高血压脑出血血肿周围脑组织中C-C趋化细胞因子受体5表达与铁死亡及短期预后的关系

目的探讨高血压脑出血血肿周围脑组织中C-C趋化细胞因子受体5(CCR5)表达与铁死亡及短期预后的关系。方法选择2019年3月至2022年3月在甘肃医学院附属医院行血肿清除术治疗的高血压脑出血患者116例作为脑出血组,留取血肿周围脑组织;取20例接受尸检的非脑出血患者作为对照组,留取正常脑组织。检测组织中CCR5及铁死亡标志基因谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的mRNA及蛋白表达水平。脑出血组随访3个月,根据改良Rankin量表评分分为预后良好组71例和预后不良组45例,采用Pearson相关检验分析CCR5 mRNA与GPX4 mRNA、CCR5蛋白与GPX4蛋白的相关性,采用Logistic回归分析预后的影响因素,ROC曲线分析CCR5 mRNA、GPX4 mRNA、CCR5蛋白、GPX4蛋白对高血压脑出血短期预后的预测价值。结果脑出血组血肿周围脑组织中CCR5 mRNA和CCR5蛋白表达水平均高于对照组,GPX4 mRNA和GPX4蛋白表达水平均低于对照组(t=7.179、5.940、6.597、5.009,P<0.05);脑出血组患者血肿周围脑组织中CCR5 mRNA与GPX4 mRNA、CCR5蛋白与GPX4蛋白表达呈负相关(r=-0.438、-0.262,P<0.05)。Logistic回归分析显示美国国立卫生研究院卒中量表评分、血肿体积、CCR5 mRNA、GPX4 mRNA、CCR5蛋白、GPX4蛋白水平是脑出血患者预后不良的影响因素[OR(95%CI)=1.076(1.041~1.129)、1.128(1.056~1.624)、3.955(2.131~13.585)、0.119(0.034~0.423)、3.618(1.855~23.942)、0.099(0.052~0.654),P<0.05],ROC曲线分析显示CCR5 mRNA、GPX4 mRNA、CCR5蛋白、GPX4蛋白水平对脑出血患者的预后均具有预测价值。结论高血压脑出血血肿周围脑组织中CCR5表达增加与铁死亡激活和短期预后不良有关。

死亡受体5在肝癌细胞系及肝细胞系表面的表达

目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体DR5在肝癌细胞系及肝细胞表面的表达情况。结果:不同细胞表面DR5的表达水平分别为:人肝癌SMMC7721细胞95%、人肝细胞癌HepG2细胞40%,人正常肝细胞HL-770220.3%。结论:抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在人肝癌SMMC7721细胞高水平表达,人肝细胞癌HepG2细胞中度表达,人正常肝细胞HL-7702细胞低表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。

低氧对大鼠睾丸组织死亡受体5和FLIP抑制蛋白表达的影响

目的:检测常氧与模拟海拔4 000 m低氧条件下大鼠睾丸组织中死亡受体5(DR5)和FLIP抑制蛋白(c-FLIP)表达水平,以及c-FLIP在睾丸组织中的分布。方法:40只10周龄雄性SD大鼠随机分为常氧组,低氧3、15、30 d组。低氧各组分别置模拟海拔4 000 m低压舱中减压3、15、30 d;常氧组在平原(海拔300 m)喂养;减压结束后取睾丸组织,Western印迹检测睾丸组织中DR5与c-FLIP蛋白表达,免疫荧光法检测睾丸组织中c-FLIP分布。结果:低氧3、15、30 d组大鼠睾丸DR5表达量分别为2.04±0.11、1.97±0.12、2.34±0.11,均显著高于常氧组DR5的表达(1.78±0.09,P均<0.05)。低氧15、30 d组大鼠睾丸c-FLIP表达量分别为0.87±0.03、0.74±0.07,均显著低于常氧组c-FLIP的表达(1.03±0.02,P均<0.05)。结论:模拟海拔4 000 m低氧促进睾丸组织凋亡蛋白DR5表达,抑制睾丸组织抗凋亡蛋白c-FLIP表达。

死亡受体5介导细胞凋亡的研究及应用

死亡受体DR5(death receptor 5)属于肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族的成员,其胞质区部分含有死亡结构域(death domain,DD),广泛分布于各种肿瘤细胞和正常组织细胞的膜上。配体TRAIL与肿瘤细胞表面的DR5结合,可诱导大多数肿瘤凋亡,而对正常的组织几乎没有作用。近年来死亡受体DR5与细胞凋亡的关系已成为研究热点之一,对DR5介导细胞凋亡的机制和应用进展作一综述。

盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其死亡受体DR4、DR5表达的变化

目的观察人肝癌细胞SMMC-7721凋亡过程中死亡受体DR4、DR5的表达,探讨盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡;用Western blotting方法检测人肝癌细胞DR4、DR5的表达。结果盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Hoechst33258染色可见凋亡细胞皱缩,核碎裂,也可见典型凋亡小体;在蛋白水平,盐酸青藤碱处理后SMMC-7721细胞死亡受体DR4、DR5的表达水平较未处理组显著增加(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与细胞内死亡受体DR4和DR5表达上调有关。

骨髓间充质干细胞体外调控肝星状细胞死亡受体5的表达

背景:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体可以通过上调死亡受体5蛋白的表达诱导大鼠肝星状细胞凋亡。目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞死亡受体5和Caspase-3蛋白表达的影响,探讨骨髓间充质干细胞诱导肝星状细胞凋亡及其机制。方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代使用;大鼠原代肝星状细胞和肝纤维原细胞系冻融后传代使用。应用6孔培养板,建立上下双层细胞共培养体系,常规培养。将细胞分为4组:①空白对照组:肝星状细胞和骨髓间充质干细胞分别单独培养。②阴性对照组:肝纤维原细胞与肝星状细胞共培养(模拟星状细胞体内生长环境)。③骨髓间充质干细胞与肝星状细胞共培养组。④实验组:1.5mg/LTRAIL多克隆抗体与骨髓间充质干细胞作用6h后,不换液,再与肝星状细胞共培养。结果与结论:在共培养组中肝星状细胞的增殖降低,凋亡增加,且肝星状细胞死亡受体5、Caspase-3蛋白的表达均显著升高,并呈时间依赖性,且与其他组比较差异有显著性意义(P<0.01)。实验组Caspase-3和死亡受体5蛋白的表达在共培养的各个时间段均低于共培养组,与共培养组比较差异有显著性意义(P<0.01)。提示骨髓间充质干细胞与肝星状细胞共培养能抑制肝星状细胞的增殖,促进肝星状细胞的凋亡,其机制可能为骨髓间充质干细胞旁分泌肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体通过上调Caspase-3和死亡受体5蛋白的表达实现的。

5-氮杂胞苷对胃癌裸鼠移植瘤死亡受体DR4和DR5表达的影响

【目的】研究5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌裸鼠移植瘤中死亡受体4(DR4)和死亡受体5(DR5)表达的影响。【方法】利用RT-PCR方法检测5-Aza-CdR处理后的胃癌裸鼠移植瘤内DR4和DR5的RNA表达水平、用MS-PCR检测5-Aza-CdR处理后的胃癌裸鼠抑制瘤内DR4和DR5启动子区甲基化水平。【结果】5-Aza-CdR能够抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。5-Aza-CdR能够逆转胃癌裸鼠移植瘤中DR4和DR5的启动子甲基化水平,并上调DR4和DR5的表达水平。【结论】去甲基化药物5-Aza-CdR能够抑制裸鼠胃癌移植瘤生长,提示该药物有治疗作用且能够诱导DR4和DR5的启动子区去甲基化从而使DR4和DR5的表达水平升高。

可溶性死亡受体5在化疗前后肺癌患者外周血中的检测

目的:探讨正常人群外周血清中sDR5及与肺癌患者的差异。方法:采用ELISA夹心法检测106例正常人群、79例肺癌患者与肺癌化疗以后血清中死亡受体5的含量,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群外周血清中sDR5平均值为(6.25±3.09)μg/L,肺癌患者的sDR5含量为(53.91±13.42)μg/ml明显高于正常人群,P<0.001。肺癌病人化疗后外周血sDR5水平为(23.99±14.23)μg/ml较治疗前明显下降,P<0.001。结论:外周血中sDR5的消退水平有可能与肿瘤病人发病、发展及预后密切相关。

甲基化抑制剂5-杂氮胞苷对T淋巴细胞株程序性死亡受体-1基因启动子区域甲基化水平及其表达的影响

目的:以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azacytidine,5-Zac)对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(programmed death receptor 1,PD-1)基因启动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系。方法:以不同浓度的5-Zac分组(0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组)作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞仪(flow cy-tometry,FCM)检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细胞比例和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(reverse tran-scription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测5-Zac作用后PD-1基因mRNA的转录水平;亚硫酸氢钠处理各组Molt-4细胞DNA,PCR扩增PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态。结果:0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组的5-Zac作用于Molt-4细胞72 h后,PD-1在细胞表面的表达率分别为(1.13±0.01)%,(18.96±1.87)%和(63.09±6.25)%,并呈现浓度依赖性;PD-1基因mRNA表达量显著增加;细胞凋亡检测结果显示:与0μmol/L组相比,5μmol/L组、10μmol/L组5-Zac处理72 h后Molt-4细胞的凋亡率显著增加,0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组凋亡率分别为(1.9±0.06)%,(8.98±1.36)%和(24.5±3.68)%,差异有统计学意义(P<0.01);上述3组DNA亚硫酸氢钠测序结果表明:加入甲基化抑制剂5-Zac处理后,PD-1启动子上-601 bp和-553 bp CpG点去甲基化程度明显增高。结论:甲基化抑制剂5-Zac可导致体外培养的T淋巴细胞系Molt-4细胞表面PD-1 mRNA表达显著增加,细胞凋亡率增高,这种增高可能与PD-1基因启动子区域出现的去甲基化有关。

抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。

死亡受体DR5与肿瘤细胞凋亡

死亡受体DR5(TRAILR2)是TRAILR中的一员,属于肿瘤坏死因子受体超家族.当他与相关配体结合时,能选择性地杀伤多种肿瘤细胞而对正常细胞没有毒性.他的作用机制是通过DR5受体上的FADD形成DISC和caspase-8,然后启动非线粒体依赖途径和线粒体依赖途径来介导细胞的凋亡信号.TRAIL是最先发现的DR5配体,曾被誉为最有发展前途的抗肿瘤药物.然而随后发现不同形式的TRAIL对于正常人的不同的细胞有毒性,尤其是肝细胞.于是,人们研制出TRA-8-针对人DR5受体的特异性mAb.发现他不仅杀瘤效应比TRAIL强出数倍,而且对正常人的肝细胞及其他细胞均没有毒副作用.目前正被考虑为最安全最有效的抗癌药物.人们对DR5受体和配体的不断探索,为进一步了解肿瘤细胞的凋亡和抗癌药物的研制,开创了新的途径.

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体、死亡受体5及诱骗受体2在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的:检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的诱骗受体2(DcR2)、死亡受体5(DR5)在子宫内膜癌的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例子宫内膜癌组织、20例不典型增生子宫内膜组织、23例正常子宫内膜组织中DR5、DcR2阳性表达水平。并对子宫内膜癌患者的手术病理分析、肿瘤分化程度、组织类型、肌层浸润等临床病理因素进行分析。结果:DcR2在正常子宫内膜组织中的表达高于子宫内膜癌组织(P<0.01);DR5在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达呈递增趋势,两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:子宫内膜癌细胞由于高表达DR5和低表达DcR2而易被TRAIL诱导凋亡,这一结果为临床治疗子宫内膜癌提供可能实验依据。

死亡受体5在肿瘤细胞系表面的表达

目的利用抗DR5单克隆抗体(mAb),检测死亡受体5(DeathRecepter5)在肿瘤细胞系表面的表达。方法sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体在肿瘤细胞系的表达情况。结果不同肿瘤细胞表面DR5的表达水平分别为Jurkat细胞91.61%、NS-10.66%。结论抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在Jurkat细胞系高水平表达,NS-1细胞系几乎不表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。

死亡受体5和死亡诱骗受体2在腰椎间盘组织中的表达及意义

目的探讨死亡受体5(DR5)、死亡诱骗受体2(DCR2)在腰椎间盘中的表达及意义。方法选取腰椎间盘突出症行椎间盘组织摘除术的患者73例作为观察组;另外寻找非正常死亡成人15例取腰椎间盘32个。采用PV6000两步免疫组织化学染色法对两组腰椎间盘进行检测。结果观察组髓核及纤维环内的DR5细胞阳性率明显高于对照组,两组比较差异明显(P<0.05);DCR2细胞阳性率两组比较差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。结论 DR5可能参与了腰椎间盘组织的细胞凋亡过程。

死亡受体5在小鼠神经增殖细胞中的表达

目的探讨死亡受体5(DR5)对神经细胞增殖的影响。方法采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、DR5、Doublecortin(DCX)等抗体免疫荧光标记法,检测各发育阶段(从胚胎期至生后成年,共100只小鼠)脑组织内DR5阳性细胞的表达变化,以及DR5阳性细胞与神经增殖细胞的关系。结果在胚胎期和新生鼠中,DR5阳性细胞密集分布于海马齿状回颗粒细胞层,呈强表达。7日龄(P7)后,DR5阳性细胞减少,强表达的阳性细胞密集分布在齿状回的下颗粒层,其余颗粒细胞呈弱表达。P30后,在齿状回的下颗粒层仅发现少数DR5阳性细胞,其余颗粒细胞不表达DR5。同时,在其他神经细胞增殖区,如新生鼠(P0)小脑外颗粒区和P7嗅球的喙侧迁移流(RMS)区域,DR5阳性细胞的表达和分布规律均表明,DR5阳性细胞是增殖的神经细胞或有丝分裂后期的新生神经元。进一步的实验发现,齿状回下颗粒层的DR5阳性细胞与BrdU阳性细胞或Doublecortin阳性细胞共存,表明DR5阳性细胞是神经前体细胞和新生神经元。结论 DR5阳性细胞是增殖的神经细胞和新生神经元,提示DR5参与神经细胞增殖与分化。

死亡受体5胞外区域的重组、表达及活性鉴定

目的构建死亡受体5(deathreceptor5,DR5)胞外区域(eDR5)的表达载体,表达纯化重组蛋白并鉴定其生物特性。方法通过重叠PCR获得DR5胞外段编码序列,构建pET-22b(+)/DR5表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni2+柱亲和纯化,SDS-PAGE、直接ELISA鉴定纯化产物的纯度和特异性,用MTT法检测eDR5蛋白阻断DR5单克隆抗体FMU1.5和TRAIL诱导人胶质瘤细胞株U343(高表达DR5)、U373(低表达DR5)细胞凋亡的作用。结果获得了DR5胞外段编码序列,目的蛋白在上清及包涵体中都有表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化的重组蛋白纯度达95%以上,蛋白产量达9mg/ml。ELISA结果表明所纯化蛋白为eDR5。eDR5蛋白可部分阻断FMU1.5和TRAIL诱导人胶质瘤细胞株U343细胞凋亡的作用,其阻断率与DR5表达相关。结论死亡受体5胞外段基因的成功重组、表达及纯化,为进一步的功能研究奠定了基础。

抗人死亡受体5单链抗体的构建表达纯化及活性分析

目的构建、表达、纯化抗人死亡受体5(DR5)单链抗体,并检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。方法采用RT-PCR获取鼠源性抗人DR5单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列,以一柔性连接肽连接二者,转入表达载体,以大肠杆菌表达融合蛋白,亲和色谱纯化后用MTT实验和凋亡检测试剂盒检测其凋亡诱导活性。结果获得的序列经比对为抗体重链和轻链可变区基因,表达纯化后的重组蛋白具有接近完整抗体的肿瘤细胞凋亡诱导活性。结论抗人DR5 scFv可作为诱导肿瘤细胞凋亡的候选药物,为肿瘤免疫学研究提供材料。

死亡受体5抗体治疗卵巢癌耐药的研究进展

肿瘤坏死因子相关的诱导配体为近年来新发现的凋亡调节的重要蛋白之一。死亡受体5(DR5)为其诱导凋亡的重要受体之一。DR5的结构、组织分布及其可诱导肿瘤细胞凋亡而不影响正常细胞的特性,已成为近年的研究热点。其中DR5单克隆抗体应用于耐药卵巢癌细胞的治疗,为耐药卵巢癌细胞治疗提供了新的思路。该文将DR5单克隆抗体应用于卵巢癌耐药的研究进展予以综述。

5-羟色胺2A受体在自杀死亡者海马中的表达

目的 探寻自杀行为的生物学标记 ,为早期识别和干预自杀行为提供客观依据。方法 通过观察自杀死者与非自杀对照之间脑海马 5 -羟色胺 2A受体 (5 -HT2AR)的表达情况 ,评价 5 -HT2AR表达变化与自杀行为的关系。选取 10例自杀死亡者及 10例非自杀死亡者脑标本 ,进行抗人 5 -HT2AR免疫组化染色及苏木素 -伊红染色观察 ,并在LeicaQWin图像处理与分析系统中进行电子计算机辅助灰度图像分析 ,得到反映组织 5 -HT2AR表达强度的半定量资料 ,采用SPSS10 .0软件进行统计分析。结果 经海马免疫组织化学染色和苏木素 -伊红染色观察 ,自杀死亡组与非自杀对照组之间海马的一般组织学特征无差异。 5 -HT2AR表达的计算机灰度分析显示 :自杀死亡组海马CA1区、CA2区、CA3区及CA4区的受体表达均明显强于非自杀对照组的相应区域 (P <0 .0 1) ,2组齿状回 (DG) 5 -HT2AR的表达无差异 (P >0 .0 5 )。结论 自杀死亡者海马各区 5 -HT2AR表达明显增高 ,海马 5 -HT2AR表达的增高可能是自杀行为的生物学标记。

死亡受体DR5与肿瘤细胞凋亡的研究进展(上)

死亡受体DR5与肿瘤凋亡的研究近年来十分热门,波及到肝癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、白血病、妇科肿瘤等,本文就相关问题进行综述。