残余牛血清蛋白ELISA检测方法的建立及其初步应用

建立检测疫苗中残余牛血清蛋白(CSP)含量的ELISA检测法。将混合的小牛血清分别免疫鸡和家兔,然后分别提取、纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)和兔抗小牛血清抗体IgG。IgY用作包被抗体,IgG用作酶标抗体,四甲基联苯胺(TMB)显色检测残余CSP含量。结果:包被用IgY的最适浓度为25—30μg/mL,用含0.4%明胶的0.01mol/LPBS(pH7.4)溶液作为包被缓冲液,HRPIgG的最适稀释度为1:20001:3000。该方法的检测灵敏度为2.5ng/mL,变异系数为6.3%—9.4%,回收率为90.4%—112.8%,与猪、猴、豚鼠血清皆无交叉反应。10批不含Al(OH)3的疫苗ELISA法与RPHA法(反相间接血凝法)检测结果无显著性差异(P>0.05);而10批含Al(OH)3的疫苗,两种方法检测结果相差很大(P<0.05)。建立的ELISA检测法不受Al(OH)3的影响,简便、特异和灵敏,更适用于检测生物制品中的残余CSP。

残余牛血清蛋白含量检测试剂盒的制备和应用

所制备的残余牛血清蛋白含量检测试剂盒，经试验表明具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。可检出疫苗中ng／ml含量的牛血清蛋白。该试剂盒使用简便、快速，现已广泛应用于有关生物制品中牛血清蛋白残余量的检测。

残余牛血清白蛋白含量检测试剂盒抗干扰性研究

为了对目前使用的残余牛血清蛋白（BSA）含量检测试剂盒的抗干扰性进行评价,选用19个企业的12个品种,共计28份样品进行检测,包括冻干疫苗和液体疫苗两种剂型。分别检测15ng/ml BSA对照样品、二倍稀释的疫苗样品和添加15ng/ml BSA的疫苗样品。将添加BSA的疫苗样品的检测结果减去未添加BSA的疫苗样品的结果,其数值应当位于BSA对照样品均值的95%可信区间内。多数品种的疫苗添加BSA后回收率在85%和115%之间。个别制品的回收率在82%~83%之间。实验研究结果证明目前使用的BSA检测试剂盒具有较好的抗干扰作用。