去白细胞悬浮红细胞中残留白细胞定量检测新方法的建立

目的建立一种定量检测去白细胞悬浮红细胞中残留白细胞的新方法。方法使用ADAM-r白细胞计数系统对100份去白细胞悬浮红细胞中白细胞残留量进行检测,同时用流式细胞仪对上述100份标本进行平行检测;并选用3个浓度白细胞残留量的去白细胞悬浮红细胞对ADAM-r白细胞计数系统白细胞残留量检测进行重复性试验。结果 ADAM-r白细胞计数系统和流式细胞仪2种方法检测去白细胞悬浮红细胞中残留白细胞数的相关系数r=0.921,P<0.001,2种方法检测结果具有统计学关联;重复性试验中3个浓度白细胞残留量的去白细胞悬浮红细胞白细胞残留量检测CV值分别为19.1、4.1、3.8。结论可以使用ADAM-r白细胞计数系统定量检测去白细胞悬浮红细胞中的残留白细胞。

流式细胞术在成分血残留白细胞检测中的应用

目的 探讨流式细胞术 ( FCM)绝对计数法在成分血残留白细胞检测中的应用价值。方法 采用 FCM绝对计数法检测不同稀释度的浓缩血小板样本中白细胞残留量 ,并与 Nageotte血细胞计数板法比较。结果 两种方法计数微量白细胞具有高度相关性 ( r=0 .9964,P<0 .0 0 1 )。低浓度白细胞计数时 ,FCM法变异系数小于 Nageotte计数板法。两种方法检测结果相比 ,Nageotte计数板法计数值偏低。结论 流式细胞术绝对计数法具有快速、客观、精确和重复性好等优点 ,是一种稳定的检测成分血中微量残存白细胞数的方法。

定量检测残留白细胞方法的建立及在辐照血小板中的应用

目的建立定量检测单采血小板中残留白细胞的流式细胞术方法,探讨经血液辐照仪辐照前后血小板中白细胞的含量变化。方法应用绝对计数管内的定量微球(Beads)调整流式细胞仪参数,确定流式细胞仪检测条件。血小板样品经过RNA酶、固定剂、渗透剂作用后,再经碘化丙啶标记,通过流式细胞仪计数经标记的白细胞,建立检测残留白细胞含量的方法。采用血细胞分离机采集单采血小板16人份,通过血液辐照仪25Gy照射310s,应用建立的流式细胞术方法跟踪检测单采血小板辐照前及辐照后0、1、3、5d的白细胞含量,比较白细胞含量的变化。结果单采血小板中残留白细胞含量范围为1.85×106～1.3×108/袋。单采血小板中残留白细胞计数于辐照前与辐照后0d相比没有变化,与辐照后1d相比残留白细胞数量的减少有显著性(P<0.05);辐照后1d白细胞计数与辐照后3d和5d相比没有改变。结论流式细胞术方法具有较好的准确性、客观性和重复性,可以成为评估血小板质量的监控手段。辐照不立即改变血小板中残留白细胞的计数,辐照后1d残留白细胞的数量减少。

荧光显微镜自动化检测血液残留白细胞方法的建立和应用

目的建立荧光显微镜自动化检测血液残留白细胞的方法。方法用不同浓度的残留白细胞[(1—150)个/μL]对LEICA-DM6000B荧光显微镜做放大倍数、荧光试剂配方、样品与试剂比例等参数优化及精密度试验,以ADAM白细胞计数仪做参比配对验证准确度试验。结果 LEICA-DM6000B荧光显微镜放大倍数选100倍形成88个图谱保存电脑;荧光试剂配方:碘化丙啶(PI)含量4 mg%(W/V),吐温含量0.60%(V/V);红细胞样品与荧光试剂比例为1∶14,曝光时间选择591 ms;血小板样品与荧光试剂比例为1∶4,曝光时间选择329 ms;红细胞样品与荧光试剂混合后取样量100μL;加入Nageotte计数板上静置时间选择20 min;Z轴调节上下范围(97±40)μm;避光保存2年的试剂检测残留白细胞值无明显变化(P>0.05);红细胞和血小板样品均为残留白细胞精密度<15%;LEICA-DM6000B荧光显微镜与ADAM计数仪配对检测残留白细胞相关性:红细胞样品为y=0.978 9x+0.381 6,r=0.9951(P>0.05),血小板样品为Y=0.985 3X+0.494 2,r=0.996 9(P>0.05)。结论采用荧光显微镜自动检测白细胞计数,准确、省工省时、检测费用低,克服了人为差错,并实现数据图像存档,有助于减少临床输血不良反应,保证临床输血的有效性及安全性。

血小板残留白细胞不同计数方法的比较

目的比较分析用于测定机采血小板中微量白细胞的流式细胞仪测定法(FC)和Nageotte测定法(NC)。方法用已知白细胞数目的血小板标本测定两种方法的最低检测值。结果FC和NC的最低检测值分别为0.1和1WBC/μl。>1WBC/μl时,FC和NC检测变化较小,而在0.1-1WBC/μl只有FC检测变化较小。结论FC检测是一种更有效、准确、稳定的方法,但还需要进一步改进。

探讨Nageotte法测定机采血小板残留白细胞的准确性

目的准确测定机采血小板中残留白细胞量,提高机采血小板的质量。方法将同一机采血小板样本一分为三,第1份5倍稀释、第2份10倍稀释,第3份20倍稀释,每一稀释度同时稀释2份,用Nageotte计数板,计数1满格WBC数,每个稀释度WBC数取均值,将3个稀释度的WBC均值作线性分析,并作不同浓度的两两比较。结果 3个稀释度的WBC均值成线性,20份样品的相关系数r值均在0.98以上。组间两两比较,差异无统计学意义。结论 Nagoatte法可以准确地测定机采血小板中残留的微量白细胞。

血液去白细胞后白细胞残留量的检测

目的分析血液去白细胞后白细胞残留含量，为临床患者提供去除白细胞的血液。方法将2004年12月-2005年10月质控抽检的去细胞白前后50袋红细胞悬液的白细胞残留量作对比分析。结果去白细胞前红细胞悬液中白细胞残留量是去白细胞后悬液中白细胞残留量的1300多倍。结论血液成分中的白细胞是一潜在的致病因子，临床输注去除白细胞的血液将最大限度地减少患者人类白细胞抗原（HLA）、同种免疫、巨细胞病毒感染和非溶血性输血发热反应的发生。

白细胞滤除对机采血小板质量的影响研究

本研究旨在评价白细胞滤除对机采血小板整体质量的影响。随机选取20单位单供者机采血小板在(22±2)℃条件下振荡保存24-96小时后使用血小板型白细胞过滤器进行过滤,分别检测机采血小板过滤前后的血小板浓度、平均血小板体积(MPV)、血小板单位容量、白细胞量、pH值、乳酸脱氢酶(LDH)浓度、K+浓度、血小板膜表面CD62p表达率、血小板凝血指数MA值,并计算白细胞去除率和血小板损失率。结果表明:机采血小板经白细胞过滤器过滤后,残留白细胞计数明显低于滤前白细胞计数(p<0.001),白细胞去除率达到了99.97%;血小板损失率为(8.1±4.2)%,明显低于20%的国家标准规定(p<0.001);与过滤前相比,过滤后MVP、机采血小板保存介质中的LDH浓度、K+浓度和pH值无明显变化(p>0.05),过滤后的血小板膜表面CD62p表达率出现轻度下降(p>0.05),但滤盘灌注液内血小板膜表面CD62p表达率却明显高于滤前(p<0.05);过滤后血小板MA值出现轻度下降,但无明显统计学差异(p>0.05)。结论:使用白细胞过滤器可以有效去除机采血小板中混杂的白细胞及部分活化血小板,使血小板损失率控制在较低水平,且对于血小板凝血活性没有产生明显影响。过滤后的机采血小板达到预防巨细胞病毒感染及HLA同种免疫的质量要求。

对新鲜冰冻血浆输注前滤除白细胞必要性的评估

目的评估新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)输注前常规过滤白细胞的必要性,为合理使用FFP提供实验依据。方法通过调整血浆分离时间和剩余血浆量,试验9种血浆制备条件,观察不同的制备条件对白细胞残留量的影响;调查4个采供血机构FFP白细胞残留量;使用5种国产血浆滤器对FFP进行过滤,观察白细胞去除效果和对血浆质量的影响。结果延长血浆分离时间和增加血浆残留量可有效地降低血浆白细胞残留量,达到<1×106/U的水平;4个采供血机构FFP白细胞残留量大多<1×106/U;国产血浆滤器对血浆质量无显著影响,但去白细胞效率低于国外同类产品水平、血浆损失率较高。结论在规范血浆制备规程的前提下,FFP输注前不必进行常规白细胞过滤,血浆置换等特殊情况可考虑白细胞过滤。

白细胞残留量检测方法的改进

目的对白细胞残留量检测方法进行改进,令结果更准确,操作更快速。方法利用血细胞计数仪使用的溶血素替代结晶紫染色液,然后利用大容量Nageotte血细胞计数盘在显微镜下计数。结果无需提前配置试剂,试验操作时间短,溶血素对白细胞影响小,对红细胞和血小板溶解充分,无背景的干扰,令检测结果更准确。结论利用血细胞计数仪使用的溶血素替代结晶紫染色液,能够提高白细胞残留量的检测准确度和检测速度。

两种血细胞分离机单采浓缩血小板时白细胞残留的比较

目的：探讨不同血细胞分离机单采浓缩血小板时白细胞的污染情况。方法：血小板采集按美国HAEMONETICS MCS-3P血细胞分离机和美国BAXTER CS-3000PLUS离心设备及其配套耗材，单采血小板程序常规操作，细胞计数采用日本F-820全自动血细胞计数仪。结果：血小板采集后，白细胞残留分别为(11．6±0．42)×10^6/L和(4．5±0．25)×10^6/L。结论：两种分离机采集血小板白细胞残留均符合血液质量标准。

即采即滤型白细胞滤器对血液质量的影响分析

自20世纪70年代有科研人员发现输注去白细胞血液能减少输血的副作用,国内外开始关注输注少白细胞血液和血液成分。白细胞过滤器以其去除率高、操作简便、价格合理且无毒副作用而成为目前最有效的去除白细胞的方法。该法己广泛应用于临床输血,在预防输血不良反应的产生及输血相关病毒的传染方面取得了较为满意的效果。

用于浓缩血小板的去白细胞滤器质量评价

目的考察用于浓缩血小板(PCs)的去白细胞滤器的化学性能及过滤前后血小板质量的变化情况。方法按照中华人民共和国医药行业标准《一次性使用去白细胞滤器》(YY0329-2009)制备检验液,测定还原物质、金属离子、酸碱度、蒸发残渣、紫外吸光度和溶血率,并对ABO血型相匹配的PCs进行手工汇集和过滤,测定过滤前后的血小板数量、pH、白细胞数量、血小板平均体积(MPV)和血小板低渗休克相对变化率。结果滤器的化学性能指标和溶血率均符合我国行业标准要求,血小板回收率为(89.99±5.37)%,剩余白细胞数为(0.93±0.58)×106个,血小板低渗休克相对变化率为(2.75±4.93)%。过滤前后pH值和MPV无明显变化。结论该种用于PCs的去白细胞滤器具有血小板回收率高、白细胞残留少的特点,对血小板功能无显著影响,能安全有效地去除PCs中的白细胞。

储存时间对占线法滤除白细胞效果的影响

目的根据采供血机构实际工作需要,选择滤除白细胞的可靠时间点,确保滤白血制品在保存期内安全、有效地用于临床。方法通过对(4±2)℃、6h内保存和(4±2)℃、24h内保存的全血各30份,进行占线法过滤后,测定白细胞滤除率、红细胞回收率,以及保存末期的游离血红蛋白含量。结果经占线法过滤后,6 h内过滤的白细胞清除率达99.95%,红细胞回收率达92.98%;24 h内过滤的白细胞清除率达99.98%,红细胞回收率达90.69%;两者过滤后白细胞残留量的差异具有统计学意义(t=9.52,P<0.01),红细胞回收率的差异无统计学意义(t=1.53,P>0.05);滤白后保存末期红细胞溶血率为0.10%,与对照组比较差异无统计学意义(t=1.89,P>0.05)。结论全血在滤除白细胞时的冷藏时间明显影响白细胞的滤除效果,但对红细胞回收无明显影响。

3种白细胞滤器对机采血小板白细胞去除效果的对比研究

目的评价3种去白细胞滤器对机采血小板的滤白效果及过滤前后机采血小板质量的变化。方法随机选取60U机采血小板在(22±2)℃条件下振荡保存24～96h。分别用3种不同滤器对血小板进行过滤,检测机采血小板过滤前后的血小板计数(PLT)、血小板单位容量、白细胞量、pH值、乳酸脱氢酶(LDH)浓度、K+浓度、血小板膜表面CD62p表达率,计算白细胞残留量和血小板回收率。结果与过滤前相比,各组过滤后机采血小板pH值、LDH浓度、K+浓度和CD62p表达率均无显著差异(P>0.05);白细胞残留量达到了医药行业标准;过滤后3组间血小板膜表面CD62p表达率(均数差为2.8%、5.4%、2.6%)和血小板回收率[(92.6±6.3)%、(82.6±4.4)%、(87.4±2.7)%]有显著差异(P<0.01)。结论 3种白细胞滤器均可有效去除机采血小板中的白细胞,过滤后的机采血小板符合血液质量要求。A组滤器过滤后能保持较高的血小板回收率并有效避免血小板激活。

一次性使用白细胞过滤器质量控制必要性探讨

目的探讨对一次性使用白细胞过滤器的质量控制,是确保去白细胞血液产品质量的重要措施。方法对国内5个厂家及同一厂家不同批次的一次性使用白细胞过滤器均采用相同的质量指标进行评估。评估指标有:过滤效果(白细胞残留量、红细胞回收率)、细菌内毒素、无菌试验、一般检查(外观、密闭性、标签、其他)。结果5个厂家的一次性使用白细胞过滤器的质量存在差异,并有2个厂家的产品质量检查结果不符合要求;对同一厂家的一次性使用白细胞过滤器质量检查45批次,其质量也存在差异,且均体现在过滤效果上。结论建立对一次性使用白细胞过滤器进行质量控制,是十分有必要的,使用单位应对供方实施质量评价合格准入制及每批用前经质量检查合格后放行制。

透析式洗涤冰冻红细胞去除白细胞和血小板的方法

目的:用低速离心的方法减少悬浮红细胞中白细胞和血小板的数量,使透析式洗涤机洗涤的冰冻红细胞中白细胞和血小板的残留量小于1%。方法:分别选用低速离心(700和500r/min)和常规离心(3800r/min)全血制备悬浮红细胞,计算白细胞和血小板的清除率;甘油低温冰冻保存,透析式冰冻红细胞洗涤机洗涤冰冻红细胞,对洗涤后的红细胞进行质量检测。结果:500r/min离心后白细胞和血小板的清除率(%)分别为53.82±6.83和85.23±4.21;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量(%)分别为0.843±0.058和0.903±0.035。700r/min离心后白细胞和血小板的清除率(%)分别为23.38±2.36和62.61±3.82;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量(%)分别为0.983±0.024和1.021±0.045。3800r/min离心后白细胞和血小板的清除率(%)分别为9.82±4.12和6.39±3.26;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量(%)分别为3.839±2.896和3.528±2.689。结论:用500r/min离心全血制备的悬浮红细胞,经甘油低温冻存,透析式洗涤机洗涤后,血小板和白细胞的残留量等各项指标均符合国家标准。

贮存温度和时间对悬浮红细胞白细胞滤除效果的影响

目的探讨不同的血液贮存温度和贮存时间对去白细胞悬浮红细胞白细胞清除效果的影响，选择并建立合适的去除白细胞的操作方法，进一步提高血液中白细胞的清除效果。方法抽取本站采集的无偿献血者全血220{9，在不同的贮存温度（2℃～6℃、18℃～25℃）、贮存时间（2、4、6、12、24、36、48、60、72h）和即采即滤条件下随机分组，制备去白细胞悬浮红细胞，分别留取相应的标本检测血液过滤前后的白细胞含量，对检测结果进行对比、分析。结果①2℃～6℃组白细胞残留量符合国家标准且明显低于18℃～25℃组和即采即滤组，差异有统计学意义（P〈0．0i）。②2h组白细胞残留量明显高于4h组，检测结果均符合国家标准，两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）；4~72h组白细胞残留量呈逐步增高趋势，4～24h各组白细胞残留量均明显低于国家标准，与4h组相比差异无统计学意义（P〉O．05）；36h组、48h组白细胞残留量符合国家标准，与4h组相比差异有统计学意义（36h组：P〈0．05；48h组：P〈0．01）；60h组、72h组白细胞残留量超过国家标准，与4h组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论全血采集完成应置于4℃4-2℃环境条件下贮存4h后，最好在24h内但不超过48h，尽快制备去白细胞悬浮红细胞，可有效提高白细胞清除效果。