非小细胞肺癌患者血清死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化的分析

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法:运用甲基化特异性PCR技术,检测65例NSCLC组患者血清DAPK基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理资料的关系。结果:NSCLC组患者血清DAPK基因甲基化检出率为30.8%(20/65),而对照组未检出,DAPK基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显相关性。结论:DAPK基因启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标记物之一。

死亡相关蛋白激酶基因在胃癌组织中的表达

目的:研究死亡相关蛋白激酶(DAPk)基因在原发性胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中可能的作用。方法:收集62例原发性胃癌及相对应的癌旁正常组织。应用RT-PCR检测DAPk mRNA表达,免疫组化方法检测DAPk蛋白表达。结果:RT-PCR方法显示DAPk mRNA表达水平在胃癌组织中明显低于癌旁正常组织(OD值为0.2863±0.2027比0.5736±0.1968,P<0.0001)。免疫组化分析显示,DAPk在所有癌旁正常组织中表达均为阳性,积分范围为2-12,平均8.61±2.89;而在胃癌组织中表达则明显减弱或缺失,积分范围为0-9,平均2.90±3.38。DAPk在癌旁正常组织中的表达水平显著高于胃癌组织(P<0.0001)。结论:在原发性胃癌组织中,DAPk mRNA和蛋白表达明显缺失或低下。

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因启动子的甲基化

目的研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和基因表达在初治急性白血病患者中的临床意义。方法采用MSP方法和RT-PCR方法分别检测60例急性髓系白血病患者、55例急性淋巴细胞白血病患者和17例正常人DAPK基因的甲基化状态及其mRNA的表达,统计学分析各组之间的表达差异。结果急性淋巴细胞白血病组的DAPK甲基化阳性率(29.1%)高于急性髓细胞白血病组(5%)和正常组(0%)(P<0.0125),但甲基化与急性淋巴细胞白血病组患者临床特征无关(P>0.05)。DAPK基因mRNA的表达水平以正常组最高,急性髓细胞白血病组次之,急性淋巴细胞白血病组最低(P=0.000)。急性淋巴细胞白血病组患者DAPK mRNA表达与其启动子甲基化呈显著负相关(P<0.05)。结论 DAPK基因启动子在初治急性淋巴细胞白血病患者中甲基化率高于初治急性髓细胞白血病患者和正常人,但与患者临床特征无关。急性淋巴细胞白血病患者DAPK基因表达水平低或不表达可能与其甲基化有关。

死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化特异性PCR法的建立与初步应用

目的:建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化。方法:设计针对DAPK基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系对甲基化阳性模板进行检测,评价其特异性、重复性和灵敏性,并经测序鉴定。结果:所建立的甲基化MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;对不同梯度稀释的甲基化阳性模板进行检测,其最大敏感性可达2%;在不同时间进行甲基化MSP检测的结果均一致。结论:成功建立的DAPK基因启动子甲基化MSP检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可用于肿瘤标本的批量检测。

死亡相关蛋白激酶基因高甲基化在胃癌形成过程中作用的初步研究

背景:DNA启动子区甲基化可导致肿瘤抑制基因表达沉默,在胃癌的发生、发展中发挥重要作用。目的:观察正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和早期胃癌组织中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子区甲基化状态,探讨其与胃癌发生、发展的关系。方法:以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测20例正常胃黏膜、14例慢性萎缩性胃炎伴肠化生、27例异型增生和16例早期胃癌组织中DAPK基因启动子区甲基化状态,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果:早期胃癌组织中DAPK基因启动子区甲基化率显著高于正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴肠化生和异型增生组织(43.8%对0%、7.1%和11.1%,P<0.05),而后三者之间DAPK基因启动子区甲基化率无明显差异。DAPK基因启动子区甲基化与患者性别、年龄和病变部位均无关,与幽门螺杆菌(H.pylori)感染和血清癌胚抗原(CEA)水平显著相关(P<0.05)。结论:DAPK基因启动子区高甲基化是胃癌发生的早期分子事件,在由慢性萎缩性胃炎伴肠化生和异型增生进展至早期胃癌的过程中起重要作用。

非小细胞肺癌患者血清死亡相关蛋白激酶基因异常甲基化的检测及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子区域甲基化状况及其临床意义。方法采用基因测序法检测62例NSCLC、30例肺部良性疾病患者、16例健康体检者血清中DAPK启动子区域甲基化状况,分析其与临床特征的关系。结果NSCLC患者DAPK甲基化检出率为37.10%(23/62),而肺部良性疾病患者和健康体检者未检出(P<0.05)。DAPK基因甲基化与患者年龄、性别、吸烟指数、临床分期、病理类型、分化程度无关(P均>0.05)。结论DAPK异常甲基化可能在NSCLC发生、发展中起重要作用,有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记物。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胃癌细胞株BGC803生长及死亡相关蛋白激酶基因表达的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)对人胃癌细胞BGC803增殖、凋亡及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)m RNA表达水平的影响。方法用不同浓度的5-Aza-Cd R处理BGC803细胞,设立不含5-Aza-Cd R的对照组及3个实验组:5-Aza-Cd R 1μmol/L组、5-Aza-Cd R 5μmol/L组、5-Aza-Cd R 10μmol/L组。CCK-8检测细胞的增殖情况,AnnexinⅤ/PI双染及流式细胞术检测药物处理后细胞凋亡的情况,RT-PCR检测用药前后DAPK m RNA的表达水平变化。结果实验组BGC803细胞增殖速度显著低于对照组,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,BGC803细胞中DAPK基本无表达,5-Aza-Cd R处理后,细胞中DAPK m RNA表达量显著高于对照组(P<0.05)。结论 5-Aza-Cd R抑制BGC803细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能与其诱导DAPK基因表达有关。

死亡相关蛋白激酶基因甲基化在肿瘤形成中的作用

探究死亡相关蛋白激酶基因甲基化在肿瘤形成中发生的作用。方法:选取黄石市妇幼保健院2011-2014 年妇科手术切除患者380 例作为观察组(手术标本均经黄石市妇幼保健医院病理科确认),其中包括宫颈上皮内瘤变I 级(CIN I)78 例,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CINII)86 例,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINm)57 例,宫颈癌(CC)159 例,其中无淋巴结转移112 例,有淋巴结转移47 例。另选取40 例正常宫颈组织作为对照组。结果:观察组患者有明显的异常甲基化症状发生,而对照组未发生异常甲基化症状。结论:死亡相关蛋白激酶基因与肿瘤形成有着重要关系,需要我们进行进一步的深入发现。

骨髓增生异常综合征患者中死亡相关蛋白激酶基因的启动子甲基化改变

死亡相关蛋白激酶（Death—associatedproteinkinase，DAPK）是一种相对分子质量为160×10^3、钙调蛋白依赖的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。DAPK是一种正性细胞凋亡调节因子，通过多种途径诱导肿瘤细胞凋亡。通过动物实验发现DAPK在肿瘤发育的早期阶段抑制细胞转化，并且能抑制晚期肿瘤转移。近年来的临床研究结果表明DAPK基因启动子异常甲基化与消化道、泌尿道、头颈部、呼吸道肿瘤的发生发展密切相关。此外，对造血系统肿瘤的研究揭示伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、急性髓系白血病（AML）、骨髓增生异常综合征（MDS）、慢性淋巴细胞自血病、多发性骨髓瘤同样存在着较高频率的DAPK基因启动子甲基化。我们应用甲基化特异性PCR（Methylation—specificPCR，MSP）对MDS患者DAPK基因启动子甲基化状况进行了检测。

骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞中死亡相关蛋白激酶基因启动子区过甲基化的研究

死亡相关蛋白激酶（death—associated protein kinase．DAPK）是一种钙离子和钙调素依赖的丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶，它参与IFN-γ、TNF-α、Fas等诱导的细胞凋亡过程，具有促进凋亡的功能。近年来，DAPK与肿瘤发生、发展的关系引起人们的广泛关注，尤其是其基因启动子区的甲基化与表达的缺失。在恶性血液病中，所有的伯基特淋巴瘤、84％的B细胞淋巴瘤、70％的多发性骨髓瘤、10％～30％的急性髓系白血病均有DAPK过甲基化。我们观察了骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓单个核细胞（MNC）中DAPK基因启动子区过甲基化及其mRNA表达情况，并分析了其与临床特征的关系。

胆管癌病人死亡相关蛋白激酶基因启动子区甲基化的分析

死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase，DAPK）基因是一种钙调蛋白调节的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，其编码的死亡相关蛋白激酶参与γ-干扰素、Fas、p53、肿瘤坏死因子等多条凋亡途径，是细胞凋亡的正性调节因子之一，其5′端启动子区域的CpG岛甲基化已在多种肿瘤组织中被发现，并可致凋亡途径异常，导致细胞恶变。

非浸润性膀胱癌中p16及死亡相关蛋白激酶基因的甲基化

目的 探讨p16及死亡相关蛋白激酶（DAPK）启动子在非浸润性膀胱癌患者血清中的甲基化及意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测非浸润性膀胱癌患者（实验组,25例）及健康志愿者（对照组,25例）的血清游离DNA中p16及DAPK基因启动子甲基化,分析其临床意义.结果 实验组血清中的p16基因启动子甲基化率为52%（13/25）,高于对照组的24%（6/25）,两者比较差异有统计学意义（x2=4.160,P=0.041）;实验组血清中的DAPK基因启动子甲基化率为60%（15/25）,高于对照组的32%（8/25）,两者比较差异有统计学意义（x2=3.945,P=0.047）.p16及DAPK基因启动子甲基化与吸烟史（x2=0.187,P=0.665;x2=0.109,P=0.741）、年龄（x2=0.000,P=0.991;x2=0.038,P=0.845）、性别（x2=0.746,P=0.382;x2=1.288,P=0.256）及肿瘤级别（P=1.000;P=1.000）无明显相关.结论 p16和DAPK基因启动子甲基化与非浸润性膀胱癌关系密切.

慢性粒细胞白血病患者死亡相关蛋白激酶基因甲基化

死亡相关蛋白激酶（DAPK）是一种新发现的抑癌基因，编码蛋白为钙调蛋白依赖的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。DAPK是一种正性细胞凋亡调节因子，通过多种途径诱导肿瘤细胞凋亡。动物实验结果表明DAPK能够在肿瘤发育的早期阶段抑制细胞转化、并且能够抑制晚期转移事件。此外，对造血系统肿瘤的研究揭示伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤存在着较高频率的DAPK基因启动子甲基化。目前对慢性粒细胞白血病（CML）的相关研究甚少，我们应用甲基化特异性PCR（MSP）对CML患者DAPK基因启动子甲基化状况进行了检测，现将结果报道如下。

根除幽门螺杆菌对非肿瘤胃黏膜E-钙粘蛋白、死亡相关蛋白激酶基因甲基化的影响

幽门螺杆菌（Hp）感染与胃癌发生密切相关。根除Hp可能降低胃癌发生风险，但其机制未明，且缺乏分子生物学证据。Hp感染与胃黏膜中DNA异常甲基化有关，E-钙粘蛋白（Ecad）、死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因甲基化是非肿瘤胃黏膜癌变过程中的重要环节。

死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系。结果宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物。

死亡相关蛋白激酶基因启动子区过甲基化与喉癌的关系

目的 探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK)基因启动子区过甲基化与喉癌的关系。方法采用MSP和RT PCR法分析喉部正常黏膜、喉癌及相应癌旁组织中DAPK基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况。结果 5 8例喉癌组织中 ,有 39(6 7.2 % )例DAPK基因启动子区过甲基化 ,其在各病理分级和T分级之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而在N分级 (N0和N1)之间差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。 5 8例癌旁组织中 ,有 6例甲基化 ,且均为喉癌组织中有甲基化的病例。RT PCR结果显示 ,所有甲基化的喉癌组织中均无DAPKmRNA表达 ,而喉部正常组织、非甲基化的喉癌组织和癌旁组织中均有其表达。结论 喉癌中DAPK基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关 ,可能是喉癌发生、发展的原因之一 。

死亡相关蛋白激酶基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因在原发性胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨其在胃癌发生发展中可能的机制。方法收集62例原发性胃癌及相对应的癌旁正常组织。应用RT-PCR法检测DAPK mRNA的表达,应用Western-blot及免疫组化方法检测DAPK蛋白的表达。结果DAPKmRNA和蛋白表达水平在胃癌组织中明显低于癌旁正常组织(OD值分别为0.2863±0.2027 vs 0.5736±0.1968,P<0.0001;0.2616±0.0913 vs 0.6529±0.1808,P<0.0001)。免疫组化分析显示,DAPK在所有癌旁正常组织中表达均为阳性,均值为8.61±2.89;而在胃癌组织中表达则明显减弱或缺失,均值为2.90±3.38。DAPK在癌旁正常组织中的表达水平显著高于胃癌组织(P<0.0001)。DAPKmRNA及蛋白表达水平与胃癌分期和淋巴结转移显著相关。结论在原发性胃癌组织中,DAPKmRNA和蛋白表达明显缺失或低下,且与胃癌临床分期和淋巴结转移显著相关。

死亡相关蛋白激酶对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素基因表达的影响

目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素(Survivin)基因表达的影响。方法:利用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染HL-60细胞,荧光染色法观察细胞凋亡;RT-PCR方法检测SurvivinmRNA表达水平的变化。结果:pReceiver-M29-DAPK转染组的凋亡细胞比例高于pReceiver-M29组和空白组。pReceiver-M29-DAPK转染组Survivin mRNA表达水平低于pReceiver-M29组和空白组。结论:pReceiver-M29-DAPK转染诱导HL-60细胞发生凋亡,生存素基因表达显著下调。

胃癌死亡相关蛋白激酶基因甲基化对其信使核糖核酸和蛋白表达的影响

目的研究胃癌组织死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因启动子区甲基化对原发性胃癌组织中DAPK mRNA及蛋白表达的影响。方法采用逆转录（RT）-PCR法检测62例原发性胃癌及癌旁组织DAPK mRNA表达，甲基化特异性PCR（MSP）法检测DAPK启动子区CpG岛甲基化状态，对其中34例胃癌组织甲基化阳性者的DAPK蛋白表达进行Western印迹法检测。结果胃癌组织中DAPK mRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁组织，分别为0．2863±0．2027比0．5736±0．1968、0．2616±0．0913比0．6529±0．1808，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。DAPK在胃癌组织和癌旁组织中的甲基化频率分别为54．8％和17．7％，差异有统计学意义（P〈0．01）。在胃癌组织中，甲基化组DAPK mRNA表达明显低于非甲基化组（0．1399±0．0835比0．4640±0．1569，P〈0．01）。DAPK基因甲基化与胃癌TNM分期显著相关（P=0．04）。结论原发性胃癌组织DAPK mRNA和蛋白表达缺失或低下与其启动子甲基化程度增高显著相关。