pRP[Exp]-AATF重组质粒构建及其在系膜细胞中的表达

目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序,通过脂质转染法将细胞转染到大鼠系膜细胞中,以未转染的系膜细胞为空白对照组,转染后的为实验组,Western blot检测AATF所编码蛋白的表达水平。结果 PCR扩增产物AATF片段约1 600 bp,与理论相符;构建所得pRP[Exp]-AATF重组质粒,经双酶切琼脂糖凝胶电泳后得到约1 600 bp的条带,与预期结果相符;测序结果与Gen Bank中的大鼠AATF基因序列比对,同源性相符。经RT-qPCR证明,以未转染的系膜细胞中AATF表达水平为标准(1.00±0.00),转染后的实验组中AATF的相对表达量达(12.03±1.87),显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pRP[Exp]-AATF重组质粒,并能在肾小球系膜细胞中正常表达,为后续研究AATF基因的生物学功能、疾病治疗和临床应用奠定了实验基础。

宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中DLK/ZIPK、Intβ_1的表达及意义

目的探讨死亡相关蛋白样激酶(DLK/ZIPK)、整合素β1(Intβ1)在人宫颈上皮内瘤样变(CIN)及宫颈鳞癌(SCC)中的表达及意义。方法应用免疫组化SABC法检测15例正常宫颈上皮(NE)、30例CIN及85例SCC中DLK/ZIPK和Intβ1蛋白的表达情况,并分析两者与临床病理参数之间的关系。结果①在NE、CIN及SCC中,DLK/ZIPK的阳性率分别为93.3%、63.3%、32.9%,且DLK/ZIPK的低表达与宫颈癌的肿瘤大小、肌层浸润深度、细胞分化及淋巴结转移有关,与脉管浸润及患者年龄无关。②Intβ1在NE、CIN及SCC的阳性率分别为13.3%、63.3%、85.9%,Intβ1与宫颈癌的淋巴结转移及组织分化有关,与患者年龄、肿瘤大小肌层浸润深度及脉管浸润无关。③DLK/ZIPK与Intβ1在宫颈癌的发生发展过程中呈负相关(r=-0.244,P=0.024)。结论 DLK/ZIPK的表达下调及Intβ1的高表达与宫颈癌的发生发展过程密切相关,在宫颈鳞癌的发生发展中可能发挥协同作用。