过表达死亡蛋白相关激酶2对TGF-β_(1)诱导的人肺成纤维细胞自噬和胶原蛋白分泌的影响

目的结合生物信息学分析结果研究死亡蛋白相关激酶2(DAPK2)在肺纤维化中的作用及分子机制。方法从GEO数据库下载特发性肺纤维化(IPF)数据集GSE150910进行自噬相关基因的差异表达分析, 利用极端梯度提升法筛选出关键基因。用t分布随机邻域嵌入法在单细胞测序数据集GSE135893中验证关键基因在细胞中的表达, 采用Kaplan-Meier法在GSE28221和GSE93606数据集中绘制DAPK2高、低表达组患者的生存曲线。将12只6~8周龄的C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组, 每组6只, 实验组小鼠气管内滴注博来霉素构建肺纤维化模型, 取小鼠肺组织进行Masson染色、免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DAPK2的蛋白和mRNA表达水平。将人肺成纤维细胞分为空载体慢病毒组、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))组、空载体慢病毒+TGF-β_(1)组、过表达DAPK2慢病毒+TGF-β_(1)组, 应用蛋白质印迹法检测各组自噬相关蛋白以及Ⅰ型胶原蛋白(Collage Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collage Ⅲ)的表达, 并应用MDC染色检测各组细胞的自噬小体所占比例。结果 GSE150910数据集中筛选出32个差异表达的衰老相关基因, 其中8个上调, 24个下调。极端梯度提升法筛选出关键自噬相关基因DAPK2。单细胞测序分析提示DAPK2主要表达于肺成纤维细胞中, 且在IPF患者肺组织内成纤维细胞的表达量低于正常肺组织(P<0.05);高表达DAPK2的IPF患者总体生存时间较低表达DAPK2的IPF患者更长(P<0.05)。Masson染色提示小鼠肺纤维化模型造模成功, RT-qPCR及免疫组织化学染色结果提示DAPK2在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织中为低表达(P值均<0.05)。与TGF-β_(1)组和空载体慢病毒+TGF-β_(1)组比较, 过表达DAPK2慢病毒+TGF-β_(1)组细胞中的LC3Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平升高, 而哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、Collage Ⅰ、Collage Ⅲ降低(P值均<0.05);自噬相关蛋白及Collage Ⅰ、Collage Ⅲ在TGF-β_(1)组和空载体慢病毒+TGF-β_(1)组间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。MDC染色结果提示过表达DAPK慢病毒+TGF-β_(1)组细胞内绿色点状荧光亮度明显增强, 荧光斑点的数目也增多。结论 DAPK2在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织内呈低表达, 过表达DAPK2可以促进细胞自噬减轻TGF-β_(1)诱导的肺成纤维细胞分泌胶原蛋白, 从而抑制肺纤维化的进展。

DAPK2抑癌基因与机体免疫和肿瘤发生的相关性综述

DAPK2基因与肿瘤发生相关性研究是肿瘤治疗研究热点,从基因层面对肿瘤进行控制对于攻克肿瘤难题具有重要的意义。目前国内外对于DAPK2和肿瘤相关性的研究还处在以实验验证为主的阶段,深入精确的理论模型还没有完全建立。该文从DAPK2结构与功能入手,展开讨论DAPK2基因表达与肿瘤发生的相关性以及DAPK2基因表达与胶质瘤细胞增殖、侵袭的相关性。通过采用多种实验手段(Transwell实验、RNA干扰实验、划痕愈合实验、克隆形成实验、MTT实验、流式细胞术等),证明DAPK2基因与机体免疫和肿瘤发生存在关联。

烷基酚类死亡相关凋亡诱导蛋白激酶2(DRAK2)小分子抑制剂的设计与合成研究

死亡相关凋亡诱导蛋白激酶2(DRAK2)为苏氨酸/丝氨酸激酶,是死亡相关蛋白激酶(DAPK)家族中的一员,在外界刺激的作用下,其过表达具有诱导细胞凋亡的能力.已知高糖、高脂和某些细胞炎性因子均可诱导DRAK2的高表达而引起胰岛β细胞凋亡,提示DRAK2可能在其中扮演着重要的介导作用,因此靶向DRAK2的小分子抑制剂可能为糖尿病治疗提供了一种很有前景的方案.本工作通过对烷基酚类化合物8a进行结构改造,得到了约30个活性化合物,并初步确定了此类新型DRAK2抑制剂的构效关系.

ER、DAPK2在妊娠期高血压疾病胎盘组织中的表达

目的研究妊娠期高血压疾病(HDCP)产妇胎盘组织中的雌激素受体(estrogen receptor,ER)、死亡相关蛋白激酶2(DAPK2)表达特点。通过雌激素受体、DAPK2在妊娠期高血压疾病胎盘组织中表达特点及相关性,探讨ER、DAPK2在其发病机制中可能的作用。方法采用免疫组化法检测,对比正常足月产妇和患有妊娠期高血压的产妇胎盘细胞组织中ER、DAPK2表达差异。结果ER、DAPK2在正常产妇和HDCP患者的胎盘组织中均表达,在子痫前期、重度子痫前期的患者胎盘组织中ER表达明显降低(P<0.05)。ER、DAPK2在子痫前期重度的胎盘组织中的表达低于子痫前期(P<0.05)。ER、DAPK2在子痫前期、子痫前期重度的胎盘组织中的表达程度正相关(R=0.56,P<0.05)。DAPK2的低表达与新生儿出生低体重、胎盘重量减轻相关(P<0.05)。结论HDCP的胎盘组织中ER、DAPK2低表达,且ER、DAPK2表达正相关,可能为妊娠期高血压疾病的发病机制研究的新靶点。DAPK2低表达与重度子痫前期发生、新生儿低体重、胎盘低重量及围产期不良结局相关。