MicroRNA-126对人正常肝细胞株脂代谢的影响

目的探讨循环中MicroRNA-126在1型和2型糖尿病影响肝细胞的糖代谢及对正常肝细胞系Chang liver细胞脂代谢的影响。方法以人正常肝细胞系为对象,设置MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组。通过转染MicroRNA-126类似物及拮抗物,改变MicroRNA-126表达。RT-PCR法检测各组细胞中MicroRNA-126的表达量;转染MicroRNA序列48 h后,继而胰岛素作用12 h,甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)定量检测试剂盒检测每组肝细胞内TG和TC的含量。结果 RT-PCR结果显示MicroRNA-126 mimics转染组较正常对照组的MicroRNA-126表达量显著增加(t=26.18,P<0.05),其余各组较正常对照组的MicroRNA-126表达量则无显著差别(P=0.609)。胰岛素作用后,MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组相比,TG和TC含量无显著差别(F=1.074,0.436,均P>0.05)。结论 MicroRNA-126对正常肝细胞株TG及TC的代谢可能没有影响。

链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响

目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24～72h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性。倒置显微镜下观察50mg/L链球菌全蛋白和SpⅡ对两种细胞的形态学变化。结果MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;SpⅠ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用。链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用。倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化。结论链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生。

丹参、黄芪及野菊花注射液对正常人肝细胞增殖的影响

目的:比较不同中药注射剂对正常人肝细胞株L02增殖的影响。方法:将丹参、黄芪、野菊花注射液,采用不同浓度直接加入培养液的给药方式,以MTT法测定三种注射液对正常人肝细胞株L02的增殖情况。结果:丹参注射剂对人肝细胞株增殖有明显的促进作用,且随用药剂量的增大,呈一定的量效关系;黄芪、野菊花注射液对L02细胞株增殖作用不明显。结论:丹参注射液对人肝细胞株L02增殖具有促进作用,同时提示不同的中药注射液各有其特点,中医临床辨证论治应存在不同的机理。

丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球对肝细胞L-02的生长抑制作用

目的 研究丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球 (MMC PBCA MNPS)、PBCA MNPS和MF(磁流体 )以及MMC对正常人肝细胞株 (L 0 2细胞 )生长抑制作用的影响。方法 用乳化聚合法分别制备了PBCA MNPS与MMC PBCA MNPS;采用MTT比色法研究了不同浓度的MMC PBCA MNPS、PBCA MNPS、MF与MMC对L 0 2细胞生长抑制作用的影响 ;用自动生化仪测定了乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -0 3 ,修回日期 :2 0 0 4-0 3 -19基金项目 :国家“863”资助项目 ( 2 0 0 2AA2 14 12 1) ;广东省攻关资助项目 ( 2 0 0 2C3 0 10 3 )作者简介 :任 非 ( 1974-) ,女 ,博士 ,研究方向 :生物药剂学 ,Tel:0 2 0 6164 1888 872 3 6,E mail:renfeisky @tom .com ;陈建海 ( 1947-) ,男 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向 :生物高分子材料 ,生物药剂学不同浓度的MMC PBCA MNPS对L 0 2细胞的相对抑制率(RIR % )为 :10 0 %、15 1%、2 5 1%、32 1%、39 9%与 4 5 0 % ;不同浓度的PBCA MNPS的RIR %依次为 :1 8%、5 2 %、10 0 %、12 9%、15 1%与 2 9 9% ;不同MMC浓度的RIR %依次为 :2 2 1%、35 1%、4 6 1%、6 2 0 %、80 1%与 88 9%。MF不仅不抑制L 0 2细胞的生长 ,还有利于细胞的生长。按照相对生长率 (RGR % ) ,MMC PBCA

肝细胞永生化:进展与挑战

基于活性肝细胞为主要生物成分的肝细胞治疗学已逐渐成为治疗肝衰竭及先天性肝脏代谢性疾病的重要手段,但其关键是获得理想的肝细胞材料.肝细胞永生化是解决肝细胞来源的重要途径之一,这一领域的研究进展较为迅速.目前已经建立的肝细胞株包括肿瘤源性肝细胞株、由正常肝细胞经胶原凝胶夹心培养系统培养后而获得的肝细胞株、由正常肝细胞经转染/转导而获得的肝细胞株,以及p53或p19基因敲除而建立的肝细胞株等.上述肝细胞株多由肝肿瘤细胞衍变而来或经病毒转导而获得,因此存在安全性之虑.另外,多数肝细胞株的分化功能与原代细胞相比有不同程度地下降.为克服上述缺陷,国内外学者开始采用可回复性永生化方法,其基本原理是先将永生化基因SV40T导入原代细胞以获得永生化细胞株,使其获得体外增生能力,然后再以特异性位点重组技术切除SV40T基因,使细胞株回复到永生化前的状态.这样,肝细胞株既具有了永生化特性,又可解决安全性与分化功能差的缺点. 从这一技术的发展现状及趋势看,进一步改善载体设计将是近期研究的热点。

MicroRNA126对人正常肝细胞株葡萄糖代谢的影响

旨在研究microRNA126过表达时人正常肝细胞株葡萄糖代谢的改变。体外培养chang liver细胞系,优化转染条件确定核苷酸序列的转染浓度后,分别转染microRNA126的类似物、抑制物及相应的对照序列。实时荧光定量PCR测定microRNA126相对表达量以检测细胞转染效率。转染48 h后,加入100 nmol/L胰岛素和对应底物处理2 h,检测各组葡萄糖利用率、糖原合成量、糖异生以及糖酵解指标。结果显示实时荧光定量PCR测定microRNA126类似物组microRNA126相对表达量明显高于其他各组（ P〈0.05）。 microRNA126类似物组与其他各组相比,人正常肝细胞葡萄糖利用率下降,糖原合成量减少,糖异生增强,乳酸生成量减少,丙酮酸激酶活力下降（均P〈0.05）。 microRNA126在肝细胞过表达时,可影响细胞的葡萄糖代谢,可能增加肝糖输出。

原发性肝癌及其癌旁组织、Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的定量研究

目的定量测定原发性肝癌(HCC)及其癌旁组织、国内常用Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达水平,探讨重组人生长激素(rhGH)在原发性肝癌患者中的适用性。方法采用放射配体分析法对45例原发性肝癌组织及其癌旁组织、8例正常肝组织、Bel-7402人肝癌细胞株进行GHR的检测,肝组织及肝癌细胞的GHR受体最大结合量(RT)采用Scatchard法计算;并分析肝癌组织GHR的表达量与肝癌患者各临床病理参数的关系。结果在38例HCC组织与45例癌旁组织,以及7402肝癌细胞株均检测到GHR的存在,GHR受体结合容量(RT)在有GHR表达的肝癌组织为(19.673 00±3.876 6)fmol/mg蛋白,癌旁组织GHR的RT值为(33.628 3±3.621 8)fmol/mg蛋白,GHR在7402肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891;同正常肝组织相比,肝癌与癌旁组织GHR的表达量均降低(P<0.05),肝癌组织GHR的表达量又低于癌旁组织;肝癌组织GHR的表达量与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关;有7例肝癌组织未检测到GHR存在。结论大多数原发性肝癌组织及全部癌旁组织均表达一定水平的GHR,在它们受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的应用可能需慎重。

两种细胞建立肝细胞氧化损伤模型比较

目的比较过氧化氢诱导人肝癌细胞株（Hep G2）与正常肝细胞株（Chang liver）建立的肝细胞氧化应激损伤模型。方法用不同浓度过氧化氢诱导Hep G2细胞和Chang liver细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝法检测细胞生长抑制率;分光光度法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性,以及肝细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原型谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）含量。结果作用时间在0.5~4 h时,在75~600μmol/L浓度范围内,过氧化氢可浓度和时间依赖性地抑制2种肝细胞增殖,促使细胞内AST、ALT和LDH向培养液中释放;细胞中SOD和GSH活性明显降低,MDA含量明显升高,表明2种肝细胞氧化损伤模型构建成功;选择300μmol/L H2O2作用4 h为致Hep G2和Chang liver细胞氧化应激损伤的最佳条件,结果显示,Hep G2和Chang liver细胞的生长抑制率分别为62%和76%,培养液中ALT、AST、LDH活性分别为（18.2±0.2）、（34.2±4.6）、（544.2±26.8）和（19.1±0.1）、（30.3±2.5）、（536.8±22.3）U/L,细胞中MDA含量分别为（7.8±0.9）和（8.6±1.1）nmol/mgprot。结论Hep G2与Chang liver细胞均可用于氧化应激细胞损伤模型的制备。

无机砷对肝细胞转录因子Nrf2及其调控蛋白表达影响

目的探讨不同时间和不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对Chang肝细胞株NF-E2相关因子2(Nrf2)、及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响。方法25μmol/L NaAsO2作用Chang肝细胞2、4、6、12和24 h;或不同浓度的NaAsO2(10、25和50μmol/L)作用Chang肝细胞6 h,免疫印迹法(western blot)检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况。结果 25μmol/L的NaAsO2可以明显诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达(P<0.01);Nrf2蛋白2 h开始明显诱导,4 h表达水平最高,此后随暴露时间的延长虽然表达有所下降,但持续至24 h仍明显高于对照组;NQO1的蛋白表达水平也从4 h开始增加并持续至24 h;HO-1的蛋白表达则从6 h开始明显诱导,且随暴露时间的继续延长表达持续上升,具有明显的时间-效应关系;10、25和50μmol/L NaAsO2染毒6 h,Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达均随染毒剂量的增加而大量诱导,具有明显的剂量-效应关系(P<0.01)。结论 NaAsO2暴露能够诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达增强,且具有一定的剂量-效应关系。

纳米锰锌铁氧体对肝细胞L-02的细胞毒性

目的研究纳米锰锌铁氧体对正常人肝细胞株(L-02)的体外毒性。方法使用透射电镜(TEM)以及X射线衍射仪(XRD)对纳米锰锌铁氧体进行表征,采用噻唑蓝实验(MTT比色法)检测M0.5Zn0.5Fe2O4纳米材料不同浓度(6.25、25、50、100、200、400和800μg/ml)以及不同染毒时间24、48和72 h对L-02细胞活性的影响,观察染毒48 h后细胞形态的改变并检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。结果纳米Mn0.5Zn0.5Fe2O4为粒径大约15 nm左右的圆形或椭圆形尖晶石型锰锌铁氧体。L-02细胞的生长活性随着Mn0.5 Zn0.5 Fe2O4浓度的升高和染毒时间的延长而下降。各剂量组细胞活力在染毒48 h后趋于平稳,当纳米颗粒浓度达到200μg/ml时,细胞的存活率明显低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,当浓度达到100μg/ml时,染毒48 h的L-02细胞形态发生改变,培养液上清中LDH活性明显升高(P<0.05)。结论随着浓度的增加和时间的延长纳米锰锌铁氧体对L-02细胞毒性增加,破坏细胞膜完整性可能是锰锌铁氧体纳米颗粒造成细胞损伤的途径之一。

HSS与HGF的研究现状

自从应用肝源性刺激物治疗某些肝病取得了明显的实验性疗效以来,已经得到了国内外学者的普遍关注。越来越多的学者进行了大量的基础研究和临床疗效观察,其结果令人鼓舞。肝细胞刺激物(HSS)与肝细胞生长因子(HGF)是否属于同一类物质?国内外学者尚未明确,相互混用。近期有人认为是完全不同的两种物质,本文对此将近年来的研究从以下几个方面进行综述比较。

Kinetic Repair of Chromosome Breaks of Normal Human Liver Cells Induced by Low LET Rays

We employed the premature chromosome condensation technique to investigate the 48 h kinetic repair of normal human liver cell line L02 exposed to γ-rays. The results showed that chromatid-type and isochromatid-type breaks increased with the dose at 0 h measured by PCC, the number of chromatid-type breaks was several times more than that of isochromatid-type breaks. Further 24 h incubation after exposed to irradiation, both

登革热病毒SCID-LO2人鼠嵌合模型的建立与评价

目的构建登革热病毒(DENV)感染的小动物模型,为阐明其致病机制提供实验材料。方法向严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠腹腔内接种人正常肝细胞(LO2)构建"人鼠嵌合体"动物模型,进而腹腔注射DENV,通过检查病毒在体内分布和主要器官的组织学改变,对DENV感染的动物模型进行评价。结果 SCID小鼠成功移植LO2,并且嵌合小鼠感染DENV后出现病毒血症及严重的器官损伤等表现,但无后肢麻痹等无关症状。结论成功构建了SCID-LO2人鼠嵌合模型,嵌合小鼠能够支持DENV复制,并表现出部分人类感染DENV的临床症状,该小鼠感染模型为研究DENV的致病机制提供了有价值的实验材料。