体外分步诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞

目的建立体外诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系。方法分离纯化人母体来源胎盘间充质细胞,体外扩增后进行分步诱导分化,收获的胰岛素分泌细胞分别行免疫细胞化学和ELISA检测,并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价其体外功能。结果分离纯化的人母体来源胎盘间充质细胞经培养及六步诱导分化后最终可形成胰岛素分泌细胞。免疫细胞化学检测诱导后细胞GLP-1、PDX-1和C-Peptide染色为阳性,ELISA结果显示该诱导细胞培养上清中胰岛素有较高的表达。诱导后的胰岛素分泌细胞在低糖和高糖刺激下的胰岛素释放量分别为(20.42±1.58)μIU/mL和(65.1±7.43)μI-U/mL(P<0.01)。结论通过建立体外人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系,获得具有一定胰岛素分泌能力的细胞,为胰岛移植的细胞来源提供了更有效的新途径。

母体来源人胎盘间充质细胞的分离培养及其分化能力的研究

目的探讨胎盘母体来源间充质细胞的分离、培养方法及其向脂肪和成骨诱导分化潜能。方法采用酶消化获得母体来源胎盘间充质干细胞;体外扩增后,利用流式细胞仪检测其表面标志物;进行诱导分化后,采用油红O及茜素红染色鉴定其向脂肪和成骨诱导分化潜能。结果体外培养的母体来源胎盘间充质干细胞呈长梭形,细胞形态均一;细胞表面标志鉴定:CD73、CD90和CD105呈阳性表达,而CD14、CD34、CD45和HLA-DR呈阴性表达;细胞诱导分化后,经油红O、茜素红染色证实其可分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论建立了母体来源胎盘间充质干细胞的分离培养方法;证实其具有成脂、成骨分化潜能,有望成为细胞治疗及组织工程更为理想的种子细胞。

胎儿DNA短片段富集分析法辨别无创产前检测中母体来源的假阳性病例分析

目的:比较胎儿DNA短片段富集分析法在无创产前检测(NIPT)中辨别母体来源的假阳性病例的临床应用价值。方法:选取13例母体染色体异常引起的NIPT假阳性标本和8例胎盘染色体异常引起的NIPT假阳性标本。用半导体基因测序技术测序后,分别用胎儿DNA全片段分析法(M方法)和DNA短片段富集分析法(L方法)分析测序数据,分别获得染色体Z值和相应的染色体位置-剂量分布曲线。结果:在母体来源的假阳性样本中,L方法与M方法比较阳性信号缩小,表现为Z值绝对值变小,在染色体位置-剂量分布曲线上更接近基线0。而胎盘来源样本阳性信号则相反。结论:在NIPT中,DNA短片段富集分析法能辨别母体来源的假阳性信号,且不增加额外实验成本,具有临床应用价值。

人胎盘来源的两种间充质干细胞IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的比较研究

目的比较人胎盘母体和胎儿来源间充质干细胞(hmPMSCs/hfPMSCs)IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的差异。方法采用酶消化法分离人胎盘母体和胎儿侧间充质干细胞(MSCs),并利用流式细胞仪和D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;通过q-PCR和ELISA分别测定hmPMSCs和hfPMSCs细胞培养上清液中IL6、IL8、IL10和HGF在基因及蛋白水平上的表达。结果所分离两种来源细胞表达MSCs表面标志分子CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,母体来源细胞中上述四个STR位点的等位基因与母体亲本保持一致性,而胎儿侧来源细胞分别具有来自亲本双方的等位基因。hfPMSCs IL8、IL10和HGF mRNA的表达水平显著高于hmPMSC(sP<0.01),而IL6的表达水平差异无显著性。ELISA结果表明,hfPMSCs IL6、IL8和HGF蛋白表达水平显著高于hmPMSCs(P<0.01),IL10的分泌量两者无差异。结论 hmPMSCs和hfPMSCs中IL6、IL8和HGF三种细胞因子的分泌量差异存在显著性,其中hfPMSCs HGF的分泌量远高于hmPMSCs,提示hfPMSCs在免疫抑制和组织修复中可能更具临床应用潜力。