A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立

目的:建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法:利用α-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的α-N-乙酰半乳糖胺酶。结果:建立了检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1 ng/mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论:本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。

制备脆弱拟杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶单抗用于检测通用型红细胞中的微量残留酶

目的建立一种检测微量脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶(纯度大于90%)免疫BALB/c小鼠,制备单抗;用稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株制备腹水单抗,再经HiT rap rP rotein A柱纯化获得高纯度的抗体;间接ELISA法测定单抗效价,Western印迹法评价单抗特异性。联合纯化后的单抗和兔多抗采用间接ELISA法检测酶解法制备的通用型红细胞和洗涤液中的残留酶量。结果获得了高效价高纯度的单抗,Western印迹实验显示该抗体可特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合;间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml,红细胞按1∶4的体积比经4次洗涤后,其残留酶量<10 ng/ml。结论所建立的在血型转变过程中检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法,可用于酶解法制备的通用型红细胞的安全性评价。

浓缩红枣汁中酶活残留对果汁乳饮料稳定体系影响的研究

该文研究了浓缩红枣汁中酶活残留对果汁乳饮料稳定体系的影响,研究表明添加含有果胶酶或纤维素酶的浓缩红枣汁会引起果胶或羧甲基纤维素钠(CMC)为稳定体系的产品粘度降低。采用粒度、粘度、离心沉淀率、lumisizer扫描来研究添加含有酶活残留的浓缩红枣汁对产品稳定性的影响。研究表明在生产果汁乳饮料时,如果添加含有酶活的果汁,产品稳定性会明显下降,表现在成品粒度增大、粘度下降、离心沉淀率和不稳定性指数成明显上升趋势。与此同时,建立以CMC溶液的粘度比值V1≥80%作为判定浓缩红枣汁中无纤维素酶酶活残留的判定方法,建立以果胶溶液的粘度比值V1′≥85%作为判定浓缩红枣汁中无果胶酶酶活残留的判定方法。其中V1为2%CMC溶液中添加果汁与不添加果汁的粘度比值;V1′为2%果胶溶液中添加果汁与不添加果汁的粘度比值。

海藻糖对果胶酶在干燥过程中的保护作用

果胶酶溶液在干燥再水化后,其酶活力会大部分损失(残留率在5％以下)。加入保护剂能明显提高其酶活力,譬如蔗糖、山梨醇等作保护剂时酶活力的残留率在30％左右,而有足够量的海藻糖存在时,其酶活力的残留率竟高达65％以上。海藻糖对低水份下的干燥酶制品有极强的保护作用,在无水状态下90℃烘箱加热处理2HR酶活残留率还达60％以上。

大亚湾地区水产品中四种药物残留调查结果分析

为了解大亚湾地区水产品中违禁渔药残留情况,以7种较常见水产品作为研究对象,采用酶联免疫分析法检测试剂盒对其进行药物残留检测。结果显示,7个品类的4种药物残留分析中,只有网箱养殖的虎龙斑和黑鲷存在氯霉素残留(高于检测限浓度0.025μg·L^-1),呋喃唑酮、孔雀石绿和磺胺类(检测限浓度分别为0.04μg·L^-1、0.375μg·L^-1、2μg·L^-1)在所有样品中均未检出。

考马斯亮蓝法检测γ-环糊精中酶残留

目的:建立考马斯亮蓝法测定γ-环糊精中酶及其他蛋白的残留量。方法:采用截留分子量为10000 Da的富集管对γ-环糊精中残留酶进行富集,残留酶与考马斯亮蓝G-250结合,在595 nm波长下产生特征吸收。结果:考马斯亮蓝法具有较好的专属性,蛋白质浓度与吸光度值呈良好的线性关系(Y=5.2556X-0.0392,R^(2)=0.9921);平均加样回收率(n=9)为93.46%;检出限为0.01 mg·mL^(-1),定量限为0.02 mg·mL^(-1)(折合样品即:检出限为1μg·g^(-1),定量限为2μg·g^(-1));精密度为2%。结论:该方法准确、可靠、重复性好,可用于γ-环糊精中酶及其他蛋白残留量的测定。

酶解法清除猪皮α-Gal抗原的研究

目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS清洗后进行酶解条件的摸索;采用免疫荧光法检测猪皮的α-Gal抗原,双抗夹心ELISA法检测残留酶,通过对酶解猪皮的残留酶和α-Gal抗原的检测进而优化、改进酶解条件和洗涤条件,以确立最佳酶解工艺。结果建立了有效的酶解方法和洗涤方法,酶解后猪皮的α-Gal抗原清除率>90%,残留酶不能检出(间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml)。结论所建立的酶解工艺和洗涤工艺可有效清除猪皮细胞及基质的α-Gal抗原,建立了制备低免疫原性猪皮敷料的方法。