腺病毒介导的SD—HA对K562细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用机制

目的探讨融合蛋白SD—HA能否通过竞争结合BCR—ABL的第177位酪氨酸磷酸化位点（Y177p），调控与其相关的下游信号分子活性，进而抑制K562细胞增殖并诱导凋亡。方法Westernblot结合免疫共沉淀技术分析融合蛋白SD—HA与BCR．ABL的Y177p的相互作用，及其对下游信号途径Ras—MAPK和磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）．Akt的影响；Westernblot分析融合蛋白SD—HA对细胞膜受体死亡途径级联反应caspase-8、caspase-3和PRAP的影响。结果双向免疫共沉淀实验可检测到融合蛋白SD—HA能与Grb2竞争性结合BCR—ABLY177p，形成复合物。融合蛋白SD—HA可降低活化Ras、磷酸化MAPK（p—MAPK）、p-ELK的表达水平，抑制Ras—MAPK信号途径；融合蛋白SD—HA还可降低P—Akt及Akt的底物P—GSK的表达水平，抑制P13K—Akt信号途径，从而抑制K562细胞增殖；通过死亡效应结构域（DED）与caspases-8前体DED结合而寡聚化，激活caspases-8、caspase-3和PRAP，诱导K562细胞凋亡。结论融合蛋白SD—HA抑制BCR-ABL—Y177与Grb2结合的策略，可作为慢性髓性白血病治疗新的切入点。

DEDD抑制Smad3活性、促进肿瘤细胞凋亡和生长停滞

探讨DEDD调节Smad3活性和促进凋亡的分子机制。利用免疫印迹、免疫荧光、免疫共沉淀、流式细胞术和MTT法检测了DEDD全长以及其两个截短突变体N-DEDD和C-DEDD对Smad3核浆分布、Smad3磷酸化、Smad3与Smad4间相互作用以及对细胞凋亡和增殖能力的影响。结果显示,DEDD和N-DEDD抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化及入核,并抑制Smad3-Smad4复合物形成。DEDD及其两个截短突变体均能促进细胞凋亡并诱导细胞生长停滞。结果表明,DED结构域介导了DEDD对Smad3功能的负调节作用,DEDD的两个截短突变体都参与了对细胞凋亡和细胞生长的调节。