CRISPR/Cas9沉默Fas可抑制急性肝衰竭细胞线粒体自噬及减轻线粒体损伤

目的 探讨凋亡相关因子(Fas/CD95)在急性肝衰竭疾病进展中的作用及机制。方法 构建刀豆蛋白A诱导的急性肝衰竭小鼠动物模型,通过透射电子显微镜及免疫印迹检测了急性肝衰竭肝细胞内的线粒体自噬发生;在小鼠尾静脉输注靶向Fas基因的CRISPR/Cas9质粒,随后予以刀豆蛋白A诱发急性肝衰竭,检测小鼠肝组织急性损伤情况及肝细胞内线粒体自噬及线粒体损伤的变化,同时体外转染靶向Fas的CRISPR/Cas质粒到细胞内,刀豆蛋白A诱导HepG2肝细胞损伤,验证Fas敲除后对线粒体自噬和线粒体损伤的影响。结果 刀豆蛋白A可诱导小鼠急性肝衰竭,透射电镜观察发现肝细胞中发生了线粒体自噬,肝细胞内p62蛋白水平降低,PINK1/Parkin的蛋白上调,Fas的表达上调;小鼠肝组织和体外肝细胞先予以PX330Fas质粒转染,再予以刀豆蛋白A诱导肝损伤后,LC3II/LC3I表达比值减低,p62蛋白的表达得到恢复,线粒体蛋白COX4I1和线粒体DNA含量的水平下降,Fas表达下调,与转染空白质粒的对照组相比,差异均有统计学意义。结论 CRISPR/Cas9沉默Fas抑制急性肝衰竭进展及肝细胞内线粒体自噬的发生和线粒体损伤,从而减轻急性肝衰竭的细胞死亡,为临床开展急性肝衰竭的新治疗策略提供了新依据和新靶点。

在非小细胞肺癌中Fas(APO-1/CD95)基因的改变及与P53的关系

Fas(APO-1/CD95)家族具有在生理和病理方面调节细胞死亡的作用。Fas配体通过和细胞膜表面的Fas受体结合诱导细胞凋亡。目前主要在免疫系统研究Fas家族的重要作用。Fas突变可能是阻止凋亡的机制之一,也可能与非淋巴系统恶性疾病发病有关。为更好地研究Fas家族在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用,作者选取102例NSCLC肿瘤组织和44例周围正常组织,通过多聚酶链反应表达Fas和Fas配体mRNA。

桃红四物汤对高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉死亡受体途径凋亡的干预作用

目的:观察桃红四物汤对高同型半胱氨酸大鼠主动脉死亡受体途径凋亡的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、桃红组、叶酸组,每组10只,正常组给予普通饲料,模型组、桃红组、叶酸组给予高蛋氨酸饮食(普通饲料添加2%蛋氨酸)喂养,桃红组采用桃红四物汤水煎液,按4.59 g生药/(kg.d)灌胃;叶酸组采用叶酸混悬液,按1.35 mg/(kg.d)灌胃;模型组及正常组给双蒸水2 mL/(只.d)灌胃。12周后,Elisa法检测血清hcy、TNF-α、MCP-1浓度,免疫组化检测主动脉Cleaved Caspase3表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、Fas mRNA表达。免疫印迹法检测主动脉TNF-α的表达。结果:12周后,模型组大鼠血Hcy显著升高,血清TNF-α浓度升高,血清MCP-1浓度有升高趋势;主动脉内皮细胞连续性受损,受损部位下的血管平滑肌细胞Cleaved Caspase3呈片状黄褐色阳性染色。主动脉全层行RT-PCR示TNF-α、Fas mRNA表达上调,western blot示TNF-α表达上调。相对于模型组,桃红组和叶酸组大鼠血清TNF-α浓度降低,主动脉未发现片状Cleaved Caspase3阳性染色,TNF-αmRNA表达明显下调,Fas mRNA表达有下调趋势,TNF-α蛋白表达下调。但叶酸组伴有血同型半胱氨酸浓度的下降,而桃红组没有降低血同型半胱氨酸浓度的作用。结论:高同型半胱氨酸血症诱导SD大鼠主动脉死亡受体途径凋亡,桃红四物汤可降低血清TNF-α,并在基因和蛋白水平下调主动脉TNF-α表达。

Fas/FasL在宫颈癌组织中的表达及意义

肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病,肿瘤常表现出细胞增生亢进及凋亡减少。Fas/FasL系统是凋亡相关基因[1,2]。Fas,又名CD95或APO-1,属于肿瘤坏死因子受体（TN-FR）和神经生长因子受体（NGFR）家族。人Fas基因定位于第10号染色体长臂2区（10q24.1）,包含8个内含子和9个外显子。Fas配体（Fasl）,又称CD95L,

虎纹蜘蛛毒素-I对全脑缺血再灌注大鼠海马神经元Fas凋亡通路的抑制作用

目的:探讨虎纹蜘蛛毒素-I(HWTX-I)与由Fas分子启动的死亡信号转导通路之间的关系及可能的神经保护作用分子机制。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及用药组三组,每组16只,采用改良的Pulsinelli"四血管阻断法"并结合蛛网膜下腔置管术构建全脑缺血再灌注损伤大鼠模型。免疫组织化学法检测海马组织CA1区Fas、FasL、FADD蛋白水平表达,RT-PCR法检测海马组织死亡信号转导通路相关因子Fas、FasL、FADD核酸水平表达。结果:免疫组化法检测结果显示,生理盐水组、用药组Fas、FasL和FADD蛋白表达高于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),用药组Fas、FasL和FADD蛋白表达低于生理盐水组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);RT-PCR检测结果显示,假手术组Fas、FasL、FADDmRNA表达低于生理盐水组和用药组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),用药组Fas、FasL、FADDmRNA表达均低于生理盐水组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:HWTX-I蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织具有一定的神经保护作用,其机制可能是通过抑制Fas分子启动的死亡信号转导通路激活而发挥作用。

抗逆转录病毒治疗对HIV-1感染者外周血CD19^(+)B淋巴细胞的活化与凋亡的影响

目的探讨抗逆转录病毒治疗(ART)对HIV-1感染者CD19^(+)B淋巴细胞水平及其CD38、CD95和程序性死亡受体1(PD-1)水平的影响。方法根据是否行ART,将101例HIV-1感染患者分为未治疗组73例和治疗组28例,另选取30例健康者作为健康对照组。采用流式细胞术检测3组外周血CD19^(+)B淋巴细胞水平及其CD38、CD95和PD-1的水平。并分析治疗组、未治疗组中上述指标之间的相关性。结果未治疗组、治疗组、健康对照组CD19^(+)B淋巴细胞水平依次升高,而该细胞中CD95水平依次降低(均P<0.05);健康对照组和治疗组CD19^(+)B淋巴细胞CD38的表达水平均低于未治疗组(均P<0.05),而治疗组和健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);未治疗组和治疗组CD19^(+)B淋巴细胞PD-1的表达水平均高于健康对照组(均P<0.05),而治疗组与未治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组中,外周血CD19^(+)B淋巴细胞及CD19^(+)B淋巴细胞上的CD38、PD-1、CD95表达水平之间均不存在相关性(均P>0.05);在未治疗组中仅有CD38与CD95间的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论ART可能通过影响HIV-1感染者CD19^(+)B淋巴细胞中CD38与CD95(而非PD-1)的表达及两者的相互作用,增强CD19^(+)B淋巴细胞的活化而抑制其凋亡,从而对HIV-1感染者的体液免疫功能发挥一定的修复作用。