重组免疫毒素TRAIL DR5/ScFv-PE25的构建及活性检测

目的:构建绿脓杆菌外毒素PE融合抗TRAIL DR5单链抗体基因TRAIL DR5/Sc Fv的原核表达载体,诱导表达,并检测其生物学功能。方法:根据TRAIL DR5单链抗体HGS-ETR2的氨基酸序列,优化密码子,合成全长的编码序列作为模板,PCR技术扩增TRAIL DR5/Sc Fv基因,基因重组技术将两段TRAIL DR5/Sc Fv与PE25基因连接,组成TRAIL DR5/Sc Fv-PE25融合基因。重组质粒转化E.coli BL21(DE3),离子交换层析和亲和层析技术纯化重组蛋白。WST-8技术检测细胞毒性。结果:成功构建了重组免疫毒素基因TRAIL DR5/Sc Fv-PE25,重组蛋白经纯化后,每升发酵液可得到4.95 mg融合蛋白(纯度95%),该融合蛋白具有抑制A431/H9和Panc 3.014癌细胞增殖的作用。结论:成功表达并纯化TRAIL DR5/Sc Fv-PE25重组免疫毒素,检测其生物学活性,为TRAIL DR5阳性癌细胞的靶向治疗研究奠定了基础。

槲皮素对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用

目的观察槲皮素对胶质瘤C6细胞增殖的影响及其对脑胶质瘤大鼠脑组织DR5表达的影响,探讨槲皮素对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用。方法将体外培养的脑胶质瘤C6细胞按照槲皮素浓度分成25、50、75及100μmo l/L 5个处理组和对照组(二甲亚砜),采用MTT比色法检测槲皮素对胶质瘤C6细胞增殖的影响,Western blotting法检测100μmo l/L处理24h后的细胞和对照组细胞死亡因子受体5(DR5)的蛋白表达。选取雌性Wistar大鼠30只,随机分为3组:假手术组、模型组和槲皮素治疗组,每组10只。建立大鼠C6胶质瘤模型,于接种后17d处死各组大鼠,采用免疫组织化学法和Western bloting法检测肿瘤组织DR5蛋白表达水平的变化。结果槲皮素药物浓度增加或作用时间的延长,均能显著增强对C6细胞的增殖抑制作用。100μmo l/L槲皮素处理24h后,C6细胞DR5表达显著升高,P<0.01。在体研究时发现,槲皮素能够上调脑胶质瘤大鼠脑组织DR5蛋白表达的平均光密度值,P<0.01。结论槲皮素对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,上调DR5表达可能是其作用机制之一。