皮肤黑素瘤中细胞分裂周期相关蛋白8的表达水平及功能学分析

目的基于生物信息学方法分析CDCA8在皮肤黑素瘤组织中的表达水平及其相关生物学功能。方法TCGA数据库中下载皮肤黑素瘤数据集,分析CDCA8在皮肤黑素瘤组织中的表达,K-M曲线分析皮肤黑素瘤组织中CDCA8表达水平与总体生存率的关系,UALCAN数据库筛选皮肤黑素瘤中与CDCA8的共表达基因,并对共表达基因进行GO和KEGG富集分析。TIMER数据库分析皮肤黑素瘤组织中CDCA8与免疫细胞浸润的相关性。HPA数据库验证CDCA8在皮肤黑素瘤组织及正常组织中的表达差异。结果与正常组织相比,CDCA8在皮肤黑素瘤组织中明显高表达(P<0.5);与皮肤黑素瘤TP-53野生型相比,CDCA8表达水平在TP-53突变型中明显升高(P<0.05)。皮肤黑素瘤中CDCA8高表达组总体生存率显著低于CDCA8低表达组(HR=1.500,P=0.005)。皮肤黑素瘤组织中CDCA8共表达基因主要富集于细胞核、细胞质、细胞分裂、细胞周期、DNA修复、蛋白结合、RNA结合、细胞周期、DNA复制及细胞核质转运等过程。皮肤黑素瘤中CDCA8与B细胞(r=0.166,P<0.001)、CD8^(+)T细胞(r=0.176,P<0.001)、中性粒细胞(r=0.193,P<0.001)及树突状细胞(r=0.230,P<0.001)浸润程度存在显著正相关性。免疫组化显示CDCA8在皮肤黑素瘤组织中均呈现高强度表达,而在正常组织中无表达或低表达。结论CDCA8在皮肤黑素瘤组织中呈现高表达状态,与患者不良预后显著相关,CDCA8可能通过调控细胞周期及免疫细胞浸润参与皮肤黑素瘤的发病机制。

三结构域蛋白8、Ras相关蛋白35、多聚ADP核糖聚合酶1在子宫内膜癌组织中的表达及检测临床意义

目的:探讨三结构域蛋白8(TRIM8)、Ras相关蛋白35(Rab35)、多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及检测临床意义。方法:选择75例EC患者为研究对象,取手术切除的EC组织及癌旁正常子宫内膜组织,以免疫组织化学法检测EC组织和癌旁组织中TRIM8、Rab35、PARP-1蛋白表达情况,并结合患者临床病理因素分析其与临床病理特征的关系,随访5年,记录EC患者生存率,并分析EC患者预后影响因素。结果:Rab35、PARP-1蛋白在EC组织和癌旁组织中阳性表达率分别为71.00%和35.00%、74.00%和43.00%,TRIM8蛋白阳性表达率分别为30.00%和69.00%(均P<0.01)。EC组织中Rab35与PARP-1为正相关性,Rab35和PARP-1与TRIM8表达为负相关性(r=0.542、-0.461、-0.461,均P<0.05)。Rab35阳性患者5年生存率55.17%低于阴性患者70.57%,PARP-1阳性患者5年生存率65.96%低于阴性患者79.24%,TRIM8阳性患者5年生存率93.33%高于阴性患者72.73%(均P<0.05)。FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、肌层浸润深度≥1/2和PARP-1、TRIM8、Rab35表达异常为影响EC患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论:子宫内膜癌组织PARP-1、Rab35表达升高、TRIM8表达降低,三者表达变化与子宫内膜癌的发生、发展有显著相关性。

抑郁症180例血清S100钙结合蛋白A8和S100钙结合蛋白A9表达与抑郁程度的相关性分析

目的探讨抑郁症病人血清S100钙结合蛋白A(S100A)8、S100A9表达水平,以及二者与抑郁程度的相关性。方法选取中国人民解放军空军第九八六医院2019年1月至2022年10月收治的180例抑郁症病人作为研究组,另外选取174例同期体检健康的志愿者作为对照组,采用酶联免疫吸附测定检测血清S100A8、S100A9水平,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)评估抑郁症病人的抑郁程度,其中7~17分判定为轻度抑郁病人(78例)、18~24分为中度抑郁病人(53例)、>24分为重度抑郁病人(49例),采用Spearman法分析血清S100A8和S100A9与病人抑郁程度的相关性。Pearson法分析血清S100A8和S100A9与炎症因子的相关性。logistic回归分析影响病人抑郁程度的因素。结果研究组血清S100A8[(6.57±1.74)μg/L]、S100A9[(7.36±2.07)μg/L]以及炎症因子白细胞介素(IL)-6[(15.37±3.56)ng/L]、IL-1β[(9.57±2.89)ng/L]、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)[(24.24±5.28)ng/L]水平显著高于对照组[(3.98±1.18)μg/L、(4.14±1.25)μg/L、(12.98±3.86)ng/L、(6.98±1.45)ng/L、(18.45±4.19)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);研究组病人抑郁症家族史、体力活动时间与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);血清S100A8和S100A9水平在轻、中、重度抑郁病人中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05);经Spearman法分析发现,血清S100A8和S100A9及IL-6、IL-1β、TNF-α均与病人抑郁程度呈正相关(r=0.54、0.44、0.41、0.44、0.51,P<0.05);经Pearson法分析,血清S100A8水平分别与IL-6、IL-1β、TNF-α呈正相关(r=0.35、0.41、0.45,P<0.05),血清S100A9水平分别与IL-6、IL-1β、TNF-α呈正相关(r=0.37、0.38、0.44,P<0.05)。logistic回归分析,结果显示S100A8、S100A9、IL-6、IL-1β、TNF-α是抑郁症病人抑郁程度的影响因素(P<0.05)。结论S100A8、S100A9在抑郁症病人血清中表达上调,与病人的抑郁程度密切相关。

8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者血糖在目标范围内时间的相关性及预测糖尿病周围神经病变的价值

目的探讨8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α)、镍纹样蛋白(Metrnl)、微管相关蛋白3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/微管相关蛋白-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)与2型糖尿病(T2MD)患者血糖在目标范围内时间(TIR)的相关性及对糖尿病周围神经病变(DPN)预测价值。方法选取2020年5月至2022年10月新乡医学院第一附属医院收治的187例T2DM患者进行前瞻性研究,根据是否合并DPN分为DPN组(n=48)和无DPN组(n=139)。比较两组患者及根据TIR四分位数分组的患者8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ水平,采用Pearson相关性分析8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR相关性,采用多因素Logistic回归分析DPN的相关影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ预测DPN的价值。结果DPN组患者的TIR为(51.43±7.68)%,明显低于无DPN组的(56.94±8.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);DPN组患者的8-isoPGF2α、Metrnl分别为(162.78±51.33)pg/mL、(259.18±74.42)pg/mL,明显高于无DPN组的(129.56±43.00)pg/mL、(208.37±65.61)pg/mL,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ为0.89±0.27,明显低于无DPN组的1.15±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);根据TIR第25、50、75百分位数将全部患者分为Q1~Q4四组,8-isoPGF2α、Metrnl在Q4组最低,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ在Q4组最高;8-isoPGF2α、Metrnl随着TIR降低逐渐升高,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ随着TIR降低而降低,四组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,8-isoPGF2α、Metrnl与TIR呈显著负相关(r=-0.786、-0.665,P<0.01),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR呈显著正相关(r=0.711,P<0.01);多因素Logistic回归分析结果显示,TIR、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ是DPN的独立相关保护因素(P<0.05),8-isoPGF2α、Metrnl是DPN的独立相关危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,单一指标中,Metrnl预测DPN的AUC最大(0.830),特异度最高(87.05%),8-isoPGF2α+Metrnl+LC3B-Ⅱ预测DPN的AUC为0.923(95%CI:0.875~0.957),大于Metrnl,预测敏感度为87.50%,特异度为85.61%(P<0.05)。结论8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者TIR有关,均是患者并发DPN的预警因素。联合检测三者能为临床分层管理和早期识别DPN高风险人群提供参考。

结直肠癌组织PAX8、SFRP4表达水平及与患者临床病理特征、预后的相关性研究

目的探究结直肠癌(CRC)组织配对盒基因8(PAX8)和分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)表达水平与患者临床病理特征及预后的相关性研究。方法前瞻性选取2019年1月至2021年10月西安交通大学医学院附属陕西省肿瘤医院病理科就诊的125例CRC患者在手术中切除的CRC组织及癌旁组织(距离CRC组织>2 cm)标本。收集整理CRC患者年龄、性别、糖尿病、高血压、组织学分型、肿瘤部位、附件转移、淋巴结转移、肿瘤淋巴结转移(TNM)分期、组织分级、淋巴结状态、肿瘤直径等临床资料。采用免疫组织化学染色法(IHC)检测PAX8和SFRP4表达水平;采用Spearman等级相关分析对癌组织PAX8和SFRP4表达的相关性进行分析;采用Kaplan-Meier法进行CRC患者预后生存分析。结果PAX8和SFRP4在癌组织的高表达率为64.80%、59.20%,均高于癌旁组织(32.80%、36.80%),差异均有统计学意义(P<0.05),且两者的表达具有相关性(r=0.479,P<0.05)。PAX8和SFRP4表达与年龄、性别、糖尿病、高血压、组织学分型、肿瘤部位、附件转移、肿瘤直径等无关,差异均无统计学意义(P>0.05);PAX8和SFRP4表达与淋巴结转移、TNM分期、组织分级、淋巴结状态有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。高表达PAX8和SFRP4的CRC患者术后2年预后不良率分别为37.04%和37.84%,均高于低表达PAX8和SFRP4(15.91%、17.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PAX8和SFRP4在CRC组织中高表达,且两者具有一定的相关性,高表达的PAX8和SFRP4可作为CRC患者预后不良的重要指标。

细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21在HHV-8病毒裂解复制周期的作用

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)病毒裂解复制周期的影响。方法组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA预处理后,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)阳性的iSLK.219细胞数,实时定量PCR检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8病毒相关基因的mRNA水平。脂质体转染p21-siRNA后,免疫印迹法检测iSLK.219和TREx-K-Rta BCBL-1细胞中p21蛋白表达,计算RFP阳性iSLK.219细胞百分率,检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中ORF50和PAN的mRNA水平,CCK-8法和台盼蓝染色观察细胞存活情况。结果SAHA显著增强iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K8.1的mRNA水平和p21蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默p21后,iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50和PAN mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且保护SAHA介导的TREx-K-Rta BCBL-1细胞死亡。结论抑制HDAC活性通过调控p21促进HHV-8病毒裂解复制。

基于MRI研究血清GH、8-OHdG、HMGB1与新生儿缺氧缺血性脑病临床分度的相关性

目的 研究血清生长素(GH)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、高迁移率族蛋白(HMG)B1与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)临床分度的相关性。方法 选取2019年1月至2022年12月在秦皇岛市第一医院进行诊断并治疗的120例HIE患儿作为研究组,另选取同期健康新生儿120例作为对照组,比较研究组及对照组、不同临床分度及不同磁共振成像(MRI)评分的血清GH、8-OHdG、HMGB1的差异。采用Spearman相关性分析研究对象临床分度、MRI评分与血清GH、8-OHdG、HMGB1水平的相关性。结果 研究组血清GH低于对照组,8-OHdG、HMGB1高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为22.828、48.563、98.440,P<0.05);不同病情患儿的血清GH、8-OHdG、HMGB1水平及MRI评分差异存在统计学意义,进一步两两比较,患儿的血清GH、HMGB1水平从高到低依次为轻度组、中度组及重度组,8-OHdG及MRI评分从高到低依次为重度组、中度组及轻度组(F值分别为13.055、13.150、12.710、14.205,P<0.05);不同MRI评分患儿血清GH、8-OHdG、HMGB1水平差异存在统计学意义,进一步两两比较,患儿的血清GH、HMGB1水平从高到低依次为0~3分组、4~7分及8~10分组,8-OHdG从高到低依次为8~10分组、4~7分组及0~3分组(F值分别为15.432、13.674、19.076,P<0.05);相关性分析结果显示,患儿的临床分度、MRI评分与GH、HMGB1呈负相关性(r值分别为-0.738、-0.666,-0.579、-0.671,P<0.05),与8-OHdG呈正相关性(r值分别为0.617、0.690,P<0.05)。结论 血清GH、8-OHdG、HMGB1与新生儿缺氧缺血性脑病临床分度呈现显著相关性,可作为临床诊断的重要依据。

CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA与老年肾衰竭血液透析患者细菌感染的相关性及诊断价值

目的 研究外周血CD4^(+)/CD8^(+)、人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)和淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)与接受维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)治疗的老年慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)患者细菌感染的相关性及其诊断价值。方法 选取2019年10月—2021年10月在海南省中医院接受MHD治疗的老年CRF患者合并细菌感染者61例(感染组)和未合并感染者104例(非感染组)为样本开展横断面研究,检测2组CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA表达水平并进行比较,建立Logistics回归模型分析各指标与老年CRF患者MHD治疗期间细菌感染的关系并作受试者工作特征(ROC)曲线分析其诊断价值。结果 感染组CD8^(+)(t=2.573,P=0.011)、NGAL(t=6.670,P<0.001)和SAA(t=10.116,P<0.001)表达水平高于非感染组,CD4^(+)(t=8.514,P<0.001)、CD4^(+)/CD8^(+)(t=3.904,P<0.001)表达水平低于非感染组。校正年龄、性别和透析龄等基本资料后进行Logistics回归分析(因变量赋值感染组=1,非感染组=0)显示CD4^(+)/CD8^(+)(OR=0.586,95%CI:0.440~0.780,P<0.001)、NGAL(OR=1.324,95%CI:1.149~1.525,P<0.001)和SAA(OR=1.419,95%CI:1.251~1.610,P<0.001)均与老年CRF患者MHD治疗期间细菌感染存在密切联系;ROC曲线分析显示CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA用于老年MHD患者细菌感染诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.576、0.738和0.838,敏感度分别为54.10%、62.30%和77.05%,特异度分别为63.46%、83.65%和77.88%,将3项指标建立Logistics回归模型进行综合判断,结果显示AUC为0.886,敏感度为85.25%,特异度为79.81%。结论 接受MHD治疗的老年CRF患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA与细菌感染存在密切联系,检测CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA表达水平变化可为细菌感染早期准确诊断提供参考依据。

血清s PD-L1、CXCL8、SAA水平与咳嗽变异性哮喘患儿病情严重程度的相关性

目的:分析血清可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)、CXC趋化因子配体8(CXCL8)、血清淀粉样蛋白A(SAA)水平与咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿病情严重程度的相关性。方法:回顾性分析2021年5月至2023年5月该院收治的100例CVA患儿的临床资料,设为研究组,另回顾性分析同期100名健康体检儿童的临床资料,设为对照组,并根据CVA患儿入院时病情严重程度,将其分为中度CVA患儿(n=50)和重度CVA患儿(n=50)。比较两组、不同病情严重程度CVA患儿入院时及治疗2、4周血清sPD-L1、CXCL8、SAA水平,分析血清sPD-L1、CXCL8、SAA水平与CVA患儿病情严重程度的相关性。结果:研究组入院时及治疗2、4周血清sPD-L1、CXCL8、SAA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度CVA患儿入院时及治疗2、4周血清sPD-L1、CXCL8、SAA水平均高于中度CVA患儿,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,入院时及治疗2、4周,血清sPD-L1、CXCL8、SAA水平与CVA患儿病情严重程度均呈正相关(r>0,P<0.05)。结论:血清sPD-L1、CXCL8、SAA水平与CVA患儿病情严重程度均呈正相关。

外周血CD4^(+)/CD8^(+)、降钙素原和C反应蛋白水平对老年呼吸机相关性肺炎患者预后的预测价值

目的探讨外周血CD4^(+)/CD8^(+)、降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)水平对老年呼吸机相关性肺炎(VAP)患者预后的预测价值。方法选择2019年9月至2020年10月西安国际医学中心医院胸科医院收治的93例老年VAP患者为VAP组,另选择同期体检健康者86例为对照组。VAP患者于确诊后第2天、对照组受试者于体检当日检测外周血中T淋巴细胞亚群及PCT、CRP水平,并计算CD4^(+)/CD8^(+)值;所有VAP患者确诊后随访28 d,统计VAP组患者的病死率;通过查阅病历采集VAP患者的临床资料,对VAP患者死亡的影响因素进行单因素分析,采用logistic回归模型分析VAP患者死亡的危险因素,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析外周血CD4^(+)/CD8^(+)、PCT、CRP水平对老年VAP患者预后的预测价值。结果VAP组患者的外周血CD4^(+)/CD8^(+)水平显著低于对照组,PCT、CRP水平显著高于对照组(P<0.05)。随访28 d内,93例VAP患者中,存活65例(存活组),死亡28例(死亡组),病死率为30.11%(28/93)。死亡组患者的外周血CD4^(+)/CD8^(+)水平显著低于存活组,PCT、CRP水平显著高于存活组(P<0.05)。单因素分析结果显示,昏迷、急性生理与慢性健康评估评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分与VAP患者死亡有关(P<0.05),性别、年龄、吸烟史、饮酒史、合并症、慢性肺疾病、胃反流、使用制酸剂、留置胃管、气管切开、白蛋白水平、血糖、机械通气时间及住院时间与VAP患者死亡无关(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,APACHEⅡ评分及外周血PCT、CRP水平是老年VAP患者死亡的独立危险因素(P<0.05),外周血CD4^(+)/CD8^(+)是老年VAP患者死亡的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血CD4^(+)/CD8^(+)、PCT、CRP水平预测老年VAP患者死亡的最佳截断点分别为0.881、1.403μg·L^(-1)、0.682 mg·L^(-1),灵敏度分别为85.71%、89.29%、82.14%,特异度分别为92.31%、81.54%、96.92%,曲线下面积分别为0.953、0.848、0.872。结论老年VAP患者病死率较高,外周血PCT、CRP水平是老年VAP患者死亡的独立危险因素,外周血CD4^(+)/CD8^(+)是老年VAP患者死亡的保护因素,外周血CD4^(+)/CD8^(+)、PCT、CRP对老年VAP患者的预后具有一定的预测价值。

肺腺癌组织细胞分裂周期相关蛋白8蛋白表达及与临床病理参数、预后关系分析

目的:分析肺腺癌(LUAD)组织细胞分裂周期相关蛋白8(CDCA8)蛋白表达水平,并探究CDCA8蛋白表达与临床病理参数、预后的关系。方法:选择98例LUAD患者,按照CDCA8蛋白表达水平分为高阳性组(67例)和低阳性组(31例)。收集并比较两组临床病理参数,并通过生存曲线来比较两组LUAD患者无病生存率和总生存率。结果:以CDCA8蛋白表达为因浓度变量,并以TNM分期、肿瘤体积、淋巴结转移、脏层胸膜侵犯为协变量,Logistics回归分析结果显示肿瘤体积(10~30 mm^(2)、>30 mm^(2))、淋巴结转移是CDCA8蛋白高阳性表达的影响因素(P<0.05)。CDCA8蛋白高阳性组无病生存率、总生存率为28.5%、60.9%,低于低阳性组的51.6%、80.0%(均P<0.05)。结论:LUAD组织CDCA8(1∶500稀释)蛋白表达与临床病理参数、预后存在直接关联,检测CDCA8(1∶500稀释)蛋白表达水平可以帮助临床医生判断LUAD患者病情进展和预后,利于指导治疗方案制定。

阿尔茨海默病患者血浆脂蛋白相关磷脂酶A2、8-羟基脱氧鸟苷酸的水平表达及临床意义

目的:探讨血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)水平表达对阿尔茨海默病(AD)患者的临床意义.方法:选取本院2019年8至2022年7月收治的148例AD患者作为AD组,另选取同期137例健康志愿者作为对照组.比较AD组与对照组Lp-PLA2、8-OHdG水平、睡眠质量及认知功能.比较不同睡眠质量及不同程度认知障碍AD患者的Lp-PLA2、8-OHdG水平.结果:AD组Lp-PLA2、8-OHdG水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AD组蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分低于对照组,匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).有睡眠障碍的AD患者Lp-PLA2、8-OHdG水平均高于无睡眠障碍的AD患者,差异有统计学意义(P<0.05);随着的AD患者认知障碍程度的加重,Lp-PLA2、8-OHdG水平逐渐上升,差异有统计学意义(P<0.05).结论:AD患者Lp-PLA2、8-OHdG高水平者出现睡眠障碍及认知功能障碍风险相对更高,通过检测Lp-PLA2、8-OHdG水平可为早期诊治提供依据.

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

幽门螺杆菌相关胃病脾胃湿热证患者热休克蛋白70和白细胞介素-8的表达

目的通过检测幽门螺杆菌(Hp)相关胃病脾胃湿热证患者白细胞介素-8(IL-8)及热休克蛋白70(HSP70)的表达,探讨Hp相关胃病脾胃湿热证发生的病理机制。方法选择脾胃湿热证和脾气虚证的慢性胃炎、消化性溃疡患者75例,招募健康志愿者10例作为正常对照。采用免疫组织化学标记法、荧光定量PCR法检测各组胃黏膜HSP70、IL-8蛋白及m RNA的表达。结果 HSP70、IL-8蛋白和m RNA表达水平呈现脾胃湿热证患者>脾气虚证患者>正常对照者的趋势。Hp感染者HSP70、IL-8蛋白和m RNA表达水平较非感染者有偏高趋势。结论 HSP70、IL-8的表达与证型及Hp感染可能存在一定的相关性,HSP70表达水平与Hp感染的关系可能部分体现脾胃湿热证的"正邪交争"状态,IL-8的高表达可能为脾胃湿热证Hp作用于胃黏膜的机制之一。

半胱氨酸蛋白酶8相关蛋白2及微小残留病灶的联合检测在儿童急性淋巴细胞白血病中的预后意义

目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿初诊骨髓样本中半胱氨酸蛋白酶8相关蛋白2(CASP8AP2)的表达水平及其临床意义。方法 2008年4月至2009年8月,首都医科大学附属北京儿童医院收治的初发儿童ALL为研究对象,使用RQ-PCR方法检测初诊骨髓样本中CASP8AP2的表达水平。根据ROC曲线界值将CASP8AP2水平分为高表达组和低表达组;以第33天微小残留病灶(MRD)水平分为MRD高表达和低表达组;以CASP8AP2联合第33天MRD表达水平分为高危组、中危组和低危组。分析CASP8AP2、MRD以及两者联合对预后判断的价值。结果 81例ALL患儿纳入分析,男女比例1.6∶1。①复发组CASP8AP2表达显著低于非复发组,(0.45±0.31)vs(0.77±0.35),P=0.0021;CASP8AP2高表达和低表达组的复发率分别为3.2%(2/62)和42.1%(8/19),差异有统计学意义(P<0.001),ROC曲线下面积(AUC)为0.851,95%CI:0.700～1.002。②MRD高表达组和低表达组复发率分别为23.7%(9/38)和2.3%(1/43),差异有统计学意义。ROC曲线分析显示,AUC为0.890,95%CI:0.773～1.007。③CASP8AP2-MRD低危组37例无复发,中危组2/31例(6.4%)复发,高危组8/13例(6.2%)复发,差异有统计学意义(P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,CASP8AP2-MRD高危组的无事件生存时间及总生存时间显著低于中危组和低危组。ROC曲线分析显示,AUC为0.917,95%CI:0.837～0.997。结论 CASP8AP2的表达水平结合MRD可准确的判断儿童ALL的预后。

盐酸戊乙奎醚对多发伤致急性肺损伤患者血浆肺表面活性物质相关蛋白D、肿瘤坏死因子α和白细胞介素8水平的影响

目的观察盐酸戊乙奎醚对多发伤致急性肺损伤(ALI)患者血浆中肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)水平的影响及其临床疗效。方法选择多发伤致急性肺损伤患者40例,随机分成两组,实验组和对照组,每组20例。对照组给予常规标准治疗,实验组在对照组的基础上每12 h给予盐酸戊乙奎醚(长托宁,PHC)2 mg,持续7 d,分别于给药前、给药第3天和给药第7天,比较患者在SP-D、TNF-α、IL-8及氧合指数(Pa O2/Fi O)2、肺损伤评分(LIS)的变化及差异。结果与治疗前比较,实验组在给药第3天和第7天,患者血浆中SP-D、TNF-α和IL-8水平明显下降(P<0.05),并且Pa O2/Fi O2明显上升,LIS明显降低(P<0.05);而对照组改变不明显(P>0.05)。与对照组比较,在各时间点,实验组的各项指标均明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论盐酸戊乙奎醚能抑制炎症反应,减轻肺组织的损伤,改善氧合,能有效缓解多发伤导致的急性肺损伤。

癸酸能够活化CD8^(+)T细胞并提高其抗肿瘤免疫反应能力

目的:探究中链脂肪酸癸酸对CD8^(+)T细胞活化的影响,及其对CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的作用和机制。方法:建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16F10皮下荷瘤模型,随机分为癸酸组(10 mg/kg癸酸灌胃)和对照组(等量溶剂灌胃),观察癸酸对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响,采用流式细胞术检测肿瘤微环境中浸润CD8^(+)T细胞的活化水平。建立B16F10-OVA和OT-I T细胞共培养体系,采用流式细胞术检测癸酸对CD8^(+)T细胞的肿瘤细胞杀伤能力的影响。采用α-CD8抗体清除B16F10荷瘤小鼠体内CD8^(+)T细胞,观察对小鼠肿瘤体积的影响。小鼠原代CD8^(+)T细胞经癸酸处理后,采用WB、ELISA及qPCR、流式细胞术检测T细胞受体(TCR)活化、效应细胞因子产生以及增殖和代谢水平。在B16F10荷瘤小鼠模型中,观察α-PD-1抗体联合癸酸给药对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响。结果:在小鼠黑色素瘤荷瘤模型中,与对照组相比,癸酸组小鼠移植瘤体积显著降低且生存率显著提高(均P<0.05),肿瘤浸润CD8^(+)T细胞IFN-γ和TNF-α的表达水平显著升高(P<0.01)。经癸酸处理的OT-I T细胞对B16F10-OVA细胞的杀伤水平显著升高(P<0.01)。在荷瘤小鼠模型中用α-CD8抗体清除CD8^(+)T细胞后,癸酸对移植瘤的抑制作用显著降低(P<0.0001)。小鼠原代CD8^(+)T细胞经癸酸处理后,TCR活化水平显著升高、细胞因子IL-2和IFN-γ的产生增多、线粒体代谢水平显著上调(均P<0.05)。在黑色素瘤荷瘤小鼠模型中,癸酸与α-PD-1抗体联用,能够显著抑制小鼠移植瘤生长并提高其生存率(均P<0.05)。结论:癸酸能够促进CD8^(+)T细胞活化、增强其抗肿瘤免疫反应能力。

刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用

目的制备、评价特异性抗刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白8(autophagy protein 8,TgAtg8)多克隆抗体。方法生物信息学方法分析弓形虫基因组中自噬相关蛋白的基因序列和氨基酸序列。以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgAtg8编码基因,克隆入pGEX-6p-1载体,构建pGEX-6p-1-TgAtg8重组质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签亲和层析法纯化表达产物。以纯化的TgAtg8蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,获得特异性抗TgAtg8多克隆抗体。以制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western blotting分析和间接免疫荧光(IFA)检测。结果双酶切和测序结果证实,原核表达质粒pGEX-6p-1-TgAtg8构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,TgAtg8蛋白在E.coli BL21中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约40 000,与理论值相近。Western blotting结果证实,所制备的多克隆抗体能特异性识别融合蛋白TgAtg8和虫株体内天然的TgAtg8蛋白。IFA实验表明,TgAtg8均匀分布于虫体胞浆中,但在自噬诱导培养后,TgAtg8逐渐聚集成颗粒状。结论制备的特异性抗TgAtg8多克隆抗体可用于检测虫体内TgAtg8蛋白在弓形虫自噬形成过程中的变化情况。

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8海马神经元凋亡相关蛋白影响的研究

目的观察地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8海马神经元凋亡相关蛋白的影响,探讨地黄饮子治疗AD的作用机制。方法以快速老化小鼠SAMP8为研究对象,依据"补肾益髓,化痰行瘀,开窍醒神"的原则,给予地黄饮子灌胃,1次/d,连续灌胃28 d。采用免疫组化法观察地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8小鼠海马组织凋亡相关蛋白bax、bcl-2及cyt-c的影响。结果与模型组比较,地黄饮子可降低快速老化小鼠bax、cyt-c的表达,提高bcl-2的表达。结论地黄饮子可改善SAMP8小鼠海马神经元的细胞凋亡情况。

T细胞死亡相关基因8对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨活化T细胞死亡相关基因8(T cell death associated gene 8,TDAG8)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法:将健康成年雄性SD大鼠132只采用随机数字表法分为6组:对照组(n=18),缺血再灌注组(I/R组,n=42),TDAG8激动剂BTB09089组(BTB组,n=18),空白载体组(空载体组,n=18),TDAG8-siRNA阴性对照组(siRNA阴性组,n=18)和TDAG8-siRNA组(siRNA组,n=18)。采用线栓法短暂性阻塞大鼠大脑中动脉(middle cerebral artery occlusion,MCAO)制备大鼠局灶性脑I/R模型。BTB组、空载体组、siRNA阴性组和siRNA组于缺血前72 h、48 h和24 h分别经侧脑室注射20μmol/L的BTB09089、空白转染试剂jetPEI、4μg siRNA阴性对照和4μg TDAG8-siRNA各8μL,其中空载体组、siRNA阴性组和siRNA组同时均注入等量转染试剂jetPEI。于再灌注6 h时每组取6只大鼠断头取脑,蛋白质印迹法检测缺血半暗带TDAG8、cleaved caspase-3、Bcl-2和TDAG8下游相关蛋白p-Akt、p-CREB的表达水平;于再灌注24 h和72 h时每组分别取6只大鼠评价神经功能并测定脑梗死体积百分比。结果:与对照组比较,其他5组再灌注6 h时缺血半暗带TDAG8、cleaved caspase-3、p-Akt和p-CREB表达均上调(均P<0.05),Bcl-2表达下调(P<0.05),再灌注24 h和72 h时脑梗死体积百分比明显升高、神经功能缺陷评分显著降低(均P<0.05);与I/R组比较,BTB组再灌注6 h时TDAG8、Bcl-2、p-Akt和p-CREB水平上调(均P<0.05),cleaved caspase-3表达下调(P<0.05),再灌注24 h和72 h时脑梗死体积百分比显著降低,神经功能缺陷评分明显升高(均P<0.05);与siRNA阴性组比较,siRNA组再灌注6 h时TDAG8、Bcl-2、p-Akt和p-CREB水平下调(P<0.05),cleaved caspase-3表达上调(P<0.05),再灌注后24 h和72 h脑梗死体积百分比显著升高,而神经功能缺陷评分明显降低(P<0.05)。结论:活化TDAG8可能通过Akt信号通路调控短暂性大鼠MCAO诱导的脑缺血再灌注损伤。