ADP-核糖基化样因子15与过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α基因单核苷酸多态性与糖尿病肾脏疾病的相关性研究

背景ADP-核糖基化样因子15(ARL15)基因rs4311394位点和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)基因rs7656250位点已被证实与血脂紊乱密切相关,而血脂紊乱作为糖尿病肾脏疾病(DKD)的重要危险因素之一,其是否与DKD存在相关性尚未可知。目的探究ARL15、PGC-1α基因单核苷酸多态性(SNP)与DKD的相关性。方法选取2018-2019年于延边大学附属医院和延吉市医院确诊的朝鲜族和汉族2型糖尿病(T2DM)患者393例(记为T2DM组)、DKD患者90例(记为DKD组),同期选取在延边大学附属医院进行单位体检的健康人268例〔记为糖耐量正常组(NGT组)〕。检测所有受试者生理、生化指标,采用单碱基延伸法检测ARL15、PGC-1α基因rs4311394、rs7656250位点基因型,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ARL15、脂联素蛋白水平。结果NGT组中汉族137例,朝鲜族131例;T2DM组中汉族205例,朝鲜族188例;DKD组中汉族55例,朝鲜族35例。NGT组汉族和朝鲜族人群ARL15基因rs4311394位点、PGC-1α基因rs7656250位点等位基因频率、基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三组ARL15基因rs4311394位点、PGC-1α基因rs7656250位点等位基因频率、基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三组ARL15、PGC-1α基因联合位点等位基因频率、基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。携带PGC-1α基因rs7656250位点CT基因型受试者空腹血糖(FPG)水平高于CC、TT基因型受试者(P<0.05);携带PGC-1α基因rs7656250位点CT、TT基因型受试者脂联素低于CC基因型受试者,TT基因型受试者脂联素低于CT基因型受试者(P<0.05)。T2DM组患者脂联素低于NGT组(P<0.05);DKD组患者ARL15、脂联素高于NGT组、T2DM组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,ARL15与脂联素呈正相关(rs=0.372,P<0.05)。结论ARL15、PGC-1α基因SNP与DKD不相关,但携带PGC-1α基因rs7656250位点CT、TT基因型人群的脂联素水平下降。

MRG15的克隆及其在正常和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达

目的克隆死亡因子相关基因15(MRG15)并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达,比较二者的差异。方法用改良的消减杂交法克隆死亡因子相关基因15,地高辛标记MRG15cDNA片断制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达,并作统计学处理。结果克隆到了死亡因子相关基因15的cDNA片断,长约639bp,死亡因子相关基因15在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;经统计分析,其在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达高于其在正常晶状体上皮细胞中的表达。结论MRG15在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中,其表达较正常晶状体增高,提示其可能在白内障的发生中起重要作用。

LncRNA TPTEP1/miR-137/KLF15轴在肥胖相关性肾病中的作用机制研究

目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)人肌力蛋白磷酸酶同源假基因1(TPTEP1)/微小核糖核酸-137(miR-137)/Kruppel样因子15(KLF15)轴在肥胖相关性肾病(ORKD)中的作用机制。方法:选择赣南医科大学第一附属医院2022年2月至2024年1月20例ORKD住院者为ORKD组,同期住院的非ORKD患者20例为对照组,采集血液进行生化检验,通过免疫组化及电镜检查肾活检标本病理变化,利用生物信息学工具对比分析ORKD组织与正常肾组织中KLF15信使核糖核酸(mRNA)的表达水平,酶联免疫吸附试验分析血清脂联素、瘦素水平。结果:ORKD组患者的血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、24 h尿蛋白定量(24h-UTP)水平高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);ORKD组肾组织KLF15表达水平、血清脂联素水平相比于对照组明显降低,瘦素水平明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);高通量测序筛查LncRNA发现,ORKD组ENSG00000100181.15表达差异大,miR-137可能是LncRNA TPTEP1的靶基因,LncRNA TPTEP1在机体多种组织中均有表达,其中包括肾脏及脂肪组织。结论:ORKD的肾组织中KLF15和脂联素的异常可能与疾病的发展有关,LncRNA TPTEP1/miR-137/KLF15轴在ORKD发展过程中发挥着重要的作用。

信号转导和转录激活因子3及调控基因与卵巢癌

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是细胞因子和生长因子受体信号的下游基因,不仅参与人体的正常生理过程,而且与肿瘤的生长、转移、浸润有关。研究发现,STAT3受到维甲酸-干扰素诱导的死亡相关基因19(GRIM-19),SOCS3,PTEN和PIAS3等基因的调控,其调控基因的异常表达将引起STAT3的持续激活和表达升高,导致肿瘤的发生、发展。在卵巢癌的发病机制中STAT3信号转导通路的持续性激活至关重要,其激活并且有基质金属蛋白酶类、Bcl-2家族成员、血管内皮生长因子、Her2基因的参与,在肿瘤的细胞抗凋亡、血管重建、浸润转移、药物耐药等过程中起重要作用,为卵巢癌免疫治疗方面提供新策略。

细胞因子与程序性细胞死亡

本文对细胞因子及其相关基因和相关受体在程序性细胞死亡中的作用及其机制研究进展进行综述。

西藏地区结直肠癌免疫治疗和靶向治疗相关分子标志物的检测及意义

目的研究西藏地区结直肠癌中SWI/SNF相关、基质相关、肌动蛋白依赖性染色质调节因子A亚科成员4(SMARCA4)/Brahma相关基因1、V-raf鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B(BRAF)、P53、程序性死亡受体1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)免疫组织化学表达和BRAF、神经营养因子酪氨酸受体激酶(NTRK)基因改变情况,为西藏地区结直肠癌患者的靶向治疗及免疫治疗提供依据。方法收集2015年1月至2021年7月西藏自治区人民医院经手术切除病理确诊为结直肠癌病例64例,全部病例均进行SMARCA4、BRAF、P53、PD-1、PD-L1免疫组织化学染色和NTRK1、NTRK2、NTRK3融合基因荧光原位杂交检测及BRAF V600E基因突变PCR检测。结果64例结直肠癌病例男女比例1.21∶1,平均年龄(56.59±13.27)岁;46例(71.88%)位于结肠,18例(28.12%)位于直肠;60例(93.75%)为腺癌,4例(6.25%)为其他类型;11例(17.19%)为T1或T2期,53例(82.81%)为T3或T4期;24例(37.50%)出现淋巴结转移。免疫组织化学方面,64例中1例(1.56%)SMARCA4部分肿瘤细胞表达减弱或缺失,4例(6.25%)BRAF肿瘤细胞阳性表达,35例(54.69%)P53为突变型表达;45例(70.31%)PD-1肿瘤相关免疫细胞阳性比例分数<10%,19例(29.69%)≥10%;52例(81.25%)PD-L1联合阳性分数<10,12例(18.75%)≥10。64例NTRK1、NTRK2、NTRK3融合基因检测均为阴性;4例(6.25%)检测到BRAF V600E基因突变;1例SMARCA4表达缺失病例未检测到SMARCA4基因改变。PD-L1的表达与错配修复缺陷/高度微卫星不稳定和PD-1的高表达呈显著正相关(χ^(2)=10.223,P=0.001;χ^(2)=11.979,P=0.001)。结论西藏地区结直肠癌中较少出现SMARCA4表达减弱或缺失及NTRK融合基因改变,少数病例有BRAF V600E基因突变,Pan-TRK和BRAF免疫组织化学可作为NTRK融合基因及BRAF基因突变的初筛方法。错配修复缺陷/高度微卫星不稳定的病例中更容易出现PD-L1蛋白高表达,这部分患者有望获益于免疫治疗。P53突变与PD-L1表达无相关性,PD-1的高表达和PD-L1的高表达呈正相关。

凋亡相关因子p21和Caspase-3及Survivin在胃癌中的研究进展

随着社会的发展，人类文明的进步，肿瘤已成为威胁人类生命和健康的首要疾病。肿瘤是机体在多种因素的作用下基因水平失调形成的新生物。研究发现，发达国家和我国大中城市的癌症死亡人数占全部死亡人数的第一位，

凋亡相关基因PDCD5在胃癌组织的表达及临床意义

目的研究凋亡相关基因程序化死亡因子5(PDCD5)在胃癌组织的表达情况。方法应用免疫组织化学方法 ,使用鼠抗人PDCD5单克隆抗体,检测60例胃癌组织、60例癌旁组织及20例正常胃黏膜中的PDCD蛋白的表达情况。结果胃癌组织中PDCD5蛋白表达率为35.0%、癌旁组织中PDCD5阳性表达率为63.3%、正常胃组织PDCD5阳性率为85.0%。胃癌组织中PDCD5表达率分别为高分化组53.8%、中分化组47.3%、低/未分化组17.2%。PDCD5在胃癌组织中低表达或不表达,与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤的浸润深度以及临床分期无相关性。与胃癌的分化程度及是否伴有淋巴结转移相关。结论 PDCD5蛋白在胃癌组织中表达率低于正常组织,PDCD5在胃癌细胞和胃肿瘤细胞凋亡过程中起到关键作用。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胰腺癌组织中的表达及相关性研究

应用RT-PCR和Western Blotting法检测干扰素/维甲酸联合诱导细胞死亡相关基因-19(GRIM-19)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)mRNA及蛋白在26例胰腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析两者的相关性。结果显示,胰腺癌组织中GRIM-19mRNA及蛋白表达水平低于癌旁组织(P<0.01);胰腺癌组织中STAT3mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.01);两者的表达呈负相关(r=-0.426,P<0.01)。因此,GRIM-19在胰腺癌中呈低表达,而STAT3呈高表达,这种异常表达与胰腺癌的发生发展密切相关。

自噬依赖性铁死亡在动脉粥样硬化中的研究进展

动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症性血管疾病,与中、大动脉管壁中毒性脂质聚集相关,主要病理特征是脂质代谢紊乱和炎性反应,导致泡沫细胞和不稳定斑块的形成,这一过程受多种细胞死亡途径的调控[1]。近年来,众多研究聚焦于细胞调控性死亡在心血管疾病治疗领域的潜在价值,不同调控性的细胞死亡能够导致不同或相似的细胞结局,其过程存在重叠和串扰,这些过程间的相互作用决定细胞死亡的最终结局。

MRG15在正常及年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达

目的:研究MRG15(死亡因子相关基因)在年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)、正常晶状体上皮细胞的表达差异。方法:性成熟的健康雌性SD大鼠40只,随机分为研究组、对照组,每组20只,研究组切除双侧卵巢、低浓度萘长间隔给药,建立围绝经期ARC模型;对照组常规饲养。以消减杂交改良法克隆MRG15,并对其cDNA片段应用地高辛标记制作探针。获取两组大鼠晶状体前囊膜切片后,再通过原位杂交法明确晶状体上皮细胞的表达差异。结果:克隆出的MRG15通过BamH1和EcoR1酶切以及琼脂糖电泳,可获取长为639bp的cDNA片段。GeneBank对比显示,其同源性达到99.0%。原位杂交显示,ARC患者及正常晶状体上皮细胞内均可见MRG15表达。研究组阳性细胞百分率与对照组相较,有统计学差异(P<0.05)。研究组积分指数与对照组相较,有统计学差异(P<0.05)。结论:MRG15在ARC和正常晶状体上皮细胞中均有表达,并且ARC较正常晶状体上皮细胞表达增高,这可能与MRG15对晶状体上皮细胞中一部分关键基因的转录产生抑制效应有关,通过降低晶状体上皮细胞的功能,使其出现衰老样改变,进而形成白内障,临床应对此进行更进一步的研究。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

死亡受体、配体系统与卵巢肿瘤

细胞凋亡主要表现为凋亡信号通路的启动及相关基因的表达,不同信号转导途径介导和参与细胞凋亡的发生过程,其中死亡受体信号途径是直接启动凋亡的一条最具特征性的路径。细胞表面死亡受体是肿瘤坏死因子受体超家族成员,死亡受体信号通过与其特异性配体结合,以其独特的诱导凋亡方式参与细胞凋亡的过程,介导肿瘤细胞凋亡。卵巢肿瘤的发生除了与多种癌基因和抑癌基因的异常激活和表达有关以外,细胞凋亡的抑制也是其形成的重要机制。就死亡受体、配体系统的有关机制及其与卵巢肿瘤的关系做一综述。

TRADD基因外显子的拼接及重组腺病毒的构建

目的构建含有人TRADD基因片段的重组腺病毒载体。方法从人肝组织中提取总RNA,逆转录得到cDNA。按照TRADD基因4个外显子的基因序列设计引物,分别扩增得到4个外显子的基因片段。对4个外显子进行基因拼接,得到全长的TRADD片段。利用AdEasy系统构建TRADD重组腺病毒,测定病毒滴度,并转染成纤维细胞。结果拼接成功939kb的TRADD基因,行PCR扩增重组腺病毒中TRADD基因,在略小于1000kb处见到明显的TRADD条带。结论构建成功的含有TRADD基因片段的重组腺病毒,可用于转染人成纤维细胞,用于检测TRADD对病理性瘢痕成纤维细胞的影响。

马氏珠母贝TRADD基因克隆与组织表达分析

【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada martensii)肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白(TRADD)基因,并分析其在各组织中的表达。【方法】利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆获得马氏珠母贝PmTRADD基因的cDNA全长序列,利用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析PmTRADD基因在马氏珠母贝不同组织中的表达模式。【结果与结论】PmTRADD包含5′非编码区101bp,3′非编码区144bp和开放阅读框(ORF)591bp,编码196个氨基酸。序列分析表明,PmTRADD没有信号肽和跨膜结构域,C端含有一个死亡结构域(DEATH)。将PmTRADD死亡结构域的氨基酸序列与其他物种的TRADD死亡结构域序列进行比对,发现不同物种的TRADD死亡结构域序列同源性较低。PmTRADD在马氏珠母贝各组织中均有不同程度表达,在鳃组织中表达最高,肝胰腺次之,闭壳肌中基本无表达。

细胞凋亡的基因调控与肿瘤

细胞凋亡是一种由基因控制的,为维持内环境稳定而进行的一种细胞自产性死亡过程。通过凋亡可使体内失去生命力的细胞或生理上不需要的细胞,包括陈旧的、受损伤的或癌前变的细胞,以有序的方式被清除,从而维持组织中的细胞形成(有些分裂)与细胞破坏(凋亡)之间的平衡关系。近来,细胞凋亡已成为医学界研究的新兴领域和热点。

程序性死亡配体-1基因转染对大鼠肝移植术后细胞因子的影响

目的 观察腺相关病毒（AAV）介导的程序性死亡配体-1（PD-L1）基因转染对大鼠肝移植术后干扰素（INF）-γ、白细胞介素（IL）-17、IL-10及转化生长因子-β1 （TGF-β1）等的影响.方法 96只近交系大鼠随机分为等基因组（G1）、同种异体组（G2）、空载体组（G3）和转染组（G4）,每组12对.通过大鼠肝移植急性排斥模型,采用夹闭法将PD-L1-AAV2-红色荧光蛋白（RFP）转染供肝,观察大鼠中位生存时间（MST）,全自动生化分析仪测定肝功能,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测受体移植肝IL-10、IL-17、INF-γ及TGF-β1的表达.结果 G1组全部存活;G2、G3组MST分别为18（17 ～20）、18（17～19） d;G4组显著延长了其存活（MST 29 d）（P＜0.05）.术后14d G4组肝功能及病理变化与7d G2、G3组相似.除G1组1NF-γ无表达外,余组移植肝INF-γ与IL-17表达类似.G1组术后7 d IL-17水平明显升高,后渐降至28.9 ng/g,仍高于3d;G2、G3组移植肝INF-γ、IL-17水平3d高表达,并渐增强,均在14d达峰值418.6、382.9 ng/g.而G4组虽高表达,但其幅度及浓度均低于G2、G3组,除G4组3d外,差异有统计学意义（Jp＜0.05）.各组移植肝TGF-β1与IL-I0表达类似,G1组术后3d升高至170.2、106.2 ng/g,后渐降,但仍高于G2、G3组;而G4组术后3d高表达,14d达峰值564.1、614.9 ng/g,除G4组3d外,各组TGF-β1、IL-10均高于G2、G3组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 AAV介导的PD-L1基因转染可延长移植肝的存活,其机制可能是基因转染增强了PD-L1/PD-1信号通路,在上调IL-10、TGF-β1表达的同时,下调INF-γ、IL-17的表达,从而发挥对移植肝的保护作用.