CAV对BWEL-SPF鸡的致病性试验及毒价测定

本实验用鸡传染性贫血病病毒标准株 (CAV和Cux_1)和国内分离株 (CAVM990 5CAV和H990 6 )分别对BWEL_SPF雏鸡 1～ 7家系进行 1日龄和 1月龄攻毒的致病性试验。 1日龄雏鸡接种CAVCux_1毒株 ,12天后观察到感染鸡的喙、腿、冠和爪等部位颜色变浅 ,16天剖杀 ,观察剖检变化 ,并进行IFA和PCR检测 ,确定感染率和CAV毒价。结果CAVCux_1株对 1日龄BWEL_SPF雏鸡半数感染量 (CID50 )为 10 4 .3 / 0 .2ml。同时检测到CAVCux_1株对 1月龄BWEL_SPF雏鸡发病率为 6 0 %;CAVM990 5和CAVH990 6对 1日龄BWEL_SPF雏鸡发病率为 10 0 %,死亡率为 40 %、2 0 %。

鸽新城疫病毒毒价的血凝价、ELD_(50)和TCID_(50)值相关性比较

本文比较了用血凝反应（ＨＡ），在鸡胚成纤维细胞上的ＴＣＩＤ５０及用发育鸡胚做ＥＬＤ５０来测定鸽新城疫病毒（ＮＤＶ）毒价的相关性。结果表明，鸽ＮＤＶ毒价的ＴＣＩＤ５０和ＥＬＤ５０的值基本相同。ＨＡ滴度虽然与ＴＣＩＤ５０值有一定的相关性，但远不如ＴＣＩＤ５０准确。接种病毒后死亡鸡胚的新鲜尿囊液经冻融后，其中鸽ＮＤＶ的ＨＡ滴度和ＴＣＩＤ５０均逐渐下降。每经一次冻融，毒价几乎减少５０％。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测方法的建立

为了提高鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测效率,本试验尝试建立了一种不添加琼脂的蚀斑计数法。分析了影响蚀斑测定的因素,确定了细胞最佳接种密度为1.0×106个/m L,病毒液的稀释倍数为1×104和5×104,蚀斑计数时间为接毒后4 d。该方法操作简单,测定条件均一,可控性强,批间误差小,缩短了鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒毒价的测定周期。

不同温度下蓝舌病病毒的毒价变化研究

[目的]为蓝舌病病毒的长期保存奠定基础。[方法]在70、-20、4和20℃下保存蓝舌病病毒1个月后,测定其毒价变化,研究不同温度对蓝舌病病毒毒价的影响。[结果]在室温和4℃下保存1个月后蓝舌病病毒毒价保持不变。在-70℃下保存1个月后蓝舌病病毒毒价从原来的5.5降至4.2。在-20℃下保存1个月蓝舌病病毒毒价变化最大,从原来的5.5降至2.8。[结论]长期保存时,应将蓝舌病病毒在-20℃下保存。

对稳定和提高猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞复制毒毒价的探讨

我厂从一九八二年开始用犊牛睾丸细胞繁殖猪瘟兔化弱毒,经过七年来的研究,并进行了各种对比试验,证明用犊牛睾丸细胞复制猪瘟兔化弱毒是成功的,不但可以保证疫苗质量,确保安全,提高防预效果,且可降低成本。几年来,经过试验和扩大再生产,截至一九八八年底。

反向间接血凝与兔体热反应法测定猪瘟兔化毒毒价的比较试验

在兽医生物制品生产中,测定猪瘟兔化毒毒价的方法,至今仍用经典的兔热反应法(体内法),即以多少个兔感染量来表示一个样品中兔化毒的含量。这种方法是正确而又可靠的,但要耗费大量的人力和物力,而且在6—7天后才能得到结果。因此,很久以来。

冻存时间及冻融次数对PRRSV毒价的影响试验

本试验对PRRSV-ShB6(P60)株进行了不同冻存时间和冻融次数对其毒价影响的评估。将病毒在-20℃冻存时间为90天,每隔15天进行毒价测定,结果发现其毒价下降趋势不明显,但病毒连续反复冻融12次,每次取样进行了病毒含量分析,结果发现其毒价整体呈波动性下降,前后变化较明显。结果表明,该毒株在科学合理的条件下保存,避免反复冻融,病毒活力相对稳定。

细胞批次对BTV毒价的影响和程序降温仪在稳定毒价中的应用

病毒中和实验是进行蓝舌病病毒(Blue-tongue virus,BTV)血清型鉴定和血清抗体分析的重要方法,获得准确的病毒毒价对于病毒中和实验结果影响非常大,但在实际实验中,很多因素会影响毒价测定的准确性,其中细胞批次是比较难控制的影响因素。为了查明细胞批次对毒价的影响及其解决方法,本研究进行了6个批次的5个蓝舌病毒株、1个鹿出血热毒株毒价测定实验,作为对比,采用程序降温仪冻存同一批次细胞,直接复苏后对这6个病毒毒株进行6批次毒价测定。结果表明,细胞批次对毒价检测结果有极显著性影响(P<0.01);而应用程序降温仪冻存后,多批次毒价测定的结果没有显著变化(P>0.05)。本研究证明使用程序降温仪冻存细胞,是稳定蓝舌病测定毒价和提高中和实验准确度的一种有效的方法。

接种用不同除菌方法处理的种毒液对细胞生长及毒价影响的比较试验

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗的生产,多数是按《规程》要求,在细胞形成致密单层后接种猪瘟兔化弱毒脾毒。脾毒生产及制备毒液时,全为开放的人工操作,很难保证绝对无菌,种毒带菌往往成为细胞污染的主要来源。为了消除种毒带菌的可能。

鸡传染性法氏囊炎(B87株)活疫苗生产中胚液与胎儿的毒价对比试验

采用尿囊腔接种法将IBD B87株接种适宜日龄鸡胚,分别收获规定时间内死亡的胚液及胎儿(将胎儿捣碎),然后分别测定两者的毒价,结果发现胚液的毒价远远低于胎儿的毒价,至少低一个滴度,表明在生产中只收获胎儿而不收获胚液是完全可行的。

基于肝细胞毒价检测的何首乌炮制工艺比较研究

采用肝细胞毒价检测方法评价何首乌不同炮制品的毒性,优选炮制工艺。以同一批生何首乌为原料,分别采用高压清蒸、高压黑豆汁蒸、常压清蒸法炮制何首乌,以正常人肝细胞(L02)为模型,细胞毒价为指标,评价不同蒸制方法、蒸制时间的何首乌炮制品肝细胞毒性,并对部分炮制品进行UPLC-MS分析。结果显示,肝细胞毒价检测方法能有效评价何首乌不同炮制品的毒性,不同炮制方法均可减轻何首乌的毒性,高压清蒸3 h减毒效果较佳,不同炮制方法对何首乌化学成分的影响不同,3种方法炮制品与生品比较,没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素8-O-β葡萄糖苷、大黄素均有明显降低,其中二苯乙烯苷含量与其毒价变化趋势基本一致。由此可知,何首乌经炮制可减毒,炮制方法、时间对何首乌成分及肝毒性均有影响,且高压清蒸3 h减毒效果较佳,建议进一步加强何首乌炮制减毒控制标准研究。

基于肝细胞毒价检测的雷公藤质量评价方法研究

目的建立基于肝细胞毒价检测的雷公藤药材质量评价方法。方法以正常人肝细胞（L02细胞系）为研究载体,以细胞抑制率为检测指标,优化建立肝细胞毒价检测方法 ,评价不同产地雷公藤及其地方习用品昆明山海棠药材的质量。结果以对乙酰氨基酚（毒价定义为400 U/g）为阳性对照品,50%乙醇超声提取雷公藤后真空干燥为干膏,用培养基配制生药量3 mg/m L的供试液,稀释比1∶0.65,量反应平行线法检测,18份雷公藤样品肝细胞毒价17.78~4 131.4 U/g（相差超过200倍）,5份昆明山海棠样品肝细胞毒价209.42~7 422.2 U/g（相差超过30倍）,不同产地雷公藤及昆明山海棠药材的肝细胞毒价差异显著;并且所检测样品鲜品较市售干品毒性大。结论初步建立了基于肝细胞毒价检测的雷公藤质量评价方法 ,直接关联其临床肝脏毒副反应,对从质量控制角度提高雷公藤临床用药安全具有参考价值,也为雷公藤肝毒性成分筛选提供准确定量的方法 。

检测鸡球虫四价弱毒疫苗抗体应答的ELISA方法的建立及初步应用

本研究旨在建立检测鸡球虫四价弱毒疫苗(柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫)抗体应答的酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步阐明鸡免疫四价弱毒疫苗及攻虫后的抗体应答。将300羽岭南黄鸡分为A(免疫攻虫组)、B(不免疫不攻虫组)、C(不免疫攻虫组)共3个组。A组雏鸡在4日龄时进行首免,11日龄时鸡开始二免,二免完成后(17日龄时)对A组及C组的鸡进行攻虫(28万个4种球虫的混合卵囊/羽),7d后检查A、C两组鸡的存活率。在鸡二免和三免完成后,分别对A、B组进行采血,通过优化最佳抗原包被浓度、酶结合物工作浓度及最佳血清稀释度,建立了ELISA方法来检测鸡体对球虫四价弱毒疫苗的抗体应答情况。A组鸡血清抗体的平均D值为0.870和0.904,明显高于B组鸡的平均D值0.261和0.270,证明了鸡体免疫疫苗后可以刺激产生相应抗体。免疫鸡攻虫后的存活率和抗体应答的检测结果,都充分说明了此鸡球虫弱毒四价疫苗具有良好的免疫原性,所建立的ELISA方法为今后评价鸡球虫弱毒四价疫苗的免疫效力提供了有效手段。

传染性法氏囊病病毒变异株二价弱毒疫苗的研究

选用传染性法氏囊病病毒变异株 JD1、NB、HZ1弱毒株配制成 JN(JD1+NB毒株组成 )和 JH(JD1+HZ1毒株组成 )两种二价弱毒疫苗 .分别在 14日龄首免和 2 8日龄二免 SPF鸡 ,并于一免后 14d、2 1d,二免后 12 d分别用强毒株传染性法氏囊病病毒 (IBDV) BC6 / 85株攻击 ;同时观察疫苗的安全性 .结果表明 JN和 JH疫苗均能诱导 SPF免疫鸡产生优良的免疫应答反应 ,并能使免疫鸡对 IBDV-BC6 / 85株的攻击产生 10 0 %的保护 . JN和 JH疫苗的最佳免疫剂量分别为 6 0 0 0 TCID50 和 10 0 0

1991年广东省脊髓灰质炎三价口服减毒活疫苗效价监测

１９９１年广东省脊髓灰质炎三价口服减毒活疫苗效价监测郑焕英，何由成，柯昌文，郭永文，郦其昌，林协勤为了解脊髓灰质炎三价口服减毒活疫苗（ＴＯＰＶ）在冷链运转过程中效价的变化情况，及时解决冷链工作中出现的问题，我们于１９９１年对全省各级的ＴＯＰＶ进行了抽...

鸡传染性法氏囊病毒在DF-1细胞系上繁殖特性研究

对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行了研究,结果表明,HQ株不适应在Vero细胞上生长,而在DF-1细胞上能够很好的适应.经培养条件优化,最终选用pH值为7.0,血清含量体积分数为2%的DMEM/F12培养基做维持液,在细胞传代后第2天接种IBDV HQ株,接毒量为1%(约0.7MOI)后36 h收毒,毒价可达8.5 mL-1以上,是在CEF细胞上培养时毒价的10倍.HQ株在DF-1细胞上培养24～36 h上清液与全悬液毒价基本相同,维持在同一高峰.糖耗的高峰要先于病毒毒价高峰的出现,糖耗在高峰之后快速下降,当降低到接近0时病毒的毒价最高.

伪狂犬病病毒3基因缺失株(SA215)的遗传稳定性研究

测定了伪狂犬病病毒Fa株3基因缺失株(SA215)在鸡胚成纤维细胞上连续传代15代次,在非免疫仔猪体内连续传代5代次后,病毒毒价及对易感动物的安全性变化。并以核酸杂交、核酸酶切和gE-ELISA检测技术分别研究了缺失株(SA215)传代后不同代次病毒的外源插入基因(LacZ)、缺失基因(TK、gE、gI)遗传变异情况。结果表明缺失株(SA215)毒价及对易感动物安全性未发生变化,外源插入基因得到稳定遗传,缺失基因未见回复突变,证明缺失株(SA215)具有良好遗传稳定性。