健康人外周血树突状细胞的体外诱导及其功能分析

目的分析以健康人AB血清与rhCD40L体外诱导健康人外周血树突状细胞（Dc）的功能。方法对健康人外周血单个核细胞进行体外培养，在以健康人AB血清为基础的培养体系中加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、重组人白细胞介素（rhIL）-4、rhCDnoL等细胞因子，诱导单个核细胞分化形成DC，采用倒置显微镜及瑞特-吉姆萨染色观察，流式细胞术行DC表型鉴定，四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法进行混合淋巴细胞反应（MLR），检测其抗原刺激能力，酶联免疫吸附（ELISA）法检测DC培养上清IL-12的分泌。结果培养7d后的细胞具有典型的DC形态，并上调表达DC特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40、CD80、CD86，第0、1、3、5、7天，5个时间点间CD83、CD40、CD80、CD86、CD14表达差异有统计学意义（F值分别为50．253、243．769、248．181、191．267、226．339，均P〈0．05）。培养后的DC可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖，GM-CSF加rhIL-4、rhCD40L组较GM—CSF加rhIL-4组刺激反应能力强。培养的DC自培养第5天始即有IL-12分泌，未加CD40L组IL-12p40分泌量为（42．92±1．54）Pg／ml，加CD40L组为（136．18±5．27）Pg／ml；培养第7天，IL-12p40分泌明显增多，两组分别为（60．09±2．27）pg／ml及（322．30±30．60）Pg／ml，差异有统计学意义（t=-44．941、-22．611，均P〈0．05）。结论健康人外周血单个核细胞可在以健康人AB血清与rhCD40L为主的培养体系中诱导成DC。