人原发性肝癌胰岛素样生长因子2和H19基因印迹研究

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insu lin-like grow th factorⅡ,IGF 2)和H 19基因的印迹状态,为进一步研究印迹调控机制打下基础。方法采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)筛选IGF 2和H 19基因杂合标本,并用逆转录PCR-RFLP检测杂合标本IGF 2和H 19基因的印迹状态。结果正常人肝组织中,IGF 2呈双等位基因表达,H 19呈单等位基因表达;47.1%(8/17)的肝癌标本中检测到IGF 2基因的印迹获得,45.5%(5/10)的肝癌标本中检测到H 19基因的印迹丢失;IGF 2和H 19的印迹改变没有相关性。结论IGF 2和H 19的印迹异常与肝癌有关,成人肝组织中IGF 2与H 19的印迹调控可能相对独立。

阿司匹林和肿瘤坏死因子α对脂肪细胞脂肪源性细胞因子表达的影响

目的观察阿司匹林和肿瘤坏死因子α(TNF α)对脂肪细胞脂肪源性细胞因子表达的影响。方法5 mmol/L阿司匹林和/或5 ng/ml TNF α处理3T3 L1脂肪细胞48 h后抽提总RNA,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和Northern印迹检测脂肪细胞脂源性细胞因子的表达。结果TNF α抑制了抵抗素、脂联素基因的表达,促进了白细胞介素6(IL 6)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI 1)基因的表达;阿司匹林对上述基因的表达并无影响,但部分拮抗了TNF α对抵抗素、脂联素基因的抑制。结论TNF α抑制了抵抗素、脂联素基因的表达,促进了IL 6、PAI 1 基因的表达,可能引起机体的胰岛素抵抗(IR)和相关的心血管并发症;阿司匹林部分拮抗了TNF α对抵抗素、脂联素基因的抑制可能与其改善IR及相关心血管并发症有关。

长链非编码RNA与鼻咽癌发生发展的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),即长度大于200nt的RNA分子,被发现在转录及转录后水平参与调控基因表达,参与遗传修饰的调控,部分lncRNA在鼻咽癌的发生发展中起到一定调控作用,并可能成为鼻咽癌预后的标志物。本文就肿瘤相关lncRNA在鼻咽癌中的作用进行简单综述。

饰胶蛋白聚糖基因转染对大鼠肾系膜细胞转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体表达的影响

目的探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)拮抗肾小球硬化进展的作用是否与其抑制系膜细胞(MsC)转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体(TGF—βRⅠ、TGF—βRⅡ)表达有关。方法经外源性TGF—β1刺激培养的大鼠肾MsC,采用RT—PCR、Western印迹法检测其TGF—βRⅠ、TGF—βRⅡ的表达。用脂质体介导法将DCN基因转染MsC,经筛选和鉴定,用RT—PCR、Western印迹法和免疫荧光法分别观察DCN基因转染对TGF—βRⅠ、TGF—βRⅡ表达的影响。结果经外源性TGF—β1刺激的正常MsC,其TGF—βRⅠ、TGF—βRⅡ基因转录及蛋白表达均明显升高,且呈时间依赖性,于作用24h达高峰。与转染空载体的MsC(1P-1)相比,转染DCN基因的MsC克隆(3D-5,7D-1)的TGF-βRⅠmRNA表达分别为对照组的20%和32%,TCF-βRⅡmRNA表达分别为对照组的64%和59%;TGF—βRⅠ蛋白表达分别为对照组的34%和25%,TGF—βRⅡ蛋白表达分别为对照组的49%和57%。同时转染DCN基因也能阻止MsC对外源性TGF-β1刺激所致的两种受体表达升高作用。结论过表达DCN基因的MsC,其TGF-βRⅠ、TGF—βRⅡmRNA和蛋白表达水平均明显降低,这可能是DCN拮抗由TGF-β介导的肾小球硬化发生的重要机制之一。

醛糖还原酶基因转染对体外培养大鼠肾脏系膜细胞增殖的影响

目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染对体外培养大鼠肾脏系膜细胞(MsC)增殖的影响,并对其机制进行初步探讨。方法脂质体转染法将AR基因转入大鼠MsC,蛋白印迹鉴定转染效率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期与凋亡,对比正常MsC和AR转染MsC的生长速度及AR抑制剂(ARI)Sorbinil和Zopolrestat对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)和小牛血清(NBS)促MsC增殖作用的影响。蛋白印迹检测PDGF-BB作用后AR和c-Jun表达的变化,EMSA检测转录因子AP-1的活性。结果(1)转染MsCAR表达较正常MsC明显增高;(2)AR转染MsC较正常MsC生长速度快(P<0.01);(3)ARI可部分抑制PDGF-BB对正常MsC、AR转染MsC以及NBS对AR转染MsC的促增殖作用(P<0.01,P<0.05),而对NBS促正常MsC的增殖无显著影响;(4)PDGF-BB刺激MsC后可上调AR和c-Jun蛋白的表达,ARI可减弱c-Jun的这种表达增高;(5)PDGF-BB可活化转录因子AP-1,而ARI可削弱此作用。结论AR可能参与了MsC在病理情况下的过度增殖过程,其作用机制与AP-1活化有一定关系。