%,移植瘤体积有显著差异(P<0.01);5-aza-CdR作用后,可使NES1基因exon3去甲基化,且能使NES1蛋白表达增加。结论5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为它能使因甲基化而失活的抑癌基因NES1再转录,并诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。

鼻咽癌变不同时期的体外三维培养模型建立的实验研究

背景与目的:三维培养更能模拟体内细胞的微环境,细胞的生物学特性比二维培养更接近于活体组织。本研究建立能反映鼻咽癌变过程中不同时期的鼻咽上皮细胞三维培养模型,为进一步研究鼻咽癌的发病机制提供模型。方法:非癌鼻咽活检标本体外培养用于建立鼻咽正常细胞;早期和晚期传代的正常细胞NPNE2、永生化的鼻咽上皮细胞NP69SV40T、鼻咽癌细胞SUNE-1及其高转移潜能亚株5-8F在Matrigel中培养,建立三维培养模型。结果:从非癌鼻咽活检标本长出具有上皮细胞形态特征的细胞,细胞出现衰老前,在体外能够增殖8～10代,角蛋白免疫组化证实其为上皮起源。除晚期传代的NPNE2外,所有细胞均能在三维体系中增殖,NPNE2及NP69SV40细胞主要形成网状结构,克隆形成数少,边沿清楚而光滑,并且细胞间连接紧密;SUNE-1和5-8F形成大而形态不规则的克隆,细胞间连接松散并且克隆边沿不规则,此外,5-8F尚形成大量的伪足,但不形成网状结构;而晚期传代的NPNE2增殖能力低,无法形成细胞网状结构,也不形成细胞克隆。结论:从非癌鼻咽活检标本成功培养出正常鼻咽上皮细胞,采用正常细胞、永生化鼻咽上皮细胞及肿瘤细胞建立了可能反映体内鼻咽癌发生、发展不同时期的三维培养模型。