黑龙江东部地区大豆疫霉病致病型及毒力分布

2007～2008年从黑龙江东部地区佳木斯、绥滨、富锦、桦川、桦南、双鸭山、抚远、密山、依兰、汤源、集贤、宝清等采集的典型病症大豆疫霉病株上分离53份菌株,用国际上通用的一套鉴别寄主(分别携带Rps1a,Rps1b,Rps1c,Rps1d,Rps1k,Rps3a,Rps6,Rps7基因),鉴定出1、13、17和三个致病型;其病原菌可以划分为四个毒性类型并初步明确了其毒力分布情况。

2012～2016年山东省新城疫病毒的毒力分布、遗传进化、糖基化位点的分析

对2012~2016年来自山东省8个地区的新城疫病毒(Newcastle Disease virus,NDV)分离株进行毒力分布、遗传进化、糖基化位点分析,结果发现近年来山东省NDV分离的阳性率整体呈下降趋势,中等以上毒力毒株所占比例亦逐年下降。病毒流行的基因型以基因Ⅶ型、基因Ⅱ型、基因Ⅵ型为主,F基因的糖基化位点等未发生较大变化。研究结果为新城疫的综合防控奠定了科学基础。

对比黏液型肺克超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达和毒力基因分布的相关性并对其耐药性进行分析

目的分析黏液型肺克(MT-KPN)的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达、耐药性、毒力基因分布情况。方法收集郑州市第一人民医院2021年3月至2022年3月非重复性KPN 725株,黏液丝试验分离出123株MT-KPN,对其ESBLs表达、耐药性使用CITEK 2 Compact系统分析,毒力基因分布情况使用聚合酶链式反应(PCR)实验分析。结果肺炎克雷伯菌(KPN)检出率最高的科室是重症医学科;同一科室检出KPN类型差异较大的是重症医学科、全科医学科、神经外科,肾内科只检出cKPN;123株MT-KPN包括ESBLs阳性菌34株、ESBLs阴性菌89株。ESBLs阳性菌耐药性高达100.00%的7种药物(头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸),ESBLs阴性菌对上述药物耐药性显著低于ESBLs阳性菌(P<0.05);妥布霉素、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P<0.05);庆大霉素、美罗培南、环丙沙星、左氧氟沙星耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P>0.05);MT-KPN的荚膜血清型基因检出率wzyK2最高;荚膜血清型基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05);MT-KPN毒力基因检出率最高的是mrkD;aerobactin、iroN、wcaG检出率相比ESBLs阳性菌<ESBLs阴性菌(P<0.05);其他毒力基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MT-KPN携带毒力基因检出率较高,临床需结合其耐药性和毒力基因分布情况合理用药。

单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布

目的建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况。方法根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测。结果建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5%,灵敏度可达100CFU/mL。对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98%、75%和98%。在可被MLST分型的89株菌株中,groupI的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupII的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupIII的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出。结论本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义。

霍乱弧菌O1群毒力基因分布和DNA分子特征

由于霍乱弧菌（ＶＣ）Ｏ１群菌株中仅有部分可以引起霍乱流行，研究其主要毒力基因分布和ＤＮＡ分子特征，已成为目前学者们关注的重要课题。应用原位杂交法对４７１株Ｏ１群ＶＣ的主要毒力基因分布情况进行检测，用核酸脉冲场凝胶电泳对其中３４株进行染色体ＤＮＡ特征和ＣＴ基因Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。结果：在ＳａｌＩ酶切图谱中，所有埃尔托流行株（ＥＳＥＶＣ）具有一致的酶切图谱；古典型菌株（ＣＶＣ）除１１１９菌与ＥＳＥＶＣ图谱相同外，其他均具有一致的特征性图谱。ＣＶＣ和ＥＳＥＶＣ之间有较微小的差异。埃尔托非流行株（ＮＳＥＶＣ）的图谱与ＥＳＥＶＣ之间有较大差异。在ＳｍａＩ和ＸｂａＩ酶切图谱中，结果与上述一致，其中ＣＴ基因缺失的ＥＳＥＶＣ菌株７７４３和８０１２７５具有较相似的ＳｍａＩ酶谱。用ｃｔｘ、ｚｏｔ、ａｃｅ、ＲＳ１为探针，对４７１株Ｏ１群霍乱弧菌进行毒力基因检测；结果：ＣＶＣ菌株全部阳性；ＥＳＥＶＣ菌株中，上述基因阳性率分别为：９７．３％、９７．５％、９７．３％、９９％；在１０株ＣＴ基因缺失的ＥＳＥＶＣ菌株中，有三株为ｚｏｔ基因阳性；在ＮＳＥＶＣ菌株中，有一株为ｚｏｔ和ＲＳ１阳性。美国海湾分离的６株产毒ＶＣ上述基因阳性。结果?

牛源产志贺毒素大肠杆菌分离株的毒力基因分布和遗传进化分析

为了探讨牛源产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)分离株在毒力基因分布和遗传进化方面与人源EHEC O157菌株之间的关系,本试验选择收集来自江苏某奶牛场的STEC菌株18株以及人源、羊源、猪源、禽源STEC参考菌株9株,参照美国疾病预防控制中心Pulse Net推荐的方法,运用XbaⅠ酶进行酶切并完成脉冲肠凝胶电泳(PFGE)分型和聚类分析;同时对部分STEC菌株进行毒力基因检测。结果表明,经毒力基因检测,不同来源的O157菌株毒力基因分布不尽相同,其中牛源STEC O157与参考株EHEC O157∶H7(EDL933W)的基因排谱最为相近;牛源STEC O18和O26的基因排谱与参考株EHEC O157∶H7(EDL933W)类似,但存在部分基因的缺失。对27株不同来源的STEC分离株进行PFGE,产生了22种不同的酶切图谱。总体来看,不同来源的STEC Dice相似性系数在72%~100%之间。牛源O157分离株与猪源及禽源O157菌株的相似度偏低,而与两株人源O157分离株的相似度偏高,Dice相似性系数在83%~95%之间,牛源O26(克隆群Ⅶ、Ⅷ)与人源O157的相似性系数>82%。显然,从牛群中分离到的部分STEC菌株与人源EHEC O157具有较近的遗传进化关系。