死亡相关蛋白激酶1、KLF4、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶甲基化状态检测及与宫颈癌人乳头瘤病毒16感染的关系

目的检测宫颈癌组织死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)、KLF4、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子区域甲基化状态,初步探讨其甲基化状态与宫颈癌人乳头瘤病毒16(HPV16)感染的关系。方法选取宫颈癌患者103例为宫颈癌组,另选取同期年龄相匹配的慢性子宫颈炎患者110例为对照组。检测2组宫颈脱落组织DAPK1、KLF4、MGMT基因甲基化状态。通过人乳头瘤病毒检测HPV16感染情况,分析宫颈癌组织DAPK1、KLF4、MGMT基因甲基化与HPV16感染相关性。结果与对照组相比,宫颈癌组患者HPV16感染阳性率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,宫颈癌组DAPK1、KLF4、MGMT基因异常甲基化率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度低、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及有远处转移患者宫颈癌组织DAPK1、KLF4、MGMT甲基化率高于分化程度高、中及TNM分期Ⅰ~Ⅱ、无淋巴结转移、无远处转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。与HPV16感染阴性相比,HPV16感染阳性患者中APK1、KLF4、MGMT甲基化比例升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16感染情况与APK1、KLF4、MGMT甲基化相关(r=0.454,0.497,0.307,P<0.05)。结论HPV16感染可能与APK1、KLF4、MGMT甲基化有关,HPV16感染可能通过影响APK1、RAR-β、MGMT基因甲基化促进宫颈癌的发展。

死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系。结果宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物。

死亡相关蛋白激酶1在慢性淋巴细胞白血病中的表达

目的:研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)在慢性淋巴细胞白血病中的表达水平。方法:用慢性淋巴细胞白血病MEC1细胞系及慢性淋巴细胞白血病患者血液标本提取的B淋巴细胞以研究DAPK1基因表达水平,应用mRNA定量检测和免疫蛋白印迹方法检测mRNA的转录和蛋白的表达情况。结果:mRNA定量和免疫蛋白印迹方法结果表明,慢性淋巴细胞白血病患者体内的DAPK1基因沉默。因此,无论细胞有或没有进行INF-γ处理,MEC1细胞系中DAPK1和自噬相关基因蛋白表达均无明显差异。结论:慢性淋巴细胞白血病中DAPK1基因沉默性表达,使得自噬行为异常。

死亡相关蛋白激酶1及结节性硬化复合物蛋白2基因在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系

目的通过生物信息学方法研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和结节性硬化复合物蛋白2(TSC2)基因在胰腺癌中的表达情况,并探讨分析其与预后的关系。方法利用来自癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库的胰腺癌患者数据进行Kaplan-Meier分析,进而深层次探讨DAPK1和TSC2基因表达水平与患者总生存期或无进展生存期(PFS)的关系,同时,对影响预后的因素进行Cox多因素分析,以及分析胰腺癌中DAPK1和TSC2基因启动子的甲基化水平。此外,通过双荧光素酶报告基因检测系统,验证靶向DAPK1的微小RNA(miR),并应用定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法验证在胰腺癌细胞中miR-324-5p负调控DAPK1的表达。结果多因素分析显示,肿瘤分级(P=0.005)、R0切除(P<0.001)及TSC2表达情况(P=0.005)是影响胰腺癌患者PFS的独立危险因素;肿瘤部位(P=0.006)、病理类型(P=0.002)及分子靶向治疗(P<0.001)是影响胰腺癌患者总生存期的独立危险因素。DAPK1基因低表达且TSC2基因高表达的胰腺癌患者具有更好的总生存期(P=0.024)。DAPK1和TSC2甲基化水平与相应的mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.69、-0.37,均P<0.05)。体外实验结果证实,过表达的miR-324-5p显著抑制了胰腺癌Pa Ca-2和PANC-1细胞DAPK1 mRNA和蛋白的表达[mRNA:(0.37±0.02)比(1.00±0.02)、(0.53±0.01)比(1.00±0.06);蛋白:(0.54±0.06)比(1.04±0.12)、(0.63±0.11)比(1.01±0.11)](均P<0.05)。结论DAPK1基因联合TSC2基因的表达情况可以预测胰腺癌患者的预后;在胰腺癌组织中,DAPK1和TSC2启动子的低甲基化水平是DAPK1和TSC2高表达的重要因素;miR-324-5p负调控DAPK1的表达,有望成为胰腺癌靶向治疗的新靶点。

高压氧预处理抑制神经元细胞外信号调节激酶活化及与死亡相关蛋白激酶1的相互作用研究

目的 研究高压氧预处理对类缺血神经元细胞外信号调节激酶（ERK）和死亡相关蛋白激酶1（DAPK1）的影响. 方法（1）体外实验部分：将培养的小鼠神经元分为5组,即对照组、类缺血组、高压氧预处理组、空质粒组、ERK过表达组.对照组不做任何处理,类缺血组细胞经95％NO2＋5％ CO2混合气体处理30 min,高压氧预处理组细胞预先经98％O2＋2％CO2的混合气体处理2h后同类缺血组细胞处理,空载质粒组转染p3XFlag-CMV空质粒,ERK过表达质粒组细胞转染p3XFlag-CMV-ERK质粒.噻唑蓝（MTT）法检测不同时间点前3组细胞的生长情况,Western blotting法检测前3组细胞中磷酸化的细胞外信号调节激酶（p-ERK）的表达,以及对照组、空质粒组、ERK过表达组细胞中活化caspase-3蛋白及DAPK1的表达.同时采用免疫共沉淀的方法检测前3组细胞中ERK与DAPK1分子的相互作用.（2）体内实验部分：将BALB/c小鼠分为对照组、类缺血组和高压氧预处理组,每组15只.采用免疫共沉淀的方法检测小鼠海马区神经元中ERK与DAPK1分子复合体的表达情况. 结果 细胞分组后24h、48 h、72 h及96h,对照组、类缺血组、高压氧预处理组细胞存活率差异均有统计学意义（P＜0.05）,高压氧预处理可以显著抑制类缺血处理引起的细胞存活率的下降.同时3组细胞内p-ERK表达水平差异亦有统计学意义（P＜0.05）,高压氧预处理可以显著抑制类缺血处理引起的p-ERK的升高.此外,过表达ERK基因能促进细胞中活化caspase-3的表达,而高压氧预处理可以降低ERK与DAPK1的相互作用. 结论 高压氧预处理可通过抑制ERK的活化及其与DAPK1相互作用,阻断细胞凋亡的激活,从而诱导细胞缺血耐受.

死亡相关蛋白激酶1和CD147在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨死亡相关蛋白激酶1（DAPKl）、CD147在食管鳞癌中的表达状态及其与食管鳞癌预后的关系。方法应用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应检测DAPKl、CD147在食管鳞癌和正常食管上皮组织中的表达水平，结合临床病理特征进行统计学分析。结果DAPKl蛋白在食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为31．3％和58．5％，CD147蛋白的表达分别为57．5％和25．0％，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。不同浸润深度、淋巴结转移状态、TNM分期、分化程度的食管鳞癌患者DAPKl蛋白表达情况不同，差异有统计学意义（均P〈0．01）；不同浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度的食管鳞癌患者CD147蛋白表达情况不同，差异有统计学意义（均P〈0．01）。DAPK1mRNA在52例食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达水平分别为0．236±0．049和0．395±0．058，CD147mRNA的表达水平分别为0．942±0．204和0．821±0．171，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。在无淋巴结转移、分化程度高、病理分期低的食管鳞癌组织中DAPK1mRNA表达水平高；在淋巴结转移、分化程度低、病理分期高的食管鳞癌组织中CD147mRNA表达水平高。结论DAPKl、CD147蛋白的表达与食管鳞癌的临床病理学特征有关，DAPKl、CD147可能参与了食管鳞癌的转移过程，DAPKl、CD147作为预测食管鳞癌预后的重要指标。

死亡相关蛋白激酶1与N-甲基-D-天冬氨酸受体相互作用在脑卒中的研究进展

脑卒中是临床常见病、多发病,是目前危害人类健康最重要的疾病之一,且发病率、病死率、致残率呈逐年上升趋势,然而,脑卒中后神经功能损伤机制尚未明确,仍缺乏有效的治疗手段,寻找神经保护机制,对治疗脑卒中具有重要意义。目前有研究发现,脑卒中时死亡相关蛋白激酶1(death-associated protein kinase 1,DAPK1)作为一种特异性的细胞死亡信号被活化,与神经元突触外N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体结合引发神经元缺血性坏死,若将DAPK1从NMDA受体复合物上解离下来可保护神经元免受损伤,这成为治疗脑卒中的一个新靶点。

甲基化寡核苷酸灭活死亡相关蛋白激酶1基因对白血病K562细胞增殖的影响

目的探讨互补甲基化寡核苷酸诱导灭活K562白血病细胞死亡相关蛋白激酶1基因（DAPKl）及对其增殖的影响。方法应用Lip02000将与DAPKl基因启动子序列互补的甲基化寡核苷酸转染进K562白血病细胞，分别应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和反转录PCR（RT-PCR）检测转染前后DAPKl基因启动子甲基化状态和mRNA表达改变。应用噻唑蓝（MTT）法检测转染前后细胞增殖变化。结果正常组K562细胞的DAPKl基因启动子表现为未甲基化状态，可检测到相应mRNA表达；对照组寡核苷酸转染后，DAPKl基因启动子表现为未甲基化状态，mRNA表达和细胞增殖速度与正常组无明显差异；互补甲基化寡核苷酸转染后，DAPKl基因启动子呈甲基化状态，mRNA呈低表达状态，细胞增殖速度较正常组、甲基化对照寡核苷酸转染组显著增加。结论互补甲基化寡核苷酸可诱导灭活K562白血病细胞DAPKl基因并抑制其mRNA表达，促进细胞增殖。

死亡相关蛋白激酶1与细胞死亡

背景 细胞死亡是多种疾病的伴随过程,死亡相关蛋白激酶1（death-associated protein kinase 1,DAPK1）是一类与细胞死亡有关的酶,最初人们主要研究它在肿瘤抑制方面的作用,随后人们发现它在细胞死亡方面也有重要作用. 目的 DAPK1与细胞死亡密切相关,是近年来的研究热点.了解其研究现状以及未来发展趋势是非常有意义的. 内容 从DAPK1的结构、活性调节等方面人手,着重分析DAPK1与多种作用物的相互作用过程及其与疾病的关系. 趋向 随着人们对DAPK1研究的日益深入,DAPK1将成为疾病治疗的一个新靶点.

胶质瘤死亡相关蛋白激酶1基因甲基化检测及临床意义

目的:检测胶质瘤中死亡相关蛋白激酶1基因(Dapk1)甲基化并探讨其临床意义。方法:分别应用甲基特异性聚合酶链反应(PCR)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测2015年1月至2017年1月南华大学附属第一医院和南华大学附属第二医院诊治的70例胶质瘤患者(GLA组)、40例颅脑良性疾病患者(CON组)、U251和BT325胶质瘤细胞(购于中国科学院细胞库)Dapk1基因甲基化、mRNA和蛋白质比较,采用χ2检验比较胶质瘤患者不同临床病理中Dapk1基因甲基化的差异,Kaplan-Meier法对胶质瘤患者Dapk1基因甲基化和未甲基化患者生存分析。结果:GLA组胶质瘤患者Dapk1基因甲基化率显著高于CON组颅脑良性疾病患者(65.7%比2.5%, χ2=39.023, P<0.05)。U251和BT325胶质瘤细胞中Dapk1基因处于甲基化状态。GLA组胶质瘤患者、U251和BT325胶质瘤细胞中Dapk1基因mRNA和蛋白表达均显著低于CON组颅脑良性疾病患者(mRNA相对表达量分别为0.34±0.05、0.35±0.06、0.33±0.05、0.65±0.08,蛋白质相对表达量分别为0.22±0.04、0.23±0.05、0.21±0.04、0.57±0.07, F=67.125、52.198, P<0.01)。GLA组胶质瘤患者Dapk1基因甲基化率在肿瘤最大径和世界卫生组织(WHO)分级方面的差异均有统计学意义(甲基化率分别为78.9%、80.0%, χ2=5.240、7.039, P值均<0.05),肿瘤最大径≥5 cm和WHO Ⅲ+Ⅳ级患者Dapk1基因甲基化率显著高于肿瘤最大径<5 cm和WHO Ⅰ+Ⅱ级级患者。Dapk1基因甲基化患者中位生存期显著低于未甲基化患者[(13.8±1.1)个月比(16.3±1.5)个月,Logrank=5.107, P<0.05]。 结论:Dapk1基因高甲基化与胶质瘤发病机制有关,有助于胶质瘤病情及预后评估。

DAPK1、ERα、HLA-Ⅰ基因蛋白表达水平与宫颈病变病理进程的相关性

目的从蛋白质水平观察死亡相关蛋白激酶(DAPK1)、人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)、雌激素受体(ER)α基因表达水平与不同病理级别的宫颈病变的相关性。方法收集汉族妇女宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈鳞癌患者石蜡包埋组织标本115例,采用免疫组织化学方法鉴定蛋白表达水平。结果 DAPK-1、ERα、HLA-Ⅰ基因在宫颈炎/CINⅠ组织中阳性表达率分别为90%、76%、88%;在CINⅡ/Ⅲ和宫颈鳞癌中这些基因阳性表达率分别为53%、48%;45%、24%;67%、40%。在CINⅡ/Ⅲ和宫颈鳞癌中这些基因阳性表达率明显低于宫颈炎/CINⅠ,各组阳性表达率差异显著(P<0.05),随着宫颈病变病理变化的加重,基因蛋白阳性表达率逐渐降低。结论 DAPK1、HLA-Ⅰ、ERα基因表达阳性或缺失可能是CIN及宫颈鳞癌的重要生物学特征,与宫颈癌发生关系密切,这些基因的检测可能作为预测CIN和宫颈癌的重要生物指标。

胃癌中DAPK1表达及其与临床病理因素的相关性研究

目的检测胃癌中死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因表达水平,并研究其与临床病理因素间的相关性。方法采用免疫组织化学法(SP)检测胃癌肿瘤组织和癌旁正常组织中DAPK1基因表达,采用半定量评分法评估,分析DAPK1表达水平与胃癌临床病理因素间的相关性。结果胃癌肿瘤组织标本中,DAPK1蛋白质低、中和高表达分别有52、19、5例,评分为(3.7±1.3)分,癌旁正常组织标本中,低、中表达和高表达分别为4、15、57例,评分为(9.4±2.1)分,胃癌肿瘤组织和癌旁正常组织评分差异具有统计学意义(P<0.01)。胃癌肿瘤组织中DAPK1表达在性别、年龄和不同肿瘤部位间差异无统计学意义(P>0.05),而组织学分级、TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移及远处转移对DAPK1表达的影响具有统计学意义(P<0.05);胃癌肿瘤组织DAPK1表达评分与组织学分级、TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移和远处转移呈负相关(P<0.05)。结论 DAPK1在胃癌中的表达与肿瘤细胞的生长、浸润及转移紧密相关,可作为胃癌诊断、病情及预后评估的指标。

DAPK1在弥漫性轴索损伤后大鼠脑组织中的表达及其与神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后神经元凋亡及死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达变化,为临床治疗提供新的靶点及治疗时间窗。方法 40只SD成年雄性大鼠随机分为对照组(n=8)和DAI组(n=32)。DAI组选用大鼠头颅瞬间旋转装置制备DAI模型,分为6h、24h、72h、7d组共4个亚组(n=8)。各组在造模前及处死前采用改良神经功能缺损评分(mNSS)对大鼠神经功能进行评分;同时将各组大鼠一半用于Western bolt检测大鼠胼胝体、脑干组织内DAPK1表达情况;另一半用于TUNEL检测大鼠脑组织内神经元细胞凋亡情况。结果 DAI后大鼠均出现明显体质量下降、神经功能缺失;DAI后6h组大鼠胼胝体、脑干组织可见DAPK1蛋白表达明显升高,并出现明显神经元细胞凋亡,DAI后24h组DAPK1表达及神经元细胞凋亡均到达高峰值,DAI后72h、7d组表达开始下降,仍明显高于对照组。结论 DAI后出现神经功能缺失、体质量下降,可能与损伤后DAPK1表达及神经元细胞凋亡有关,二者在损伤后24h一致性达到高峰;提示DAPK1抑制剂药物治疗时间窗为伤后24h。

DAPK1基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的:研究乳腺癌组织中死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase 1,DAPK1)启动子甲基化状态及其与临床病理特征之间的关系,并探讨该甲基化状态与DAPK1 mRNA表达的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR法检测人乳腺癌组织和相应癌旁正常乳腺组织中DAPK1启动子甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系,并结合半定量RT-PCR法的检测结果加以分析。结果:43例乳腺癌标本中DAPK1启动子甲基化阳性率为44.1%(20/43),DAPK1启动子甲基化状态与年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、ER状态、PR状态、Her2状态无关(P>0.05),而与有无淋巴结转移、P53是否阳性有关(P<0.05)。DAPK1启动子甲基化标本中的DAPK1mRNA表达水平低于未甲基化标本,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:乳腺癌中DAPK1基因启动子区高甲基化与其mRNA失表达有关,在乳腺癌发生、发展中可能起重要作用,有可能作为乳腺癌诊断和预后分析的检测指标之一。

水杨酸钠诱导大鼠耳蜗中DAPK1表达改变

目的探讨死亡相关蛋白激酶1(death associated protein kinase 1,DAPK1)是否参与水杨酸钠损伤听觉系统的过程。方法将听性脑干反应(ABR)反应阈小于40dB和畸变产物耳声发射(DPOAE)筛查通过的40只SD大鼠随机分为2组:对照组(control组)和水杨酸钠组(SS组)。SS组腹腔注射350mg/kg/d水杨酸钠,对照组腹腔注射等量生理盐水。造模结束后通过ABR、DPOAE等电生理方法确认听觉损害程度;通过HE染色及免疫组化等形态学方法检测耳蜗的病理生理变化和DAPK1蛋白表达分布情况;应用实时荧光定量PCR对各组大鼠耳蜗组织中DAPK1 mRNA转录表达情况进行检测。结果SS组DAPK1 m RNA和蛋白表达水平较对照组表达均减少,差异具有统计学意义,且改变主要集中于耳蜗螺旋神经节(SNG)区域。结论水杨酸钠使大鼠耳蜗尤其SNG中DAPK1的表达下调,DAPK1参与水杨酸钠损伤听觉系统的过程。

DAPK-1与p62/SQSTM1在早发型重度子痫前期患者胎盘组织中表达及临床意义

目的:探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK-1)和自噬受体蛋白p62(p62/SQSTM1)在早发型重度子癫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测66例胎盘组织石蜡标本中DAPK-1和p62/SQSTM1的表达,其中早发型重度PE标本26例、晚发型重度PE 40例,正常孕妇30例(对照组)。结果:DAPK-1在对照组、晚发型重度PE组、早发型重度PE组中的阳性表达率分别为23.3%(7/30)、52.5%(21/40)、92.3%(24/26)有差异(P<0.05);早发型重度PE阳性表达较对照组、晚型重度PE组高(P<0.05);晚发型重度PE阳性表达较对照组高(P<0.05)。p62/SQSTM1在对照组、晚发型重度PE组、早发型重度PE中的阳性表达率分别为76.7%(23/30)、47.5%(19/40)、19.2%(5/26)有差异(P<0.05);早发型重度PE阳性表达较对照组、晚发型重度PE组低(P<0.05);晚发型重度PE阳性表达较对照组低(P<0.05)。DAPK-1和p62/SQSTM1的表达呈负相关(r=-0.505)。结论:DAPK-1与p62/SQSTM1可能与PE的发生发展和严重程度相关。

慢病毒敲减质粒pLKO.1-shDAPK1的构建及其对细胞凋亡的影响

目的 构建敲减死亡相关蛋白激酶1(shDAPK1)基因的慢病毒质粒及稳转神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y),并检测SH-SY5Y细胞中DAPK1敲减后对细胞凋亡的影响。方法 设计并合成特异性敲减DAPK1基因的上下游引物,将引物退火后与双酶切PLKO.1载体经T4连接酶连接、转化、提取质粒并进行DNA测序,获得重组正确的慢病毒干扰质粒pLKO.1-shDAPK1。将该重组的质粒与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染HEK293T细胞,72 h后收集慢病毒上清液,感染SH-SY5Y细胞,利用嘌呤霉素进行阳性筛选,得到稳定敲减DAPK1的SH-SY5Y细胞系。利用Western blot检测SH-SY5Y稳转细胞系中DAPK1蛋白以及用1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)处理后的Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表达水平,并应用流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。结果 重组pLKO.1-shDAPK1质粒的测序比对结果正确,嘌呤霉素筛选后获得shDAPK1稳转SH-SY5Y细胞系(shDAPK1-SY5Y),该稳转细胞系中DAPK1蛋白表达水平与对照组相比显著下降,此外还上调了Bcl-2蛋白的表达,下调Bax、Caspase-3蛋白的表达且流式检测结果显示该细胞系凋亡发生率明显下降。结论 成功构建了慢病毒敲减质粒pLKO.1-shDAPK1,并建立了DAPK1低表达的SH-SY5Y稳定感染细胞系,明显抑制了细胞凋亡。

藁本内酯通过抑制DAPK1表达对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨藁本内酯(LIG)调控死亡相关蛋白激酶(DAPK)1表达对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用。方法将肺泡上皮细胞(A549)分为对照组,感染组,感染+LIG-低组、感染+LIG-中组、感染+LIG-高组、感染+si-NC组、感染+si-DAPK1组、感染+LIG+pcDNA组、感染+LIG+pcDNA-DAPK1组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-10和IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR检测DAPK1 mRNA的表达水平;Western印迹检测DAPK1蛋白、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3的表达水平。结果与对照组比较,感染组IL-6水平显著升高,IL-10水平显著降低(均P<0.05);与感染组比较,感染+LIG-低、中、高组IL-6水平均显著降低,IL-10水平均显著升高,且呈显著的浓度依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,感染组凋亡率显著增加,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,Bax和酶切caspase3蛋白的表达水平显著升高(均P<0.05);与感染组比较,感染+LIG-低、中、高组细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高,Bax和酶切caspase3蛋白水平显著降低,且呈显著的浓度依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,感染组DAPK1 mRNA和DAPK1蛋白水平显著升高(均P<0.05);与感染组比较,感染+LIG-低、中、高组DAPK1 mRNA和DAPK1蛋白水平显著降低,且呈显著的剂量依赖性(均P<0.05)。后续选取LIG 40μmol/L浓度进行实验。与对照组比较,感染组DAPK1蛋白、IL-6、Bax蛋白、酶切caspase3蛋白水平显著升高,IL-10和Bcl-2蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高(均P<0.05);与感染+si-NC组比较,感染+si-DAPK1组DAPK1蛋白、IL-6、Bax蛋白、酶切caspase3蛋白水平显著降低,IL-10和Bcl-2蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低(均P<0.05)。与感染组比较,感染+LIG组DAPK1蛋白、IL-6、Bax蛋白、酶切caspase3蛋白水平显著降低,IL-10和Bcl-2蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低;与感染+LIG+pcDNA组比较,感染+LIG+pcDNA-DAPK1组DAPK1蛋白、IL-6、Bax蛋白、酶切caspase3蛋白水平显著升高,IL-10和Bcl-2蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。结论LIG通过抑制DAPK1表达对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤有保护作用。

胞二磷胆碱对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元保护作用的研究

目的探讨胞二磷胆碱对大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑细胞功能变化的影响,评估药物的治疗价值。方法采用大鼠头部瞬间旋转损伤装置制备DAI模型,通过胞二磷胆碱及神经元凋亡通路抑制剂辛伐他汀干预控制,对比观察胞二磷胆碱对DAI大鼠神经修复的作用,于术后24、48、72 h及7d提取脑组织标本,western blot法检测SDF-1和神经元凋亡及死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)的表达变化,并检测β-APP的表达来指示轴突的损伤程度,用免疫荧光染色指示Rh OA和NOGO-A表达的相关性。结果 DAI模型组24 h后均出现明显的神经细胞坏死和轴突变性等病理改变;大脑皮层Rh OA、NOGO-A、SDF-1和DAPK1随着DAI后时间的延长而增加,经免疫荧光双染色显示两者在脑内的表达有显著的同一性;胞二磷胆碱及辛伐他汀能明显降低SDF-1和DAPK1的表达,胞二磷胆碱作用更加显著。结论胞二磷胆碱可明显改善DAI后神经功能并减轻轴突损伤。

曲古菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPK1基因表达的影响

目的探讨曲古菌素A(TSA)体外抑制人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因表达的影响。方法体外培养的胃癌细胞以不同浓度的TSA(37.5、150、600ng/ml)处理后,用AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡率,RT-PCR、Westernblot分别检测DAPK1mRNA和蛋白表达水平。结果 AnnexinⅤ/PI检测发现,不同浓度TSA可显著诱导SGC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性(P<0.05);TSA干预前SGC-7901细胞DAPK1mRNA和蛋白表达水平很低,不同浓度TSA处理SGC-7901细胞DAPK1mRNA和蛋白表达水平明显上调,呈溶度及时间依赖性(P<0.05)。结论 TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与DAPK1基因的低乙酰化状态逆转有关。